DNA文库的构建及其筛选

微生物基因组编辑微生物被广泛应用于制药、农药生产、食品工业、能源以及一系列新兴的应用，通过对微生物开展基因组研究，不断发现新的特殊酶基因及重要代谢过程和代谢产物生成相关的功能基因，并将其应用于生产以及传统工业、工艺的改造，在生物制药、污染治理、能源及化学品生物制造产业具有一定的应用价值。早期的菌种改造主要集中于随机筛选和简单的理性筛选，但是传统方法耗时、费力、工作量大且诱变结果不具定向性的缺点随着时间推移也逐渐 ...

动物模型构建CRISPR-Cas9 系统作为最新一代基因编辑技术，能够简便高效地实现基因组精确 修饰，是制备哺乳动物疾病模型的重要工具。目前科学家利用 CRISPR-Cas9 技术在动物模型，如小鼠、大鼠、猪 和猴等研制方面做出一系列重要工作。如科学家们将 CRISPR-Cas9 系统导入小鼠受精卵，成功获得了有特定基因突变的小鼠模型，并获得近乎 100% 的基因靶向突变效率，极大地降低了基因编辑小鼠模型制备的难度和成本，有望被广泛应用。背景：使用 ...

littleyan0418 我现在的任务是要构建人肺癌细胞的cDNA文库，但我不是这个方面科班出身，好多地方还不是很明白，想请教师兄师姐的经验，应该注意些什么。现在对总RNA的提取我有点找不出头绪。麻烦师兄师姐们可以给我分享些这方面的资料和网址吗？非常感谢！！neuronboy http://www.takara.com.cn/ 价格、试剂盒和说明书都有。呵呵littleyan0418 谢谢啊！！！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用 ...

liushuitao 比如 骨形态发生蛋白BMP、转化生长因子-β1 TGF-β1 、骨钙素 OCN 、碱性磷酸酶ALP等，已知这些蛋白，怎么从文库中找到与其对应的RNA或DNA呢？小弟学临床的，对这些了解较少，现写标书要用，望各位大侠赐教。找的方法步骤越详细越好，不甚感激！:)zhujoker 建议借一本生物信息学的书，比如生物信息学与功能基因组学 = Bioinformatics and functional genomics作者: 佩夫斯纳,(Pevsner, J ...

真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3'末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5'端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA（即RACE），曾经是一个令人困扰的问题。常见的做法是在合成cDNA的双链后在两端连上接头，利用已知的接头序列再进行扩增 ...

1.核酸序列数据库•BIOSINO 我国的核酸序列公共数据库•EMBL - EMBL Nucleotide sequence database (EBI) *•GenBank - GenBank Nucleotide Sequence database (NCBI) *•DDBJ - DNA Data Bank of Japan *•dbEST - Database of Expressed Sequence Tags (NCBI)•dbSTS - Database of Sequence Tagged Sites (NCBI) 　2.基因组及相关数据库 Ge ...

在做病毒包装实验中，有科研工作者常遇到：用同样一个病毒载体系统进行病毒包装实验，为什么有人做的很好，次次成功，有人却是时常做不出来，稳定性很差，不是滴度低就是根本不出毒?从我们对不同载体系统病毒包装的多年经验总结，主要以下几个方面心得：第一，病毒包装的几个关键节点就是细胞因素、载体系统(尽量使用成熟的商业化载体系统)、构建重组的质粒正确与否、质粒抽提纯化情况、包装转染控制(24、48 小时的细胞及荧光状态判断)、目的基因 ...

以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293FT细胞。1、取1.5 ml灭菌EP管，加入1.5 μg包装混合质粒和0.5 μg表达质粒以及250μl的无血清Opti MEM。轻柔混匀，室温孵育5 min。2、取1.5 ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250 μl无血清Opti-MEM I培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20 min。4、用胰酶消化并记数293FT细胞。用含血清的DMEM ...

基因组DNA文库用途十分广泛，如用于人类及动植物基因组学研究，基因表达调控研究，分析、分离特定的基因片段等。通常情况下，基因组文库构建的基本流程可以归为四大步骤：分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。一、分离基因组DNA（gDNA） 毫无疑问，高质量的。二、基因组DNA对于基因组文库构建是至关重要的。需要通过经验来选择合适的基因组DNA 分离方法，在分离 过程中保证 ...

