DNA基础知识

摘要：SOD的催化使超氧自由基(O2-)被破坏，并针对氧毒性筑起了第一道防线。SOD的活性及其检测技术与许多不同领域都息息相关，如医药、生化、植物生理、食品工程等。在过去的几十年中，人们已经发现了各种各样的SOD检测方法，但是，这些方法在选择性、检测速度、价格、简便程度上都存在各自的缺陷。最近，我们发现水溶性四唑盐如XTT，WST-1，WST-8适合用于O2-的检测并且也可以被用于SOD的检测。在 ...

1. Inoculate the entire colony in 5 ml YPD culture O.N. or 12 hours2. Dilute into YPA medium (1% yeast extract 2% Bacto-peptone 2%KOAC) to OD600~ 0.2 Vigorous shaking.3. For ts mutants ~15hours at 23C ...

Wash cells with 10 mM Tris pH 8French pressSlow speed spinHigh speed spinResuspend in 10 mM TrisSonicate 2 x 15 sec to remove ß-lacatamasesWash in 10 mM TrisResuspend in 10 mM TrisStore at ?70ºC until ...

最近在做原核表达，包涵体。以前也做过，但经验不多。一点失败的教训以及纯化过程中的体会，贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正1. 首先介绍一下背景。载体是invitrogen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是该公司的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。2. 第一次失败。第一次做诱导的时候，重复了很多次，但总是诱导不出来。PCR，酶切都正确。但没 ...

核酸硝酸银染色：参考《锌对缺血再灌注大鼠肝脏金属硫蛋白一1基因表达的影响》营养学报2000年第22卷第4期294-297取PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳，所得凝胶进行硝酸银染色．程序如下：(1)于10%乙醇+0.5% 冰醋酸溶液中固定6 min；(2)于10%乙醇+0.5% 冰醋酸溶液中再固定6 min；(3)于0.2 %AgNO3溶液中浸泡10～12 min；(4)用去离子水充分漂 ...

1．电转化感受态细胞的制备 1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照） 2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。 3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。 4. 将菌液在冰上预冷 ...

近几年来原位分离技术(in situ product removal简称ISPR)在乳酸发酵中的应用引起了世界范围内的广泛关注溶剂萃取发酵法(油酸、叔胺等为萃取剂)、吸附法(离子交换树脂、活性炭、高分子树脂等)、膜法发酵(渗析、电渗析、中空纤维超滤膜、反渗透膜等)等这些方法的使用都是基于在发酵过程中通过从培养介质中及时移走乳酸达到减少产物抑制控制ｐＨ值的目的从而提高原料的利用率和产品产率对于连续过 ...

核酸定量分析 DNA 或 RNA(以260nm处的吸光值为基础) 1. 制备用蒸馏水稀释过的DNA 或 RNA 样品溶液 ( 典型稀释比为 1:100 或 5:500μl) 2. 使用紫外光源在260 nm 处测定吸光值也可以在280 nm 和230 nm 测定吸光值 (260/280 的光吸收值比粗略为2/1；260/230的光吸收值比也应接近 2/1) 3. 计算原液浓度: A260 x 转化 ...

一、问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？答:关于漂移问题：1． 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2． 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3． 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1． 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2． 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。3． 流动相不合 ...

随着基因工程的发展，常常需要构建一种能高水平表达异源蛋白质的表达载体。启动子对外源基因的表达水平影响很大，是基因工程表达载体的重要元件。因此研究启动子的克隆方法，对研究基因表达调控和构建表达载体至关重要。 　　迄今为止，国外尚未见到有关启动子克隆方法的综述性报道，国内仅孙晓红等曾就启动子的结构、分类、克隆方法和食用菌中已经分离到的启动子作过综述。而近年来又有许多改进的克隆启动子的方法获得了多方面的 ...

　1.3　环状PCR 　　环状PCR包括I-PCR(Inverse-PCR)和P-PCR(Panhandle-PCR)。这2种PCR都是根据一端已知序列设计的嵌套式引物进行PCR。 　　1.3.1　I-PCR I-PCR是1988年由Triglia最早提出的一种基于PCR的改进的染色体步行方法。 I-PCR的实验程序包括，基因组DNA经酶切后用T4DNA连接酶进行自连接，产生环状DNA片段 ...

