DNA提取与纯化

链霉菌质粒DNA的小量提取：1、将适量的菌体悬浮于500μl溶菌酶溶液（2%）中，37℃温育1hr 左右至完全溶菌，2、加入500μl碱性SDS溶液（0.3mol/L NaOH 2%SDS），立即振荡混合完全，

silica回收DNA片段：在长波紫外灯下切下含有目标DNA的琼脂糖凝胶， 用纸巾吸干凝胶表面的液体并切小。计算凝胶的重量。

片段凝胶回收之试剂盒回收(离心法)：在长波紫外灯下切下含有目标DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸干凝胶表面的液体并切小。计算凝胶的重量，该重量作为一个凝胶体积。

氯化锂抽提质粒法：前四部同苯酚/氯仿溶液抽提法（用Solution I II III处理），加等体积的异丙醇，混匀，沉淀DNA，12000rpm离心7min.去上清，尽量去干净。

DEAE membrane吸附法分离与纯化DNA片段利用离子交换的原理，在低盐情况下使DNA 吸附在带正电荷的滤膜上，再利用含有高浓度盐类的缓冲液将DNA 自膜上溶离下来。

Silica gel吸附法分离与纯化DNA片段：经BamHI 及HindIII 作用的pBlueGus 及pQE31,置于65℃水浴10 min，移至冰浴降温后，以含EtBr 的1.0% agarose gel 进行电泳 （两种样品各用六个wells,每个well 注入30 μL 样品）。

X-Gluc 可被GUS作用而释出蓝色的产物，若转型株所带的质体接有gus 基因的重组质体，则应可在IPTG 的诱导条件下表现出蛋白质，若此重组蛋白质具有GUS 活性，可将进入菌体的X-Gluc 分解而使菌落呈蓝色

以phenol/chloroform 进行DNA 萃取：进行这一部份实验的前，请先确定pBlueGus/HindIII 与pBlueGus/BamHI 两者的酵解反应都已经完全。

（1）消化细胞后以1500r/min离心，去上清后重悬于冰冷的1×TBS中，再次离心加入0.5ml提取缓冲溶液（RNA酶临时加入），移入EP管中。（2）37℃孵育1h，加4μl蛋白酶K/ml，50℃孵育3h。……

利用亚精胺对含多糖、多酚类物质较多的植物、真菌等材料的DNA进行纯化，以去除杂质，利于后续试验。1、加入400mlTris-HCl（100mM 8.0），溶解DNA……

1、取0.1~0.2 g左右小麦叶片于1.5 ml的Eppendorf离心管中，将离心管直接放入盛液氮的冰壶中冷冻。从冰壶中取出离心管，用小玻璃研棒直接插入离心管中迅速研磨，至淡黄色粉末为宜；2、向离心管中加入600 ml的DNA提取缓冲液“S”，振荡充分混匀，65 ℃水浴30 min，其间温和混匀几次；……

由于真菌菌丝体中多糖含量较高，很多方法不易去除干净，不能用于做基因组酶切。使用如下方法提取菌丝DNA产量高，多糖和蛋白质含量低，符合分子生物学研究要求。

质粒DNA的提取和纯化

DNA的提取流程

PAXgene 系列产品：有效地保护样品稳定性

QIAGEN Plasmid plus Kit——超快速纯化多至10 mg转染级别纯质粒

1. 从平板上挑单菌落，越多越好（20-30），放于1.5ml离心管中，加1.2ml 左右的液体LB培养基，摇3-5h. 200rpm。 2. 用1.5ml离心管收集一定量（1ml，留0.2ml）含有重组质粒的菌液，10000rpm， 30sec，弃上 清，留管底沉淀（应留有一定量（0.2）的菌液放于4度中，以备摇菌）。 3. 加入30-50ul TE ，重悬菌液，混合均匀。 4. 加入25ul ...

用离子交换层析法从DNA中去除溴化乙锭

用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭

CsCl-溴化乙锭平衡梯度离心纯化闭环DNA：不连续梯度法