DNA原位杂交技术

免疫组化、Western、ELISA，免疫学三大工具，分别用于定位，定性和定量。 IHC(免疫组化Immunohistochemistry)是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等)，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织(细胞)内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核 ...

PCR产物一般都含有过量的引物、Taq DNA酶及dNTP，这些成分的存在将直接影响到后续的酶切、双脱氧PCR测序反应等过程，因此有必要除去。目前核酸纯化的方法有很多，商用化试剂盒的出现使得DNA的纯化过程变得更加简便快捷。PCR产物纯化回收试剂盒（SunShinecleanTM PCR Product Recovery kit）可简单、快速、有效的从PCR反应或其它各种酶促反应液中纯化Dundefined*段。根据回收片段大小不同，最高回收率 ...

做LAMP实验有一年多的时间了，其间共做了3个关于LAMP的课题，目前为止基本没有污染~尤其是自己的毕业论文，用完了500uL的 FIP，全部开盖跑电涌，没有一次污染。今天为止做完了所有毕业实验，坐下来总结一下自己的心得~~我只是个小硕士生~~所以都是在浅显的方面叙述，希望大家不要鄙视~~首先感谢一下LAMP交流群，没有这么多老师和同伴在，我不可能顺利毕业。。比较可惜的是群里现在人满了。。下面开始正文~~1. 引物我一共用过8组 ...

DNA实验室解决方案之PCR室污染监测及防御2012年全国司法及血液中心国际标准DNA实验室观摩会将在明年6月于青岛国际会展中心举行，这次观摩会秉着打造全球顶尖展会的理念，将展示具有世界一流水平，符合国际标准的DNA实验室样板间。并将在展示过程中向参会人员免费发放实验室解决方案，本文就是日前由组委会展示的该系列方案中的一部分。PCR反应最大的魅力是扩增力能与高灵敏度，但易污染一直是困扰各实验室的大问题，极 ...

(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)技术在活细胞生理条件下无损伤的研究蛋白质-蛋白质间相互作用》FRET基本原理荧光共振能量转移是指两个荧光发色基团在足够靠近时，当供体分子吸收一定频率的光子后被激发到更高的电子能态，在该电子回到基态前，通过偶极子相互作用，实现了能量向邻近的受体分子转移（即发生能量共振转移）。下面以GFP的两个突变体CFP（cyan fluorescent pr ...

绿色荧光蛋白GFP来源及生化特性: GFP 主要来自两种海洋无脊椎动物,西南太平洋水母———Aequorea victoria 和佐治亚沿海水域的三色堇———Renilla renifomis 。上述来源的GFP ,其原始发光蛋白基团具有将蓝色的化学发光演变为绿色荧光的生物发光特性。Plinythe Elder 于公元1 世纪最早报道了这种生物发光现象。20 世纪60 年代以来,Blinks 等实验室先后研究了GFP 的生物化学特性。野生型GFP (wt2GFP) 的分子 ...

核磁共振技术在结构生物学研究中的应用颜贤忠(国家生物医学分析中心)1. 前言人类基因组计划提供了大量新的信息，并由此改变了生物学研究的方式。这些信息特别在结构生物学领域产生巨大影响，导致了一个新的研究领域的产生，这就是结构基因组学，或者叫做基于结构的功能基因组学。基因组学的主要问题之一在于它不能确定新的基因产物的生物学功能，而这正是功能基因组学要解决的问题。利用新的基因与已知功能基因之间的序列同源性比较，人们在发 ...

原位杂交的基本方法一、组织的取材注意事项：刀要锋利、不能用力向下挤压组织； 组织块不宜过大、及时固定。二、固定（一）原则：及时固定、避免RNA酶的污染4％多聚甲醛（0.1M PBS PH7.4，可加1/1000的DEPC）,动物实验标 本最好先灌流固定。（二）固定液的浓度、固定时间及温度要适宜1 浓度越高组织结构保存的越好，但mRNA的保存越差；2 固定时间越长，mRNA破坏的越多；做原位杂交组织固定时间不宜过长，一般24h，不能高温固定（微波可使组 ...

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原位杂交的教程及问题分析,可以帮助分析杂交试验失败的原因.目录第一节 原位核酸分子杂交技术的发展?第二节 原位杂交技术的基本方法?(一)固定?(二)玻片和组织切片的处理?(三)杂交?(四)杂交后处理?(五)显示?(六)对照实验和结果的判断?第三节 原位DNA和DNA分子杂交方法?(一)地高辛(Dig)标记DNA探针在石蜡切片检测病毒DNA的方法?(二)生物素标记HPV-DNA探针在石蜡切片上检测HPV-DNA的方法?第四节 RNA原位核酸杂交方 ...

