DNA定点突变

导语：来自美国埃默里大学医学院、中国科学院和暨南大学的研究人员在在9个月大的亨丁顿舞蹈症模式小鼠中利用通过一种病毒载体运送的CRISPR/Cas9切除它们的脑细胞中的mHTT基因的一部分。几周后，在大脑中接受这种病毒载体注射的地方，这些蛋白聚集物几乎消失了。此外，这些小鼠的运动能力得到改善，不过没有恢复到健康小鼠的水平。相关研究结果于2017年6月19日首次发表在Journal of Clinical Investig ...

1. CRISPR/Cas 简介CRISPR-Cas 是细菌和古细菌在自然界生物长期的进化过程中，演化出了一种独特的适应性免疫系统。在该系统中，一种称之为 Cas 的限制性内切酶能在短链 RNA 的引导下，靶向降解外来入侵的 DNA 或 RNA，人们将这一系统命名为 CRISPR-Cas，即成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关基因 （Clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associ ...

tianlicaas 各位高手：本人想在蓝藻中做一个看家基因的定点突变（Site-Directed Mutagenesis），也就是说，用体外合成的点突变后的看家基因替换基因组上的原始基因，在这里请教大家了！爱在进行时 找到的资料实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信这可能是大家经常会遇到的问题。基因好不 ...

hhjiangh 如何在数据库中查找到一个基因的所有致病突变位点？gikuaile 我也有相同的问题拂风 hhjiangh wrote:如何在数据库中查找到一个基因的所有致病突变位点？渴求、、、谢谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

木瓜奶茶 请问基因定点突变能一次性突变两个基因吗？我准备把GAC突变成CAG。还是得一个一个地突变？zhujoker 单个可以，一起也可以的木瓜奶茶 谢谢啊！ziyikeer 你是用试剂盒还是自己做啊？推荐一个试剂盒给你Easy Mutagenesis system。不过你要设计好引物，引物设计可以自己看说明书。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shix ...

timt75 如题，我要检测一个基因的外显子中某段polyA(10）是否存在缺失突变，应该如何检测？测序是否合适？测序后polyA后出现杂峰，测序能否看出缺失突变？后面的杂峰是杂合突变引起还是ployA本身检测引起？盼回复！谢谢！timt75 请帮忙！谢谢！zhujoker 最精确的还是应该是测序，“测序后polyA后出现杂峰，测序能否看出缺失突变？”我想问问你你是否测过，再说在这种情况下你问专门的测序公司的技术支持不是更好解 ...

pollution_ocean 最近在筛选乳腺癌组织标本，发现了一个位点的突变，很是欣喜，结果查证后，发现原来是同义突变，不知道这样的同义突变在写文章或者是今后的研究当中是否还有意义呢？足下客 据我的了解，以前筛选与乳腺癌有关的SNP位点时，有一些同义突变的位点也是与癌症的发生显著相关的。但是这种情况不是很多。很大程度上要看运气了。bigbang_0_0 同义突变可能产生如下六种效应，其中的一种或几种可以用来解释患病机理：1 ...

Drnw 在突变库中找到密码子aACC-CCC的突变，其中ACC前的a是代表什么呢？谢谢！！！！！zhujoker 能不能够将你的原始的东西拿出来看看？Drnw Codon number 都是从起始密码开始计算的吗？是不是还有从其它地方开始计算的？woxingwosu 一般都是从起始密码子看的吧？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

xuemei1984 新手求助定点突变，想要将原序列中转录因子的结合基序突变掉，有的文献是将核心区的碱基置换掉，而有的文献是将核心区的碱基删除，请问究竟是要选择删除还是置换呢？那种相对比较好一些？十分感谢！woxingwosu 感觉置换掉比较好，比较有说服力，文献上采用较多的还是将核心区的碱基置换掉。xuemei1984 woxingwosu wrote:感觉置换掉比较好，比较有说服力，文献上采用较多的还是将核心区的碱基置换掉 ...

happy_m_lucky 想通过直接测序的方法检测一个基因的SNP，只检测外显子、5'UTR、3'UTR区，共三十多个已知位点，对照组和病例组共394个样本，不知道样本量够不够，查了很多资料也没找到，想请教一下怎样确定样本含量，能麻烦大家帮我解答一下吗？非常感谢！yyyantopbt 可参考一下帖子：如何计算作SNP需要的病例数：http://genetics.dxy.cn/bbs/topic/8096982SNP与病例数：ht ...

suleipang 本人是研一的学生，还没有进过实验室。如果发现某肿瘤组织中某基因突变，那么使用什么样的方法能够证明某基因突变与肿瘤发生是否相关？希望前辈们不吝赐教，谢谢wales127 要知道你这个基因是否有过报道和肿瘤发生相关？ 如果是与肿瘤发生相关1，简单的就是检测下该基因下游的蛋白表达是否异常，这些下游蛋白如果有变化，需要在细胞水平证明其特异性2，再稍微复杂点的话，构建一个突变的转基因载体，利用组织特异性prom ...

