DNA酶切相关技术

T-RFLP中文可翻译为：末端限制性片段长度多样性，又可以称为16sRNA基因的末端限制性片段分析技术。是一种新兴的研究微生物多态性的分子生物学方法，日亦受到研究人员的重视。该技术已经成功应用于各种微生物群落的分析比较、研究微生物群落多样性及结构特征等多方面。 T-RFLP的技术原理是根据的保守区设计通用引物，其中一个引物的5‘末端用荧光物质标记，常用荧光物质有HEXTET6-FAM ...

Restriction enzyme digestions are performed by incubating double-stranded DNA molecules with an appropriate amount of restriction enzyme in its respective buffer as recommended by the supplier and at ...

一、 DNA 酶切反应 1、 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl再加入重蒸水使总体积为19μl将管内溶液混匀后加入1μl酶液用手指轻弹管壁使溶液混匀也可用微量离心机甩一下使溶液集中在管底。此步操作是整个实验成败的关键要防止错加，漏加。使用限制性 ...

alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f ...

下表中列出了最适温度不是37°C的限制性内切酶在37°C条件下的酶活性。 酶 最适温度 37℃%活性 ...

Prepare a 100 µl reaction mixture containing the DNA of interest in the appropriate 1X restriction enzyme buffer. Divide the reaction mixture between five prechilled microcentrifuge tubes such t ...

Materials: 10X restriction enzyme buffer (see manufacturer's recommendation) DNA sterile water restriction enzyme phenol:chloroform (1:1) 1.Add the following to a microfuge tube: 2 μl of appropria ...

1. Cut DNA with 5'- and 3'- overhangs gel check phenol-Sevag extract and NaOAc/EtOH ppt. 2. Prepare one S1 nuclease tube (on ice) for each time point: 15ml S1 Buffer + 0.25U S1/ml (5U). 3. Us ...

一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如果减少酶的用量，对许多酶来说，相应延长反应时间（不超过16小时）也可完全反应。二、 选择正确的酶不言而喻，选择的酶在底物DNA上必须至少有 ...

Restriction Enzyme Buffer Most enzymes can use REact buffers; however, some are made up separately. Use fresh Milli-Q water , siliconized or sterile glassware or disposable plastic ware to make the following stock solutions up fresh (discard after use), combine to make 5 ml of 10X reaction buffer ...

限制酶在各种NEBuffer 中的活性 (NEBuffer Activity Chart for Restriction Enzymes) 对应每一种限制性内切酶，New England Biolabs 均提供彩色盖子的10X NEBuffer，以保证100%活性。下面表格中列出每一种酶及其随酶提供的最适宜的NEBuffer。同时也列出每种酶在四种不同的NE ...

第一节 概 述 一. DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子，然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性 ...

一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如果减少酶的用量，对许多酶来说，相应延长反应时间（不超过16小时）也可完全反应。二、 选择正确的酶不言而喻，选择的酶在底物DNA上必须至少有 ...

alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f ...

A simple reversible way to a stop restriction reaction is by adding EDTA which chelates Mg2+ thereby preventing catalysis. If further manipulations of the digested DNA are to be performed the restric ...

UV shadowing is a technique for visualizing nucleic acids separated on acrylamide/urea gels. The technique utilizes shortwave UV light (254 nm) and a fluor-coated TLC plate. We recommend UV shadowing as the method of choice for gel purification of nonisotopic probes synthesized with Ambion's MAXIscript™ and BrightStar™ Psoralen-Biotin Kits. The alternative to UV shadowing is staining with ethidium bromide or acridine orange and requires subsequent extraction of the dye. The detection limit of UV

单位定义限制性内切酶的一个活性单位是指，在50μl 的反应体系里，采用随酶提供的 NEBuffer，用1个小时的时间，彻底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反应应在带盖的Eppendorf 管中进行，选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前，浓缩的酶应该用推荐的贮存液稀释成大约1,000 单位/ml。质量控制所有质量控制鉴定结果都公布在随酶提供的技术数据卡上。非特异性内切酶鉴定为鉴定非特异性内切酶污染，限制性内切 ...

限制性内切酶可特异地结合于一段被称为限制酶识别序列的DNA 序列位点上并在此切割双链DNA 。绝大多数限制性内切酶识别长度为4、5或6个核苷酸且呈二重对称的特异序列，切割位点相对于二重对称轴的位置因酶而异。一些酶恰在对称轴处同时切割DNA 双链而产生带平端的DNA 片段，另一些酶则在对称轴两侧相对的位置上分别切断两条链，产生带有单链突出端（即粘端）的DNA 片段。1个单位限制性内切酶是指在最适条件下，在50μl体积1小时内完 ...