FISH操作前为石蜡包埋组织切片推荐的预处理程序试剂：2% 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane， Sigma)、丙酮、二甲苯、酸性亚硫酸钠（sodium bisulfite ）、蛋白酶K、2XSSC、0.1M HCl、70%乙醇、85％乙醇、100％乙醇预处理程序：1.将载玻片浸入2% 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane， Sigma Chemical Co., St. Lo ...

Nonradioactive In Situ HybridizationApplication ManualTo select a chapter section, click on the corresponding page number.The chapters below are in Acrobat PDF format .Chapter 1General Introduction to In Situ Hybridization General Introduction to In Situ Hybridization 9I ...

　DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用　　一、DNA探针的应用　　虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针，但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。　　在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同，所不同的是：（1）杂交时需先在高温80～95℃短时处理，使DNA探针及细胞内靶DNA变性，解离成单链，迅置于冰上冷却。然后置于37℃～42℃杂交过夜。（2）RNA酶的溶液的冲洗不能减低背景，因此，在操作步骤中 ...

总结了丁香园上各位战友的经验，并且总结了sigmaMTT试剂盒和MTT试剂的资料。想进一步交流可以加我的个人微信号：babagowhere。MTT原理：MTT是一种检测细胞功能的方法。细胞在活化增值的过程中，线粒体的能量代谢能够把MTT代谢为蓝紫色的甲臜，甲臜沉积于细胞内或细胞周围，形成甲臜的量与细胞活化的程度成正比，通过盐酸异丙醇或其他溶剂溶解甲臜，用酶标仪测溶液的光密度就可以反映甲臜的量并从而判断细胞活 ...

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；（5）酶联物（结合物）及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。 1　免疫吸附剂　　已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃ ...

抗碱血红蛋白正常范围：男性0.17%～2.27%；女性0.13%～1.56%；新生儿55%～85%，2～4个月后逐渐下降，1岁左右接近成人水平。 检查介绍：利用血红蛋白F对碱性物质有较大的抵抗力，而其他的血红蛋白无此特性，以此来检测血液中血红蛋白F的量。 临床意义： 抗碱血红蛋白测定主要用于溶血性贫血的病因诊断。医学教育|网搜集整理 增多见于β珠蛋白生成障碍性贫血、某些再生障碍性贫血、急性白血病、铁粒幼细胞贫血、先天性球形红细胞增多症、多发性骨 ...

祝贺MIT张锋研究组所取得的重要发现，并感谢他们选用来自Sellckchem的高质量产品。 自2013年以来，CRISPR/Cas9成为目前最热的基因编辑系统。MIT的科学家对CRISPR/Cas9进行了改造。现在，科学家可以用这一技术在细胞中有效启动任何基因，更简便地研究不同基因的功能。这一成果发表在2014年12月10日的Nature杂志上。领导这项研究的张锋（麻省理工学院脑与认知科学助理教授、McGovern ...

作者：中国人民解放军总医院 微生物科——罗燕萍 如果实验室不能通过确认该微生物而预测其药物敏感性，抗生素敏感性则是对引起感染的微生物进行抗生素化疗的有效指征。敏感性试验常可用来判断该病原体属于某一种对几种常用抗生素具有耐药性的细菌。 实验室可以用多种方法来衡量体外细菌对抗菌药物的敏感性。在许多临床微生物实验室，琼脂纸片扩散法常规用来检测常见、生长迅速和一些苛氧的细菌病原体。临床和实验室标准协会（CLSI）文件M02-A11 ...

胡云建，主任检验师，北京医院临床微生物室主任，中华检验医学杂志编委、协和医学杂志编委，卫生部实验室病原菌实验室生物安全评审专家，获卫生部科技进步二等奖一次，北京市科技成果三等奖二次，以第一作者或通讯作者发表文章60余篇，参加编写10本专著和2本译著。 摘要：对于血流感染患者需在治疗窗期间采取包括应用抗生素在内的适宜的治疗方案。血流感染治疗的最佳方案是首先经验应用广谱抗生素，再及时根据可靠的微生物和临床结果去调整治疗 ...

心肌缺血 心肌缺血是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。 血压降低、主动脉供血减少、冠状动脉阻塞，可直接导致心脏供血减少；心瓣膜病、血粘度变化、心肌本身病变也会使心脏供血减少。另外，心脏氧需求量增加，则引起心脏相对缺血。 资料显示，冠心病是引起心肌缺血最常见的病因。 心肌缺血会导致心肌受损，使心肌收缩功能下降，引起心肌不同程度的损伤。 如果心肌缺血被迅速纠正，则对远期预后的影 ...