DNA提取与纯化

一、目的： 学习和掌握应用紫外分光光度法直接测定核酸含量的原理及技术。熟悉紫外分光光度计的基本原理与使用。 二、原理： DNA和RNA都有吸收紫外光的性质，它们的吸收高峰在260nm波长处。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性，核酸和核苷酸的摩尔消光系数（或称吸收系数）用E（P）来表示，E（P） ...

mRNA的分离 与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。 进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA相比，采用poly(A)+ RN ...

mRNA的分离方法较多，其中以寡聚（dT）-纤维素柱层析法最为有效，已成为常规方法。此法利用mRNA 3’末端含有Poly（A+）的特点，在RNA流经寡聚（dT）纤维素柱时，在高盐缓冲液的作用下，mRNA被特异地结合在柱上，当逐渐降低盐的浓度时或在低盐溶液和蒸馏水的情况下，mRNA被洗脱，经过两次寡聚（dT）纤维柱后，即可得到较高纯度的mRNA。寡聚(dT)纤维素柱纯化mRNA：试剂试剂：1、 3 ...

DNA提取需在II级生物安全柜内完成1.用打孔器将6mm直径大小的DBS打入1.5ml的离心管中，用烧灼和酒精搽拭的方法消毒打孔器头部。2.每个离心管中加入1ml去离子水，涡旋10秒，在管壁外侧做离心方向标记；3.将离心管置于摇床上，转速500-600转/分，室温，摇动15分钟；4.室温下，离心管12500×g，离心3分钟；5.小心从离心管中吸去上清约950μl去离子水，留50&m ...

　　近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表过和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。 　　医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡 ...

幼苗萌发 本研究采用国际麦类染色体制图动议(ITMI)的小麦群体的亲本Opata、W-7984，种子在8格的长方形组培盘中进行，盘中放发芽纸(2.5×3cm)，每格10粒种子，加水，见图所示(略)。将培养盘置于25℃的黑暗条件下24小时，然后在温度为27℃、日长为16小时的条件让其发芽，时间为72小时。一套材料立即提取DNA，另一套材料放在具96格的培养盘中，贮藏在 ...

实验原理：DNA以核蛋白形式存在于细胞核中。蛋白酶K或链霉蛋白酶E均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS和EDTA存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分子分离，EDTA抑制细胞中DNase活性，蛋白酶K或链霉蛋白酶E将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。再用酚 ...

本法的产量要低得多，但却比本章所述的其他方法更温和，是提取大质粒（大于15kb）的首选方法。试验步骤：1、 将500ml细菌沉淀物洗过后重悬于10ml用冰预冷的10%蔗糖、50mmol/L Tris.Cl(pH8.0)溶液中，将悬液移至30ml的带盖螺口塑料试管中。2、 加入2ml新配制的溶菌酶溶液溶于10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)。当溶液的pH值小于8.0时，溶菌酶不能有效地发挥 ...

试验原理： 煮沸法是根据Holmex和Quigley(1985)的方法改进而成的。在基因工程中， DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的 DNA 序列，在一定的条件下切断双链 DNA 。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的，如反应温度，缓冲体系，离子种类与浓度， DNA 的纯度和甲基化程度等。对 DNA 进行酶切时，首先要选择适合的缓冲液。对于单酶切 ...

PFGE用于分离很大的DNA分子，因而需要很高分子质量的标准，本方案介绍一个覆盖范围较广的产生一系列λ噬菌体DNA串联体的系列标准。

根据本方案制备的酵母DNA可以用作PCR反应的模板。在E.coli和Saccharomyces cerevisiae中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取，并且可以用于转化E.coli。

用缠绕法可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备DNA，主要步骤包括将DNA沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上，接着将沉淀的DNA缠绕到一个Shepherd氏钩上，再把缠在钩上的DNA从乙醇溶液中转出溶于所选择的液体缓冲液。

由低熔点PFGE可直接回收DNA，也可首先通过电泳将梯度DNA浓缩进高百分比凝胶，然后进行DNA分子回收。

根据本方案制备的酵母DNA可以用作PCR反应的模板。在E.coli和Saccharomyces cerevisiae中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取，并且可以用于转化E.coli。

从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了，提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析，可供选择的方法非常多，乱花渐欲迷人眼，如何选择最适合的方法，成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。我们从两个方面，层层剥茧，分析最佳的实验方法。

土壤基因组DNA快速提取试剂盒采用创新技术，采用酶法破碎，保证了基因组的完整性，极大的提高了DNA的得率，几乎土壤中所有的微生物DNA都能提取出来，能真正反映土壤中微生物的多样性！

本文简介动物组织细胞基因组的DNA提取。

本文介绍了一种从血块中提取DNA的方法。

本文介绍了血块中提取DNA的方法和实验中的注意事项。

质粒、噬菌体等经酶切，电泳；PCR产物经电泳后，常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化，用于亚克隆、探针标记等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等，也有现成的试剂盒供应。