1179380155 请问能用ELISA（酶连接免疫吸附）法检测基因突变吗？感激不尽！woxingwosu ELISA-based Ki-ras gene mutation analyses in pancreatic and cholangiocarcinoma cells and tissues.AbstractDetection of Ki-ras mutations is one possible modality for diagnosis of human neoplasms, particul ...

silencemm1015 请问，我怎样才能知道TS,TP,MTHFR,DHFR这几个酶的基因突变频率？如何去查相关文献？在哪查？谢谢！woxingwosu 最好写的具体以一点吧。。。NCBI上查一查也应该能够搞定的，只要关键词搜索得当的话。silencemm1015 谢谢！但是查不到想要的东西woxingwosu 呵呵，NCBI上都查不到的话，估计就是还没有人做了。。。silencemm1015 可能还是关键词用的不当吧。我再查查看， ...

sophiasoso 有哪位高手能解释一下吗？生化书上都找不到，看文献又看不懂。。。谢谢啦sophiasoso 自己顶一下，有人帮忙解释一下吗？song333 杂合子突变: alleles have different mutations or deletion纯合子突变: both alleles have the same mutation or deletionbigbang_0_0 杂合子突变是指其中一个基因是野生型的，而另外一条是突变型的湖心 他们的回答都没有会回答到问题的 ...

yuanxia84 :)各位前辈好，本人是分子生物学的初学者，刚接触DNA突变方面的实验，想请教各位前辈，如何有效地发现DNA新的突变位点，恳请各位前辈不吝赐教。非常感谢！！zjubell 要发现新的，测序是唯一的方法。yuanxia84 请问有哪些测序方法，哪些方法即简单又高效，还成本较低，谢谢zjubell yuanxia84 wrote:请问有哪些测序方法，哪些方法即简单又高效，还成本较低，谢谢如果你知道大概位置，就直接提DNA， ...

xuchenmail 最近看了一篇文献，关于PIK3CA 基因突变的问题，文献说热突变位点在exon 9 (E542K,E545K) and exon 20 (H1047R)，但是我根据pubmed上的数据，H1047R已经在21号外显子了，这是怎么回事啊？是文献错了吗？还是有其他的原因？zjubell 1.这篇文献是什么时候发表的？对序列更新也是很正常的事。另外，这篇文献IF是多少？2.是否存在可变剪接，他的突变株，是否是其他的剪接体的外显子中的？3 ...

xuyq706 近年逐渐发现非编码序列突变在人类遗传病中发挥重要作用，此类序列突变如何致病？对其致病性如何研究判定？freecell 这些都是医学遗传学上的内容。建议楼主留意一下教材和中文综述。shilei5794749 In the human genome , variations of non-coding seqences including 5’UTRs，3’UTRs，promoters，introns ，long-rang cis-control elemen ...

gggchilly 想有目的地突变镰刀菌内的某个基因，有没有什么良策啊？包括合适的载体等等，急，不胜感激。也可以发我邮箱gggchilly @ yahoo.com.cnamberly 你要看看是什么菌种，然后在google上搜索该菌的isogenic mutation， vector，plasmid等关键词。一般地，如果该菌是可转化的话，应该是有发表的方法的。做法是把抗性基因（如Ampicillin）插入到你的目的基因内，然后转化某穿梭 ...

jokaing 搜集疾病相关基因突变位点如：耳聋 线粒体基因A1555G、C1494TGJB2基因 235delCβ-地中海贫血 CD41-42(-CTTT)、IVS-II-654(C＞T)请大家补充疾病相关基因的主要突变位点slytjiaofei β-地中海贫血最常见的五种突变类型：CD71-72（+A），CD41-42（-4bp），CD17→0，IVS-Ⅱ-654C→T和-28A→Gsanshenglou 学习中lxgee G6PD缺乏症 (蚕豆病)G137 ...

xiaomage124 请问丁香园里的战友们，谁做过点突变？TOP10F'是不是甲基化菌株？恳请指教，多谢啦！:)有请好人帮我分析下TOP10F'菌株是否有甲基化功能，因为我要做点突变，如果这个菌株具有甲基化外源质粒DNA的功能就可以了，以下是此菌株对应的基因型，多谢啦！:)F'{lac Iq Tn10(TetR)} mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 △lacⅩ74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 ga ...