DNA文库的构建及其筛选

本文主要介绍了克隆筛选的一般流程

本文主要介绍了一些具有代表性的基因组文库

本文主要介绍了连接、转化与重组分析整个过程

本文主要介绍了DNA重组的两种类型

The overall sequence of events is: • Titer and plate out phage • Lift plaques onto filters and prepare them for screening • Make a probe • Hybridize the probe to the filters • Wash the filters and exp ...

Choice of bacterial strain: The bacterial E. coli strains we use when plating out cDNA and genomic libraries are normally LE392 and NM538 but some times we also use XL1-blue cells. Streak out bacteria ...

1) The ligation mixture contains the following:vector (~100 ng)　　insert (equimolar or 2 or 3 X molar concentration of vector)　　water added to 18 µl2) Heat the mixture at 45 ℃ for 5 min. to melt any an ...

This method is after MarchukD.et al.1991Nucl.Acids Res.19(5)pp1154. You will need:10 x Taq buffer (Promega)Taq Polymerase (Promega)Phenol/chloroform mix100mM dTTPTE bufferAbsolute ethanol70% ethanol 1 ...

Prepare a ligation mix: ...

Linker Ligation (with T4 ) DNA LigaseIn a microcentrifuge tube prepare a solution of blunt ended dephosphorylated DNA (100-500ng) in TE buffer (5-7µl). Add 1-2µg of phosphorylated linkers in 5µl of TE ...

Miniprep of BAC DNA1.Inoculate 4 - 8 tubes of 3ml/tube LB with 15μg/ml chloramphenicol with BAC clone and grow oveernight. Miniprep with AutoGen 740 according to the protocol described in our Web p ...

cDNA文库构建的过程分为六个阶段： 阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链 阶段2：cDNA第二链的合成 阶段3：cDNA的甲基化 阶段4：接头或衔接子的连接 阶段5：Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA 阶段6：cDNA与λ噬菌体臂的连接阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链1.在置于冰上的无菌微量离心管内混合下列试剂进行cDNA第一链的合成： poly(A) RNA (1μg ...

经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选，本文介绍的是在传统方法上进行改进后的方法，适用于铺平板和筛选未扩增的文库。菌落可转移到硝酸纤维滤膜或尼龙膜上。在某些情况下，还可以根据需要在筛选之前对文库进行扩增，扩增方法本文也作了介绍。

据外媒体5月12日（北京时间）报道，美国杜克大学研究人员称，他们利用携带全部生命信息的DNA（脱氧核糖核酸）的独特双螺旋结构，将经过改造的DNA片段和其他分子进行简单混合，即可制造出无数个同样的、细小的、像华夫饼干一样的器件。利用这种技术，将来或只需一天时间就可达到现在全球每月的芯片生产量。

一个基因文库中应包含的克隆数目与该生物的基因组的大小和被克隆 DNA片段的长度有关。原核生物的基因组较小，需要的克隆数也较少；真核生物的基因组较大，克隆数需相应增加，才能包含所有的基因。

一个基因文库中应包含的克隆数目与该生物的基因组的大小和被克隆 DNA片段的长度有关。原核生物的基因组较小，需要的克隆数也较少；真核生物的基因组较大，克隆数需相应增加，才能包含所有的基因。

一个基因文库中应包含的克隆数目与该生物的基因组的大小和被克隆 DNA片段的长度有关。原核生物的基因组较小，需要的克隆数也较少；真核生物的基因组较大，克隆数需相应增加，才能包含所有的基因。

VHCDR3基因文库和VL基因的扩增：设计并合成含有CDR3随机化序列的VHFOR引物。 配制2个50ul PCR反应混合液，1个用于VH基因的扩增。

PCR剪接VHCDR3基因文库和VL基因构建scFv基因文库：用于连接scFv和pHENl DNA以及将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备FDSEQ引物。

构建人VH基因节段文库：配制3个各自独立的50ul PCR反应混合液，包含……在有加热盖的热循环仪内加热反应物到94℃，5分钟……在1.5%琼脂糖胶上胶纯化VH基因文库并用Genecleall试剂盒提取DNA.