RNA试验基础

kunyushan 各位达人，在miR研究中遇到一个问题，想检测正常细胞和肿瘤细胞系中某miR的差别，有肿瘤细胞系，但正常细胞系未买到，且原代培养较困难，请问是否可用正常组织的miR含量与肿瘤细胞系进行比较？谢谢了freecell pubmed检索：“MiRNA PROFILE IN CANCER CELLS AND NORMAL CELLS”， 有很多paper可以解决你的疑问。例如：http://www.nature.com/cr/journal/v18 ...

yolanda0818 一边文章刚确定的miRNA启动子，我能用吗，用再验证吗.MBC的文章freecell 应该 需要先验证，再引用。zhujoker 这个我认为得看你要怎么做这个实验了，如果仅仅做miRNAs的生物学或者说是其下游的研究，我想大可不必验证之类的。但是你要做miRNAs的调控的话，我认为你应该是需要验证，但是这样的话会增加的你的实验的难道以及花费，并且如果你不能从其他方面进行论证说明的话你的文章以后也不会 ...

heartknot2001 向经常看文章的站友们问一个问题。针对Bcl2的抗凋亡作用，谁看过其上游是否有什么转录调控因子可以控制Bcl2表达的文章？或者是有，但是文章并没有充分证明，仅仅是提示可能而已？还是它不受调控呢？能回答的详细些吗？或者你手头就有这样的文章，能发给我看一下吗？我的邮箱：heartknot2001@yahoo.com.cn谢谢你的帮助freecell http://scholar.google.ie/sc ...

路得自己走 microRNA功能研究策略最近查了点关于miR功能（抑制）研究方面的文献，先说两句，抛砖引玉吧！1.细胞或在体水平应用AMO抑制miR功能。这是人工合成一段与成熟miR互补的序列与其结合，抑制其作用。优点：作用明确；操作简单。缺点：作用时间有待延长。2.基于转基因的KD：优点：作用稳定。可用于转基因动物。缺点：设计制作麻烦。（1）“反义序列”的应用：利用慢病毒合成一段成熟miR互补序列，对目标miR进行抑制。作用相 ...

tanbo110 1：Mda-7/IL-24基因是不是就是MDA-7翻译后得IL-24蛋白啊？2：MDA-D-74基因我查了GENBANK为什么查不到呢？HUMO的我看了最近看了篇 Cloning and characterization of SARI (suppressor of AP-1, Regulated by IFN).的问题hanyanyan1015 我也查不到，到底能不能查到啊。freecell The melanoma differentiation-asso ...

skybjp123 各位大哥大嫂，小弟最近在找寻 cathepsin K B L S 的相关转录因子，不知道有哪些呀？哪位牛人可否赐教，谢谢啦～～还有就是sp1是什么？兔子的sp1的基因序列怎么查不到啊？也请赐教～～谢谢～～skybjp123 另外还有就是：转录因子是怎么测定含量的？用荧光定量PCR技术可以吗？可信吗？happytears 1、转录因子可以先用相关软件预测，如TFbind TFsearch TFfact2、Sp1转录因子是参与真核细胞转录的高 ...

shelb352 我在课题中对一个转录因子的研究主要是研究转录因子及受到其调控的下游基因的功能研究，那用什么方法能发现调控这个转录因子基因表达的上游基因？是否能用酵母双杂交方法（了解不是很清楚）哪位高手能否帮忙回答一下，谢谢。shelb352 有谁能否帮忙回答一下？doge 首先声明，不是高手，仅发表个人拙见一般来说，可以找到与此转录因子同源的转录因子，看看是否在类似的信号通路上，以此来推断调控这个转录因子的上游蛋白，包 ...

小长 近一两年，microRNA作为肿瘤生物标记的文献层出不穷。microRNA真的能准确地诊断早期癌症吗？这样的诊断成本有多高？诊断要花费多长的时间？3年内会不会有一天，microRNA真的成为临床上诊断早期癌症的常规手段？要知道，目前早期癌症都是可以治疗的。癌症治疗的困难只在于，当诊断出癌症的时候，病人已经是晚期了。3年内，人类能战胜癌症吗？大家讨论一下microRNA在癌症诊断上的前景吧。有意思的话题，1分鼓励 ...

icexue82 请问 poly (IC) 这种双链RNA 的长度是多少bp啊我以前好像在哪里看过，说poly（IC）是长度不等的片段，不知道是不是，现在找不到那篇文献了，请了解的各位帮忙，给个确定的答案。因为我想用同位素标记poly (IC)，做个EMSA，所以如果poly (IC)长度不均一的话，那我做出来的结果不是有很多条带？icexue82 请大家帮个忙啊，难道没有人知道么？decrest 据我所知，poly（IC）是人工合成的长度不一的双链D ...

赵敏 我自己有课题,想开展 miRNA方面的工作,需要学习一下,可以考虑去做博士后，大家知道，给推荐几位!eagledfy 南开杨荣存做得还不错，但人品不咋地。zhongnannan911 北京军事医学科学院放射所 郑晓飞研究员zxyapple 陈润生院士本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

huxiaopenga 急！！！谢谢fzybb2003 我也准备做这样的课题，问过生物公司说要5-6万，请做过的战友也来说一下，申请经费的时候心里比较有数。gzlabtong 我以前在的公司就是专门做RNA干扰的，从设计SIRNA到包出该片段的病毒大概要30000左右，你自己要买一抗和该基因的克隆，做功能学实验，如果你要做动物实验还要考虑动物的费用。大概跟楼上的兄弟差不多bioyoung 构建载体4~5k病毒包装1.5~2w这是 ...

