DNA提取与纯化

1) Use Pharmacia #27-4564-01. With clean flamed scissors and forceps weigh 0.25 g/50 ml conical and add 50 ml/conical of 0.02 M Tris pH 7.6. Allow to dissolve over several days at 4℃. 2) Vortex. Draw ...

1. Separate DNA fragments in an agarose gel cast with 0.5 mg/mL Ethidium bromide. Locate bands with a hand-held long-wave UV lamp.2. Slice the gel with a razor blade above and below the bands of inter ...

载体及目的DNA 片断经酶切后，如果无多余的片断（如载体单切）可以直接酚/氯仿抽提后乙醇沉淀回收直接连接用。但多数还有多余片断（如载体双酶切后有插入片断但要回收空载体，多个目的DNA片断选择其一克隆），必须电泳分离后回收目的片断。回收的方法既有传统的方法，这些方法基于降低凝胶的熔点以释放DNA，然后通过酚/氯仿抽提后乙醇沉淀回收，也有公司生产的商品化的试剂盒可用，这些试剂盒多采用凝胶裂解液（如含有 ...

Recovering DNA from agarose gels Paul N. Hengen Ph.D. (July 14 1999) Introduction Methods and reagents is a unique monthly column that highlights current discussions in the newsgroup bionet.molbio.met ...

一、 目的 熟练掌握抽提细菌DNA的一般方法 二、原理 要进行重组DNA 实验，就离不开外源基因的纯化，而外源基因主要来源之一就要直接从生物的染色体DNA上制备，所以制备高质量的染色体DNA样品经常为基因工程实验所需要，抽提细菌染色体DNA的方法目前已有许多种，这里所介绍的两种方法：一适用于枯杆菌染色体的抽提；另一种方法则适用于大肠杆菌染色体的制备。 基因工程实验所需要的基因组DNA 通常要求分子 ...

一、目的 掌握从动物组织中DNA基本原理和方法，了解利用电泳技术分离、鉴定核酸的原理和方法。 二、原理 真核生物DNA主要以核蛋白形式存在于细胞核中，因此制备DNA必须先粉碎组织，裂解细胞膜和核膜，使核蛋白释放，在除去蛋白质、脂类、糖类和RNA等物质，得到纯化的DNA。在本实验的提取DNA反应体系中，SDS（十二烷基磺酸钠）破坏细胞膜和核膜，并使蛋白质变性，将核蛋白中的DNA与蛋白质分开，ED ...

作分子生物学实验，核酸纯化、酶切、克隆算是最基本的步骤了。因为要做定向克隆，通常要作双酶切。为了省时省事儿，我们常常想方设法把两个酶放在一起切。可是事情并非总那么称心如意——两个酶经常在一起闹别扭，不是反应温度不同啦，就是Buffer不同，有时候两个酶切位点连在一起，必须先切一个再切另一个，否则就切不动——因为有的酶除了识别位点之外还需要旁边留有几个 ...

Molecularpourous membrane tubing is used for desalting protein and DNA isolation / purification. It comes in several diameters and pore sizes (for molecular weight conversions for nucleic acids see ge ...

一、Chelex-100法提取生物检材中的DNA Chelex 100能有效除去非核酸有机物，主要用于提取全血或血痕、精液或精斑、混合斑、毛发、培养细胞等。但因生物样本来源不同其操作方法有所差异，以下分别介绍: （一）全血 (1)取3～10μl全血加到0.5ml离心管中，加人500μl纯水，剧烈振荡，室温下放置15分钟。 (2)13000rpm离心3分钟，去上清，收集沉淀。（必要 ...

Phenol-based Method for the Isolation of DNA Fragments from Low-Melting Temperature Agarose Reference: Favre D. 1992. Biotechniques vol. 13 1.Cut out slice containing DNA smallest size possible. 2.E ...

1 主要配制试剂 1）0.5M Na2EDTA PH8.0 2) Proeinase K(20 μg/μl) 3)6M GuSCN 10ml GuSCN 7.2g 加D·W至10ml 水浴60℃～65℃溶解 4） 二氧化硅悬浮液（Silica susponsion、用前混匀） Silica 12g加D、W至100l ↓ 充分混匀置于100ml量筒内 ...

Author: Laura-Lee Boodram Source: Laura-Lee Boodram Department of Life Sciences The University of the West Indies Abstract: The protocol is simple and fairly rapid. It does not require the use of orga ...

Important : Extract the DNA within one week of receiving samples. Samples that have been processed should be frozen to prevent degradation. Freeze samples between use each day. 1.Add 600 ml of 50 mM ...

These procedures were originally devised in Richard Palmiter's lab for use with tail dots (DNA spotted onto a nitrocellulose filter and probed for a transgene; quicker than doing southerns) and subseq ...

macerate tissue in Eppendorf tube without butter at RT add 400 ml extraction buffer vortex for 4 sec leave sample at RT until other samples are ready (> 1 h) spin in microfuge for 1 min ...

DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。在DNA提取过程中应做到1，根据不同研究需要，保证结构的相应完整性；2，尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等)；3，保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓 ...

Phenol-chloroform DNA extraction from sand flies 1. Crash Individual sand flies in 0.5 ml lysis buffer (50 mM NaCl 10 mM EDTA 50 mM Tris-HCl pH 8). 2. Incubate The sand fly homogena ...

Saghai-Maroof MA Soliman KM Jorgensen RA & Allard RW (1984) PNAS 81:8014-8018 DNA successfully isolated from fungal species of Cochliobolus Aternaria and Fusarium. The key elements in this ...

CTAB TECHNIQUE / Method / Schedule / Protocol (JPB) FOR DNA ISOLATION / DNA EXTRACTION FROM PLANT LEAF / LEAVES SAMPLES (see also if both DNA and RNA are needed) Reagents needed CTAB buffer 2% CTAB&nb ...

This protocol originated in Murray and Thompson (1980) and then was modified by Richard Jorgensen and finally published in Wagner et. al 1987. 1.Start with about 10 grams fresh needles. 2.Chop into s ...