DNA原位杂交技术

流式细胞术（flowcytometry，FCM）是一种综合应用光学、机械学、流体力学、电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术，使被测溶液流经测量区域，并逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性，从而对高速流动的细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析的方法。 首先，待测细胞经处理或染色后被压人流动室，与此同时，不含细胞的缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管人口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能被包绕着样品高速流动，组 ...

常用的高通量基因和蛋白检测方法包括表达谱芯片、microRNA芯片、二代测序、蛋白质谱及代谢组学分析（2-D、MALDI-TOF-MS、iTRAQ），充分利用这些方法和工具能够起到事半功倍的效果，加速研究进程。仪方生物会陆续推出一系列关于上述技术的案例介绍说明，希望能够为对高通量技术感兴趣的研究者提供有益的帮助，了解技术进展和具体应用，从而掌握相关的技术思路和方法。miRNA（microRNA）表达谱芯片应用案例和 ...

摘要骨髓间充质干细胞（MSC）为组织工程学和再生医学带来重大希望。临床及临床前对MSC的应用需要它们在培养基中以最大效率扩增，并且维持分化为主要细胞系的能力。胎牛血清（FBS）是一种体外维持hMSC生长的要素，但是批次之间的差异能明显影响实验结果。为了制造能始终如一地使hMSC最优扩增的生长培养基，我们测试了几种来源的FBS的不同浓度。我们的结果表明FBS样品间的扩增效率差异很大，一次传代后可扩增1.8至4.2 ...

一、PBMC精确计数和活性分析的重要性外周血单个核细胞（PBMC）在免疫学、传染病、肿瘤学、干细胞移植、恶性血液肿瘤以及疫苗开发等领域被广泛的研究，尤其是在免疫学领域，PBMC细胞被用来监测在不同患者之间的免疫功能，其监测浓度、活力、增值、细胞因子的功能，对于临床试验和细胞医学研究都是是至关重要的。PBMC通常从分离于全血或者采集于病人的脐带血，这个过程就需要使用淋巴细胞分离液从血浆，血小板，和红细胞（RBC）中分离 ...

最近，日本东京大学研究者在Nature上发表论文，公布了他们关于家蚕性别决定的最新进展。在论文中，研究者描述了他们所发现的一个piRNA—FempiRNA，并详细阐明了该piRNA的来源及其在家蚕性别决定机制中的关键作用。不同于哺乳动物，家蚕的性染色体为WZ型，雄性有两个Z染色体，而雌性则有一个W染色体，一个Z型染色体。家蚕的性别决定是在胚胎形成早期完成的，之前的研究已经发现，W染色体决定胚胎是否会发育成雌性成 ...

细胞：1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。2.药物浓度的设定。一定要多看 ...

FuGENE6（Roche）转染步骤：转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。3. 加入1-2 ug的 ...

原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测，与免疫组化技术的结合应用，能将DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年Pardue和Gall将放射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交，此后得益于分子克隆技术的发展，及不同探针标记系统和检测系统的应用，大大增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。多种探针标记检测系统基于地高辛、生物素和荧光标记分子的 ...

穿着印有驱动蛋白（Kinesin）T恤的 Ronald Vale 本文作者：罗纳德·韦尔 罗纳德·韦尔博士（Ronald D. Vale）是加州大学旧金山分校（UCSF）的细胞与分子药理学教授。研究方向是驱动蛋白和动力蛋白分子马达。他在 2012 年与迈克尔·希茨和詹姆斯·斯普迪赫同获拉斯克基础医学研究奖。他是 ...

过去关于造血发生的研究主要集中在信号和转录因子，然而近期的研究热点主要是包括microRNAs的表观遗传调控。本文研究者发现在斑马鱼和小鼠中，miR-142-3p在造血干细胞（HSCs)中特异性表达。敲除斑马鱼的miR-142a-3p基因导致主动脉-性腺-中肾(AGM)区的HSCs数量降低，同时胸腺中的T细胞数量也降低。从机制上来讲，miR-142a-3p通过抑制干扰素调节因子7（irf7）介导 ...