2　讨论 　　以上介绍的几种方法基本代表了现有的启动子克隆方法，它们分别具有不同的特点和适用范围。 　　利用启动子探针载体筛选启动子时，不需要知道具体的基因序列，避免了引物设计，并能获得大量的启动子片段；其缺点是需要构建1个穿梭质粒，建库、转化、筛选，工作量大，费时费力，而且克隆、亚克隆的过程繁琐。因此在基因的遗传背景不是很清楚时，往往通过探针载体随机筛选启动子。 　　而PCR法的主要优点是简便、 ...

Peter Novick Lab Department of Cell Biology Yale University School of Medicine HOW TO PERFORM AN INTERRUPT OF ANONGOING AUTOCOUNT1). This program interrupts the ongoing autocount to allow the counting ...

1.4　利用载体或接头的染色体步行技术克隆基因启动子 　　 这类方法的第一步都是酶切基因组DNA，连接载体或接头，既可以用pUCl8等质粒载体，也可以使用λDNA等噬菌体载体，只要选用的载体带有合适的酶切位点；同样根据实验需要，接头既可以是双链也可以是单链，然后根据基因组DNA序列设计的特异引物和载体的通用引物或接头序列进行扩增。 　　1.4.1　利用载体的PCR Shyamala等利用的单特异性 ...

1.6　TAlL-PCR 　　很早就有用随机引物的PCR，但由于无法有效地控制由随机引物引发的非特异产物的产生，所以一直未能广泛应用。近年来由IJiu等设计的TAIL-PCR(Termal Asymmetric Interlaced PCR)又叫热不对称交错PCR，则解决了这个问题，后来有研究表明，经改良过的TAIL-PCR成功地从突变体中克隆到外源插入基因的旁侧序列，从而为启动子的克隆提供了有效 ...

基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA，一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然，不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质，一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的蛋白质称为蛋白质组(proteome)。同理，不同细胞在不同生理或病理状态下所表达的蛋白质的种类也 ...

基因工程：将不同的生命元件按照类似于工程学的方法组装在一起，生产出人们所期待的生命物质。内含子，外显子：一个基因往往由几个互不相邻的段落组成，它的内部还包含一段或几段最终不相应出现在成熟mRNA中的片段，称为内含子。而相应出现在成熟mRNA中的片段则称为外显子。基因：是一个含有特定遗传信息的核苷酸序列，它是遗传物质的最小功能单位。蛋白质的一级结构：多肽链的氨基酸顺序。蛋白质的二级结构：多肽链中有规 ...

专题一：RNA干扰技术（RNAi）1995年，康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现，反义和正义RNA都阻断了基因的表达，他们对这个结果百思不得其解。直到1998年， Andrew Fire的研究证明，在正义RNA也阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA。这些双链RNA是体外转录正义RNA时生成的。这种双链RNA对基因表达的阻断作用被称为RNA干预（RNA ...

基因疗法是指将正常基因植入靶细胞代替病人细胞中的遗传缺陷基因，或关闭、抑制异常表达的基因，以达到预防和医疗疾病目的的一种临床医疗技术。在治疗遗传性疾病、恶性肿瘤、癌症、艾滋病病毒（HIV）、关节炎、糖尿病、腺苷脱氢酶(ADA)缺陷症、神经系统紊乱、心脏病等疾病方面，基因疗法发挥着越来越重要的作用。基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vector)。基因治疗载体一般分为病毒性载体和非病毒 ...

基因突变是指由于DNA碱基对的置换、增添或缺失而引起的基因结构的变化，亦称点突变。它的分类方式包括1）根据基因结构的改变方式，基因突变可分为碱基置换突变和移码突变两种类型；2）根据遗传信息的改变方式，基因突变又可以分为同义突变、错义突变和无义突变三种类型。基因突变的检测方法：从基因突变的性质来看，检测方法分为显性突变法、隐性突变法和回复突变法三类。广义的突变？检测可以从两个层次来入手：一个是蛋白质 ...