桂花树 已购买了Cell signaling 公司siRNA Kit，试剂盒含有已合成的目标基因siRNA序列，最近要将siRNA通过试剂盒提供的转染试剂转入人的肿瘤细胞，在实验中怎样防止siRNA降解。zgfwindman 全部的东西都用无酶的就好了zhongkui 关键是要有钱，有钱就可以买一次性的无污染试剂和用品。有钱就可以独占一个操作台或操作间，等等等等，嘿嘿：）桂花树 RNA干扰实验所用的培养板、枪头、EP管等是否要用DEPC ...

Working with RNALiving with RNaseMost researchers are acutely aware of the risk of RNase contamination, and we do not want to belabor this point or cause undue worry. We do not routinely find it necessary to treat the microcentrifuge tubes used with RNA if they are from unopened bags or from bags in which ca ...

RNA 的完整性可以通过琼脂糖变性电泳分析检测,而含量则通过紫外分光光度计确定。常见的变性电泳有甲醛变性电泳，戊二醛变性电泳等。3.1 甲醛变性电泳检测RNA完整性一、材料、试剂和仪器1 材料: 植物总RNA 5-10μg2 试剂:1）加样运载缓冲液（Loading buffer）50% 甘油1mmol/L EDTA (pH 8.0)0.25%溴酚蓝25%二甲苯氰FF2）10×TAE Buffer3）5×甲醛凝胶电泳缓冲液：0.1mol/L MOPs (pH7.0)40mmol/L ...

RNA沉默机制研究进展RNA沉默机制的研究主要集中在遗传和生化方面。遗传方面，各研究小组选择遗传突变子的筛选策略，即筛选RNA干涉功能丧失的突变基因。目前在拟南芥中已发现了SGS1、SGS2、SGS3以及SDE1、SDE2、SDE3和SDE4等多个参与RNA干涉作用的基因，（Elmayan,1998;Dalmay,2000）而在链孢霉中发现产生基因消除所必需的基因QDE1、QDE2和QDE3（Tijsterman ...

RNA分离与鉴定实验指南：RNA研究方法内容简介 　　《RNA分离与鉴定实验指南：RNA研究方法(原著第3版)》包括RNA与细胞生物学，真核基因的转录与组织，信使RNA，核糖核酸酶，RNA分离策略，从组织中提取RNA，多聚腺苷酸RNA的分离，RNA制备的质量控制，斑点印迹分析，电泳等共26章内容。目录 第1章　RNA与细胞生物学第2章　真核基因的转录与组织第3章　信使RNA第4章　核糖核酸酶第5章　RNA分离策略第6章　从组织中提取RNA第7章　多聚 ...

如何确认RNA的质量提取到质量良好的RNA（包括总RNA和mRNA，以下同）是非常困难，关于RNA的提取技术，我就不说了，为什么呢？或许各位非常关心呢，我是这样想的，我可以看到的资料或者是厂家的说明书，各位也同样可以看到的，内容当然都是一样的了，所以实验做的好不好，主要是心的投入多少的问题，所以希望大家自己多多思考啊！以下两种方法，相信大家都知道的：1）检测RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光 ...

一、RNA抽提注意事项_尽可能无RNA酶的环境下操作，最好有专门场所_耗材的处理：电泳槽需0.5 M NaOH处理过夜后DEPC水清洗试管氯仿浸泡处理后DEPC水清洗枪头和eppendorf管DEPC水浸泡后灭菌处理_实验者本身防护：一次性手套，口罩等_启盖前震荡离心管有助于防止气溶胶形成_正确的操作方式二、RNA操作常见问题分析　问题　　　　　可能原因　　　　　　　　解决方法产量太低　　　　样本裂解或匀浆不充分　　　延长匀浆时间　　　　RNA沉淀溶解不充分　　　　　　65℃加热可促进溶解A260/A2 ...

小弟最近在做荧光定量。由于荧光定量的灵敏性，一个处理组如果只做3个生物学重复（即每个处理组取3尾实验动物，分别提RNA，分别反转录，做定量），那个体之间的差异，势必会使实验结果难以分析。【以上内容可参考： http://www.dxy.cn/bbs/topic/16659187 下文中，第1种思路类似该帖中第1种情况。】为了增大样本量，以更好地估计总体，同时为了减小个体间的差异对实验的影响，且为不使试验成本过高，我身边的人有以下3 ...

RNAdraw是一个进行RNA二级结构计算的软件。1.RNAdraw 是windows下的多文档窗口(multiple documentinterface)软件，允许你同时打开多个数据处理窗口。主窗口的工具条提供一些基本功能：打开文件、导入文件、关闭文件、设置程序参数、重排窗口、以及即时帮助和退出程序。主窗口底部状态栏最左边的方框显示鼠标所在的菜单命令的提示信息，而右边三个方框提供了当前激活窗口内容的信息。2.RNAdr ...