DNA提取与纯化

　　　技术答疑——“血液基因组提取”　张老师，天根特邀专家。分子生物学博士，具有10多年的分子生物学领域的研究经验。熟悉各种分子生物学实验技术。在我们的沟通中，张老师始终强调：“核酸提取是分子生物学实验的第一步，良好的开始是成功一半。”张老师希望通过丁香园论坛，就基因组提取技术方面与大家共同探讨。以下请站友们就“血液全基因组提取”及相关问题跟帖提问，张老师将作阶段性答复。答疑流程1、提问时间：2009.4.15～2008.4.30；2、 ...

Q1: 抽提DNA 去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好?A1: 酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变 性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。作为表面变性剂的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定 ...

上海莱枫生物科技有限公司 网址：www.lifefeng.com订货电话：021- 64810180,25966877 传真：021-54252754技术解答：shanghai@lifefeng.com 技术支持：400-600-1087,13817902990(上海)各位战友如有需要我们可提供4次免费试用装个人认为彻底去除细胞DNA是实验可重复性的关键，后续PCR添加BSA或Carrier DNA或增强剂是非常有必要的。我们旨在提供 ...

作为分子生物学的工作者来说，DNA的提取几乎是我们每个人都要面对的工作，该工作看似简单，实则不然，当我们面对形形色色的组织样品，选择什么样的试剂以及什么样的方法能够获得最理想的结果，常常是我们每个实验工作者所要考虑的，现在我将园子里面出现过的有关DNA提取的有价值的一些帖子整理如下，希望能够对各位战友的实验科研工作提供一定的方便。1.线粒体DNA的提取http://www.dxy.cn/bbs/actions/ar ...

最近在做连接的试验，由于需要多次纯化回收，而胶回收的回收率往往又很低，使得最后目的基因和载体的量非常低，电泳最后跑不出来，非常头疼，在dxy上也看到很多战友遇到这样的问题，于是对这方面的资料进行了整理，希望对大家有用，并希望各位战友继续对这一问题进行交流，补充，谢谢！！！整理的资料在附件中1.提高胶回收量的办法：1)增加电泳时的上样量。2)电泳缓冲液用新鲜配制的。3)切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很 ...

本人经常用以下方法提取DNA,做PCR,效果不错,很简单.大家可以尝试下!整个过程不需要离心.1. Lysis: the lysis buffer (usually 0.5ml) is added to the tissue or cell ( for a 75cm2 flask, add 5ml directly to the cell). Digestion is complete within several hours at 37C (cell, 2-3h) or 55C (tissue) with agitation.Lysis buffer100mM Tris Hcl pH ...

本人刚刚开始做DNA抽提实验，遇到一些问题，请教大家。1）关于酚的PH值。我从公司买了一瓶tris饱和酚，略呈黄色，分上下两层。上层水相，下层是酚。我测了PH值，上层PH值是8，下层是5左右，我用试纸测的，没敢拿PH计测。问题是分子克隆那本书上说酚用tris平衡至PH值8.0，可是现在买的酚却是酸性的，怎么办呢？是自己再用tris平衡还是直接就能用啊？请有经验的战友解答,可能问题很菜，呵呵，谢谢大家帮忙。2）提取细胞DN ...

DNA定量方法　核酸提取（包括DNA和RNA)---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------DNA定量方法http://www.bioon.com/bbs/post/view?bid=67&id=545030&sty=1&tpg=6&age=0http://www.bioon.com/bbs/post/view?bid ...

〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓 2007年零应助帖/疑难帖集合〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓 已应助帖不代表求助已经解决，鼓励战友继续积极应助，加分机会与尚未应助帖均等不规范贴不在此次整理范围，请大家规范发贴1.请问pcDNA3.1能作为RNAi的质粒载体使用吗？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9188774&sty=1&tpg=32&age=02.点突变没结果http://www.dxy.cn/bbs/post/view?b ...