基因组文库- 概述用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA，可以得到大量的基因组DNA片段，然后将这些DNA片段与载体连接，再转化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。这样，一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段，这样的一套克隆就叫做基因组克隆；其中克隆的一套基因组DNA片段就叫做基因组文库.将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段，并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内 ...

作者：Cara Sutcliffe M.S. •Jill Pulley M.B.A.•Janey Wang M.S.•Brandon Martin•Dan Masys M.D.•Dan Roden M.D. Vanderbilt Unive ...

使用SQSamples样品管理系统可采用图形导航方式方便、快捷地建立属于自己的样品库。 一、软件安装 1. Win7系统请关闭UAC完成后，请重新启动计算机。 2. 在安装路径下运行安装程序setup.exe，按全默认安装，如有提示访问属性，请选择允许访问。 二、从桌面启动SQSamples系统 1. 桌面启动图标 2. 登录密码 ...

概述 cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板，逆转录形成的互补DNA（cDNA）与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。cDNA文库特异地反映某种组织或细胞中，在特定发育阶段表达的蛋白质的编码基因，因此cDNA文库具有组织或细胞特异性。 cDNA文库显然比基因组 ...

据美国物理学家组织网7月4日报道，最近，牛津大学科学家首次开发出一种由DNA(脱氧核糖核酸)制造的分子“笼子”，能进入活细胞内部并在其中生存，由此可能带来一种有效的药物递送新方法。研究论文发表在美国化学学会《ACS纳米》电子期刊上。 这种DNA“分子笼”由牛津大学物理学家和分子神经科学家共同开发，由4条人工合成的DNA短链构成，这些短链能自行组装成 ...

据美国物理学家组织网近日报道，美国卡内基学院、加利福尼亚大学洛杉矶分校与美国能源部联合研究院利用先进的计算机工具，分析了28种植物中与光合作用相关的基因组，编制出与光合作用有关的597个编码基因蛋白的详细目录，从而可更好地从基因学角度研究支撑植物生理与生态的各种生物过程。研究论文发表在最新一期《生物化学杂志》上。 这597个来自植物和绿藻基因组的编码蛋白，称为GreenCut蛋白质，是光合生物特 ...

酵母双杂交文库 蛋白质和蛋白质的相互作用是很多生命现象的基础，酵母双杂交及其衍生技术将在功能基因组学和蛋白质组学的研究中发挥越来越重要的作用。 酵母双杂交(yeast two hybrid) 技术是利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间的相互作用，被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域已成为分子生物学研究领域的重要实验手段之一获得了许多有价值的重要发现。该方法建立以来，经过不断的完善 ...

视频讲述了大规模插入片段环境基因组文库的构建过程，包括从垂直深度统一连续的季节性缺氧峡湾采集DNA样，大体积微生物量过滤以及DNA提取和纯化等方法。

植物转基因技术 (1)农杆菌介导转化法 将外植体放入含有外源基因的农杆菌(Agrobacteriumtume／ociens)菌液中浸泡，然后转入共培养基，再转入筛选培养基诱导抗性愈伤组织和抗性芽，生根后的抗性植株移栽至营养钵生长。 (2)基因枪法 又称微弹轰击法。其基本原理是将外源DNA黏附在微小的金粒或钨粒表面，然后在高压的作用下，微粒被高速射入受体细胞或组织，微粒上 ...

文库构建和模板准备 克隆染色体DNA片段随机文库的构建对于基因组测序的成功至关重要。如果有可能，随机文库最好由机械剪切的片段构建，因为酶切DNA片段化会因为基因组中限制性酶切位点的非随机分布而有所偏向。如果为了生长率差异和体外重排最小而在狭窄的尺寸范围内有相对小的插入，质粒文库最有可能实现完全随机化。如果插入片段至少是平均测序长度的2倍，而且允许每一模板可从没有冗余的两端测序，这样可以显著 ...

尽管设备结合了微流体装置以及先进的测序技术，使在几秒内形成DNA条码成为可能，但是当前的分析技术通常也要延迟2天以上完成。这里我们介绍一种简单的方法，能够使从标本到以条形码为基础的识别在2h之内完成。这个方法是利用冷冻或冻干试剂。