感受态细胞的制备

做感受态的小女孩刚进实验室，师兄就神秘兮兮的对我说，「小师妹啊，师兄我最近要做一项非常伟大的研究，非常需要你的协助。」我：「（星星眼）好哇，要我做什么？」师兄：「听好了啊，师兄我要将扩增好的启动子序列重组到载体中，再将这个重组 DNA 分子导入细菌体内进行表达喔，是不是非常伟大？」我：「（继续星星眼）嗯嗯」师兄：「这个艰巨的任务现在就交给你啦，很简单的，你先做个感受态出来，再将我构建的质粒转进去就好了。"我：「..........（感受态是什么鬼，能 ...

luoqq1985 想请问一下这里有没有哪位会用MC1061/P3这种感受态的？因为我之前常用的是Top10和DH-5a以及JCM109，最近要新做一个蛋白的表达质粒，提示要用MC1061/P3这个感受态。所以我想知道这个感受态与其他的有何不同？实验时需要注意什么？谢谢freecell 这个质粒来自何处？为何要用MC1601/P3这个感受态？luoqq1985 这个质粒是表达人的细胞核内的一个蛋白，不是我自己构建的，是别人 ...

将待处理菌液盛于50毫升小烧瓶,先置于冰浴中30分钟，并在超声仪加入一些冰袋（超声仪预冷30分中）。以直径1厘米内插式探头插入菌液中（探头表面最好光滑），最好进行间歇式超声处理，探头距杯底0.5厘米----1.0厘米处不可接触杯底，也不可接触杯壁以防将杯壁超碎。.设置 开15秒 停45秒,12AM超10次左右。（如效果不佳如此反复以效果最佳定次数)（超声能量是100-350瓦.观察指标具体如下：1. 被处理细菌悬液的透明度和温度（完毕后 ...

通过本实验掌握大肠杆菌感受态细胞的制备。细菌处于易于吸收外源DNA的状态叫感受态。细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物黏附于细胞表面，经42℃段时间短时间热激处理，促进细胞吸收DNA复合物。1.超净工作台2.低温离心机3.恒温摇床4.高压灭菌锅5.恒温水浴锅6．培养皿（二）材料与试剂1．细菌：DH52．100mmol/LCaCl2（灭菌）3．LB培养基 ...

我曾经认识一个做博士后的家伙，这哥们竟然研究荒谬的怎么用眼睛“猜”菌液的OD值，我当时很是羡慕嫉妒恨，就在yy如果我能够直接用眼睛检测菌液的OD值，那能节省多少时间用于去把妹啊！可惜俺不是具有超能的人，不像我那哥们整个超太，拥有火眼金睛。但是想想把妹，俺日思夜想，闭门自宫（fuck，自宫了还把个pi啊），终于练就了火眼金睛，并写下《葵花宝典》供世人学习。欲练神功，必先自宫，保证除了春哥、月月之类都可以练就的。且看：Step 1: ...

摘要： 人工构建的质粒缺乏转移必需的基因不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移.这时就需要诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外DNA. 质粒制备的必要人工构建的质粒载体中一般缺乏此种转移所必需的mob基因因此不能 ...

摘要： 基因克隆菌种的保藏一般采用冷冻保藏的方法.一般是将菌种于-20℃或-80℃以下的温度保藏通过冷冻使菌体代谢活动停止.在保藏的时候通常在培养物中加入一定的冷冻保护剂（如甘油）. 基因克隆菌种保藏1、实验简介 基因克隆菌种 ...

摘要： coli TG1单菌落接种于5ml LB液体培养基中37℃下振荡培养12小时左右取50ul培养液转入5ml LB中37℃振荡培养1~1.5小时至对数生长期OD600=0.5左右.2、感受态细胞的制备⑴、将培养液1．5ml转入离心管中冰上放置20分钟.⑵、置于4℃5000rpm离心5分钟倒尽上清. ...

摘要： 采用化学脱细胞方法去除细胞和髓鞘成分制作细胞外基质支架为桥接脊髓损伤缺损提供理想的天然神经支架. 【摘要】 ［目的］采用化学脱细胞方法去除细胞和髓鞘成分制作细胞外基质支架为桥接脊髓损伤缺损提供理想的天然神经支架.［方法］取S ...

摘要： 本文主要介绍了用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌的实验方法.下面的方法是对Cohen等于1972年发表的方法更为便捷的修改. 下面的方法是对Cohen等于1972年发表的方法更为便捷的修改.这一方法可以用于批量制备感受 ...

摘要： 报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因.把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因或与其它目的基因相融合在调控序列控制下进行表达从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控筛选得到转化体. ...

摘要： Stratagene的XL10-Gold®几乎算得上是高效转化的代名词了研究者一旦要克隆大质粒、连接DNA和建库克隆甲基化DNA进行蓝白斑筛选等首选的就是XL10-Gold®和其衍生菌. 国外的同学说一般他们克隆都是 ...

摘要： 碧云天生产的超级感受态细菌制备试剂盒(Supercompetent Cell Preparation Kit)是一种用于快速制备高转化效率大肠杆菌感受态细菌的试剂盒.超级感受态细菌制备试剂盒是在传统超级感受态细胞制备方法的基础上进行适当改良而成操作便捷转化效率高. ...

摘要： 本文主要介绍了各种感受态细胞的区别、用途和特征. Xl1-Blue菌株基因型：endA1 gyrA96（nalR） thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F' hsdR17（rK- mK+）.特点：具有卡 ...

摘要： 目前感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备即用低渗CaCl2溶液在低温（0℃）时处理快速生长的细菌从而获得感受态细菌.本方法的关键是选用的细菌必须处于对数生长期实验操作必须在低温下进行. 原理： 目 ...

摘要： 根据实验室的实际情况我们将其稍作修改做成了GLP文件但其中仍有许多可改进或需要注意的地方其中有一些对普通感受态效率的提高也有一定的帮助. 关于大肠杆菌的感受态制备及转化的方法很多最复杂的莫过于电转化而最简单的则是将L ...

摘要： 本文主要介绍了大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法. 第一天：1. 将适合菌株（如XL1-Blue DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上在37°C下过夜培养2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶 ...

摘要： 常态的细胞不能摄入外部溶液中的DNA所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞.受体细胞经过一些特殊方法（如：CaClRuCl等化学试剂法）的处理后细胞膜的通透性发生变化成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) . ...

摘要： 为了满足广泛开展BrdU标记DNA检测对BrdU特异性单抗的需要我们制备了一株产生BrdU单抗的杂交瘤细胞株.本文对此细胞株制备过程及单抗鉴定情况作了简单叙述. ...

摘要： 探讨利用杂交瘤技术制备肿瘤疫苗的方法研究肺癌树突状融合细胞的生物学特征. 摘　要：目的　探讨利用杂交瘤技术制备肿瘤疫苗的方法研究肺癌树突状融合细胞的生物学特征.方法　　用PEG法将HGPRT缺陷型Lewis肺癌细胞株AL99 ...