Northern Blotting

PS刺激可以引起PDCD4表达短暂增高，PDCD4表达增高具有两种意义：第一，通过结合于IL-10的mRNA，阻止延长因子与之结合而在翻译水平下调抗炎因子IL-10的表达；第二，通过抑制NF-κB上游分子IκBα的合成而增强NF-κB的活性，促进炎症介质IL-6的合成。因此，从这个角度上讲：PDCD4是促进炎症反应的因素。

要进行北方杂合反应前，必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸（nitrocellulose membrane） 或尼龙膜 （nylon membrane） 上，这一个过程称为转印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛细管转移法 （capillary transfer）、真空转移法 （vacuum transfer） 与电转印法 （electroblotting）。 毛细管转移法借助吸水纸吸收转移缓冲液时所产生的牵引力量将RNA自洋菜胶体转移至膜上；要转印完全，起码需要作用6 h以上。 虽然所需花费的时间比较长，以其不须要特别的仪器设备，毛细管转移法目前仍被普遍采用。 若分析RNA时采用变性聚丙烯酰胺胶体电泳，则必须以电转印法进行RNA转印。至于膜的选择，硝基纤维素膜的优点是比较不会产生非专一性反应；不过其一旦被润湿再烘干的后，容易碎裂，不适用于进行多次杂合反应。 尼龙膜的优点是韧性好，与核酸结合的能力也相当强，正可以弥补硝基纤维素膜的缺点，现已成为主流。 一旦将RNA转移至膜上后，即可以利用紫外线照射法 （uv irradiation） 或真空干燥法 （在真空下80℃加热2

北方杂合反应的步骤主要包括： （1） 加入核酸探针，使与固定于尼龙膜上的特定RNA 进行杂合反应； （2） 待杂合反应结束后以含盐缓冲液与SDS 洗掉非专一性结合于尼龙膜上的核酸探针。 进行反应时应注意下列几个问题： a.实验操作过程仍应尽可能避免RNase 的污染； b.反应前应先进行杂合前置反应（prehybridization），以便减少核酸探针与尼龙膜的间的非专一性 ...

Northern blot实验步骤

Allison C. Mallory Bartel Lab Whitehead Institute

非常棒的动画制作效果，让你对于Nouthern Blot技术一目了然。

这里介绍了组织RNA的提取方法、Northern杂交步骤、相关试剂的配制说明，内容详尽，易于操作。

Northern Blot Preparation of Formaldehyde Agarose Gel The gel conditions (1% agarose 1X MOPS 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electrophoresis. If longer times are necessary the formalde ...

We found that both formaldehyde and glyoxal gels work very well for electrophoresis of RNA; we only prefer glyoxal gels because the fumes from the formaldehyde gels are unpleasant. Most protocols sugg ...

人、小鼠和大鼠的多种组织来源的高质量mRNA经电泳分离后预转于尼龙膜上 .预制的即用型Northern杂交膜，免去RNA电泳操作过程 .可检测范围：0.5-10kb .可重复使用 .提供ExpressHybTM快速杂交液样品 .可靠的优良品质 从1991年始，公司就向广大的生命科学研究者提供高质量的预制杂交膜。而MTN™膜更是在国际著名的学术期刊上有将近3000篇文献引用。 严谨的制作 ...

AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array) 同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析 同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析 检测关键基因在细胞关键功能中的角色 只需简单的杂交步骤 就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的大实验室开展。但两年前(1997)，随着Clontech公司推出AtlasTM cDNA矩阵，情况大 ...

一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳， 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝胶对RNA进行分级离，通常Northern杂交所显示 ...

1. Add the following to a sterile microfuge tube on ice: -1 ug linearized plasmid DNA. -2 ul Dig RNA Labeling Mix 10X concentrate -2 ul 10X transcription buffer -1-2 ul RNase inhibitor (DNase free) -a ...

Northern Blot Preparation of Formaldehyde Agarose Gel The gel conditions (1% agarose 1X MOPS 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electrophoresis. If longer times are necessary the formald ...

Steve Hahn. last modified Sat Oct 17 1998 Mix the following in an 0.5 ml eppendorf tube: 10-20 micrograms total yeast RNA 10 microliters hybridization mix H2O to bring the final volume to 25 microlite ...

Note: Start with 20 mg of total RNA for each labeling reaction. All solutions that can be filtered should be filtered. Cy dyes are light sensitive and should ALWAYS be handled in dim light. RNA ...