Northern Blotting

Northern Blot继分析DNA的Southern杂交方法出现后，1977年Alwine等人提出一种与此相类似的、用于分析细胞总RNA或含poly A尾的RNA样品中特定mRNA分子大小和丰度的分子杂交技术，这就是与Southern相对应而定名的Northern杂交技术。这一技术自出现以来，已得到广泛应用，成为分析mRNA最为常用的经典方法。与Southern杂交相似，Northern杂交也采用琼脂糖凝胶电 ...

NORTHERN BLOT OF RNA GELBuffers:20XSSPE (500 ml):3.6M NaCl : 105.2 g0.2M phosphate buffer pH 7.0: 100mL of 1M20mM EDTA: 20mL of 0.5MPhosphate buffer pH7.0 (500ml):NaH2PO4 (monobasic) 140 mL of 1MNa2H2PO4 (Dibasic) 360 mL of 1MpH to 7.0 after both are addedHybridization buffer =HB (100mls):5X SSPE: ...

因农民的儿子在【旧帖整理】-RNA抽提（第一个积极响应）中整理很全面，本贴也鉴签其法1, Protocol for Northern blottingNorthern Blot完全步骤NORTHERN BLOT PROTOCOL 试剂盒步骤2, 关于Northern的一些问题关于Northern Blotting的几个问题1关于Northern Blotting的几个问题2反NORTHERN杂交的问题northern blotting染色问题North ...

TRIzol是广谱型中RNA提取试剂。广泛应用于植物材料、动物组织、细胞及各种微生物等样品中提取RNA.本试剂能够提取完整的RNA。加入氯仿离心后，溶液分为三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA分布在上层水相中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、NorthernBlo ...

MicroRNA（miRNA）是真核生物中一类长度约为20-25 nt（核苷酸）的非编码单链RNA分子，在生物进化过程中高度保守，约占整个基因组基因总数2%。大量研究表明，miRNA在多种生物过程中起关键作用，包括细胞的发育、分化、增殖和凋亡等；并且功能研究已证实多种miRNA分子与肿瘤发生、发展过程相关，miRNA具有类似于致癌基因或抑癌基因的作用。 最早被发现的两个miRNAs ...

原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 实验方法： （一）仪器 恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶 ...

mRNA差别显示技术也称为差示反转录PCR（Differential Display of reverse Transcriptional PCR）简称为ddRT-PCR。它是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术。目前已广泛应用于分离鉴定组织特异性表达的基因。 差别基因表达（differential gene express）是细胞分化的基础。mRNA差别 ...

RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式，用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1. 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失，使灵敏度下降，而RPA将所有杂交体系进行电泳，故损失小，提高了灵敏度。 2. ...

继分析DNA的Southern杂交方法出现后，1977年Alwine等人提出一种与此相类似的、用于分析细胞总RNA或含poly A尾的RNA样品中特定mRNA分子大小和丰度的分子杂交技术，这就是与Southern相对应而定名的Northern杂交技术。这一技术自出现以来，已得到广泛应用，成为分析mRNA最为常用的经典方法。 与Southern杂交相似，Northern杂交也采用琼脂糖凝胶电泳，将 ...

12月份出版的《自然—方法学》刊登了一篇文章，描述了一种高通量RNA结构测定方法——“片段化测序”法（Fragmentation sequencing ，FragSeq）。相关研究由美国加州大学圣克鲁兹分校霍华德·休斯医学研究院教授索菲·萨拉马（Sofie Salama）所领导的课题组完成。

目的：了解ATP生物合成的意义；掌握无机磷的测定方法；掌握DEAE-纤维素薄板层析法测ATP的形成。原理：在适当条件下，酿酒酵母分解发酵液中的葡萄糖，释出能量，同时还利用无机磷，使AMP转变成ATP，一部分能量即贮存于ATP分子中。因此，在发酵过程中，可测得发酵液中的无机磷含量降低和ATP含量的上升。

Northern BlotPreparation of Formaldehyde Agarose Gel The gel conditions (1% agarose 1X MOPS 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electrophoresis. If longer times are necessary the formaldeh ...

1.相似性序列发生Cross－react引起脱靶效应。2.监测手段：对脱靶效应的监测一般通过基因芯片来监测。Gene expression profiling对脱靶效应。3.脱靶效应的特性：转录物表达模式有序列特异性和靶特异性两种。4.大部分脱靶效应具有siRNA序列特异性。低浓度也可能产生脱靶效应，不仅仅是高浓度能产生脱靶效应的假象。

1. Add an equal volume (equal to sample volume) of P/C to sample.2. Mix (shake don't vortex).3. Take aqueous (upper) layer. (If dirty sample repeat Ph/Chl step until interface is fairly clean).4. Add ...

・CaCl2感受态细胞的制备的实验步骤 1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）； 2．取 1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）； 3．将 0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷； 以下步骤需在超净工作台和冰上操作 4．吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml ...

前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会，谈一下质粒重组的一些个人经验。1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHIHindIII提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。 ...

分子杂交的概念及基本原理一、分子杂交的概念： 分子杂交（molecular hybridization）指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过退火处理，形成异质双链的过程。 利用这一原理，就可以使用已知序列的单链核酸片段作为探针，去查找各种不同来源的基因组DNA分子中的同源基因或同源序列。 二、分子杂交基本原理： （一）DNA变性 ： DNA变性是指 ...

EB是我们从事生命科学尤其是分子生物学经常要接触的致癌性物质且不好处理.现提供如下方法供参考.特别是刚走进实验室未生育的新同行一定得学会保护自己呵否则还涉及到下一代问题 实验室中经常有EB被打翻或EB废弃物的处理问题，如何做到标准处理？1严禁随便丢弃。因为EB是强致癌性，而且易挥发，挥发至空气中，危害很大。2废EB溶液的处理方法(1)对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下处理： a.将EB ...

细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在，其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中，核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在0.14mol／L氯化钠溶液中的溶解度相差很大，核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度，脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后，用0.14mol／L氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠，可抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的水解作用。SDS(十二烷基硫酸 ...

DNA以核蛋白形式存在于细胞核中，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。蛋白酶K及链霉蛋白酶E的应用使这两个原则得到了保证。 蛋白酶K或链霉蛋白酶E均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS和EDTA存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA分子分离，EDTA抑制细胞中DNase活 ...