今天老师让我找一些比苯酚氯仿抽提法更简单的方法。通过专利文献和杂志，发现了一些简单的方法。现小结一下---血清中病毒DNA的提取一 煮沸法从血清中提取病毒DNA，与其它方法比较，此法最为简单，并且很多文献都有报道 。鲁艳芹等在一篇名为《乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法及专用试剂盒》专利(专利申请号为200610044679)中对六种方法提取血清中乙型肝炎病毒DNA的效率做了比较，得出结果是：NaOH裂解法最佳，其次是直 ...

细菌基因组DNA的提取方法综述1 快速微量提取法A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中，12000rpm离心1min, 丢去上清夜，收集菌体。B.加入400ul裂解液（40mMTris-醋酸，20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8）混匀,置于37oC水浴1hr。C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液，混匀后于13000rpm离心15min。D.取上清液，用苯酚抽提2次，氯仿抽提1次。E.加两倍体积无水乙醇 ...

DNA PurificationSibylle Herzer内容:What Criteria Could You Consider When Selecting aPurification Strategy? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 168How Much Purity Does Your Application Require?. . . . . . . . 168How Much Nucleic Acid Can Be Produced from a GivenAmount of Starting Material? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 168Do You Require High Molecular Wei ...

想提取芽孢核酸，用玻璃粉法。sigma的玻璃珠（425-600nm的）我买了，但是在溶液中总是很快沉淀，很难悬浮在液体中用来吸附核酸。因此我觉得文中所述玻璃粉应该是更微小的玻璃颗粒，配成的“玻璃悬液”或者有人称做的“玻璃奶”，但是不知道哪儿有卖的，请大家帮帮忙，非常感谢。从土壤中提取细菌和芽孢核酸用于PCR的研究王津 宋亚军 等军事医学科学院徽生物流行病研究所,北京100071 国家生物医学分析中心分析微生物实验室,北京100 ...

Solexa 高通量测序法原理Solexa 方法是利用单分子阵列测试 genotyping ，此种测序法首先是将 DNA 从细胞中提取，然后将其打断到约 100 － 200bp 大小，再将接头连接到片段上，经 PCR 扩增后制成 Library 。随后在含有接头的芯片（ flow cell ）上将已加入接头的 DNA 片段绑定在 flow cell 上，经反应，将不同片段扩增。在下一步反应中，四种荧光标记的染料应用边合成边测序（ Sequencing By Synthesis ）的原理，在每个循环过程里，荧光 ...

1、植物总RNA的提取以白菜花药组织为试材, 利用改良Tris-硼酸法提取花药总RNA。提取花药RNA的产量高、质量好、纯度高, 适用于mRNA差异显示及基因表达的Northern印迹等的RNA提取。分别采取蕾期和盛花期的花蕾和花朵, 迅速将花药剥离, 分装称重后液氮中速冻, - 80℃保存。1　RNase的灭活　所有用于RNA提取的玻璃器皿均在180℃条件下烘2h以上, 塑料管和枪头用 0. 1%焦碳酸二乙酯(DEPC)溶液在 37℃条件下处理24h后高压灭菌。2　 ...

http://www.ebiotrade.com/bbsf/xjszl/B20027816518.asp优化基因表达的关键因素之：基因的重新设计和合成密码子最佳化（codon optimization）遗传密码有64种，但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分。那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons)，那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons)。实际上用 ...

核酸分离纯化实验技术指南总RNA提取常见问题分析Q：RNA降解A：1. 新鲜细胞：如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如 果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞，一定要使裂解液能覆盖住细胞。2. 新鲜组织：某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏，胸腺等)，即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液氮条件下将组织研碎，并且匀浆时使用更多裂解液。3. 冷冻样品：样品取材后应立即置于 ...

Preparation of BAC (Bacterial Artificial Chromosome) DNA with by Alkaline Prep Method1. Grow 250 ml of LB culture at 37 °C for 16 hours ( 250 rpm) with the appropriate antibiotic. Cultures can be started by 1) picking a single colony or 2) by splitting a subculture into 250 ml of culture (1 L Flasks). Colonies shou ...

近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表过和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。　　医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡切片上进行原位杂交或原位PCR ...

DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。在DNA提取过程中应做到1,根据不同研究需要，保证结构的相应完整性；2,尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等)；3,保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓度的金属离子。下 ...