β-氨基酸，又称作3-氨基烷基羧酸，是指氨基连在羧酸的β位的氨基酸，除没有β位的甘氨酸外，其余19种α-氨基酸都有对应的β-氨基酸。根据侧链在β-氨基酸上的位置，β-氨基酸可分为β3-，β2-以及β23-氨基酸，几种β-氨基酸的化学结构如Fig.1所示。与α-氨基酸相比，其 ...

最近有一些战友对荧光原位杂交技术比较感兴趣，我整理了相关资料和自己的心得，和大家交流一下。不妥之处，请大家指出，共同讨论学习。 内容发布在丁香园和螺旋网上，有兴趣的战友也可以去那里看一下。 内容分三部分： 一、概述 1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征 2、染色体异常常见的类型 3、染色体异常的检测方法 二、荧光原位杂交及其探针 1、荧光原位杂交的原理 2、荧光原位杂交的探针 三、荧光原位杂交探针的 ...

以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配 ...

作者：胡珺、王隽、伍约红 随着代谢组学的发展，已经有越来越多的领域开始在用代谢组学方法来进行研究，因此用于代谢组分析的样本也多种多样。本文拟从动物、植物、微生物等几个主要方面，对这些不同样本的制备方法做出相应介绍，旨在为各位研究人员的实验提供一个具体参考。 1、动物样本的制备方法 a) 血液样本制备 i. 采集血液样本，通常会在采集后于室温下放置30 min以上，等待蛋白质的凝结 ...

一、实验原理 Dynabeads Human Treg Expander offers a simple method for expansion of Treg cells that does not require antigen- presenting cells or antigen. Just add Dynabeads? Human Treg Expander and recombi ...

一、材料 1. Resazurin细胞活力检测试剂盒（Biotium，Inc.30025） 2. 细胞：在本试验中，使用了三种人类前列腺癌细胞系进行检测。 （1）DU145（ATCC，HTB-81） （2）PC3（ATCC，CRL-1435） （3）LNCap（ATCC，CRL-1740） 二、仪器 1. SpectraPLUS酶标仪 &n ...

一、荧光原位杂交技术发展历史 1969年，Gall，Pardue和John等人，分别独立建立了同位素原位杂交技术。 1974年，Evans，第一次将染色体显带技术和原位杂交技术结合起来，提高了基因定位的准确性。 1975年，Manning等人，最先在溶液的分子杂交中，使用非放射性标记，通过细胞色素c将生物素与RNA分子连接起来。 1977年，Rud ...

一、荧光原位杂交（FISH） 是一种简单、敏感、而容易操作的方法，结果迅速，并能在同一标本上检测多个不同的基因，可应用于细胞培养、染色体分裂像、冰冻切片和石蜡切片。 FISH技术是利用特异的DNA探针，标记了生物素，地高辛、或荧光素，对检测细胞进行DNA-DNA原位杂交，并用荧光法显示。 FISH实验步骤 试剂配制： （1）变性液（70%甲酰胺 + 2×SSC，pH7.0）：4 ...

一、预处理 1. 脱蜡至水 （1）二甲苯5分钟，2次 （2）100%酒精1分钟，2次 （3）95%酒精1分钟，1次 （4）85%酒精1分钟，1次 （5）双蒸水1分钟，3次 2. 加热预处理 （1）热预处理液（试剂盒内带）加热至98-100℃时，放入切片，15-20分钟。 （2）双蒸水洗1分钟，3次 3. 胃蛋白酶消化 （1）将胃蛋 ...

一、地高辛（Dig）标记DNA探针在石蜡切片上的检测方法 1. 组织切片的预处理 （1）固定：组织以10%中性福尔马林液，常规石蜡包埋，切片厚4-6 μm，最好用硅化玻，60℃烤片6-8 h。 （2）脱蜡至酒精。 （3）入0.2 mmol/L HCl 20 min 去除蛋白。 （4）50℃2×SSC，含5 mmol/L EDTA溶液中30 min。 （5）蛋白酶K（ ...