DNA基础知识

1）致癌化学物转化细胞：转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验 1．取材：妊娠后第13天取材，取数个同窝胚胎，去头和内脏，在无菌条件下剪碎至米粒大小，再用0.25%胰蛋白酶（含0.01%EDTA）37℃消化30分钟，滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入75cm/培养瓶中，接种密度10～20×106/75cm，37℃培养2～3天，在顺利情况下能迅速长满瓶面。 2．贮存：选大 ...

Preparation of plasmid DNA : a modified mini alkaline-lysis/PEG precipitation procedure. ABI; 1995 Materials GTE buffer (50mM glucose 25mM Tris-HCl (pH8.0) 10mM EDTA (pH 8.0)) (200µl/tube) 0.2N ...

双酶切buffer的选择： 1、U ：Supplied with its own unique reaction buffer that is different from the four standard NEBuffers. Its compatibility with the four standard NEBuffers is indicated by the chart. 2、BSA ...

目的： 在体外连接组装而成的重组DNA分子只能转入合适的受体细胞，才能大量地进行复制、增殖和表达。通过实验学会重组DNA转化的最基本的操作以及如何提高转化效率的基本思路。 原理： 带有外源DNA片段的重组体分子在体外构建成后，需要导入适当的宿主细胞内进行繁殖或表达出具有一定生物活性的蛋白。能够作为重组体转化的受体，主要有动物细胞、植物细胞、微生物细胞等。导入受体细胞的途径重要有转化（转染），显微注 ...

Kitto Lab The University of Texas at Austin http://research.cm.utexas.edu/bkitto/Kittolabpage/Protocols/Microbiology/electroporation.html This procedure prepares glycerol stock cultures of bacteria f ...

Kitto Lab The University of Texas at Austin http://research.cm.utexas.edu/bkitto/Kittolabpage/Protocols/Microbiology/ethanolPpt.html This procedure allows the concentration of DNA samples from dilute ...

申海鹰 周元国（第三军医大学野战外科研究所分子生物学中心，重庆400042） 摘要 疾病基因的分离和克隆 是功能学的研究热点，具体策略的选择取决于疾病背景资料的掌握程度，为能快速、准确地克隆 出目的基因，本文介绍两类常用的基因克隆 策略――定位克隆 策略、功能策略――及其主要方法，如：家系连锁分析、等位基因共占法、人群相关分析法、抑制性消减杂交、差示反转录PCR、差异消减显示法、代表性差异分析法、 ...

1　概　述 核酸的分子杂交(molecular hybridization)技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA 或DNA 序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的碱基互补原则而发展起来的。在碱性环境中加热或加入变性剂等条件下，双链DNA 之间的氢键被破坏(变性)，双链解开成两条单链。这时加入异源的DNA 或RNA (单链)并在一定离子强度和温度下保温 ...

LiAc/SS-DNA/PEG TRANSFORMATION TRAFO Efficiency: up to 22 million transformanst/ µg of plasmid DNA HIGH EFFICIENCY TRANSFORMATION Please cite: Agatep R. R.D. Kirkpatrick D.L. Parchaliuk R ...

我做了稳定转染，从G418浓度确定到最后的单克隆化鉴定。有自己的体会也有其他战友遇到的情况，和大家分享. 没有总结好的地方，大家补充。 筛选之前确定G418浓度： 1.由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。 2.G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是 ...

The Preuss LabThe Division of Biological SciencesThe University of Chicago http://preuss.bsd.uchicago.edu/protocols/topo.html ...

Simple and Efficient Method (SEM) to Make Competent Cells Preparation of Frozen Competent of DH5α 1) 250 ml TB solution 10mM Pipes or 10 mM Hepes 0.65g 15 mM CaCl2 0.55g 250 mM KCl 4.66g ~undefined55 ...

Transformation DNA fragments (or plasmid DNA) into competent E. coli ~undefined Caution: Use aerosol protecting tips if selection of transformed cells is not based on X-gal strategy. 1.Remove competent cells ...

质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。 质粒的提取方法很多，大多包括3个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化。本实验以碱裂解法为例，介绍质粒的抽提过程。 实验目的：掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。 实验材料：含有质粒pUC18载体的大肠杆菌菌液，克隆有水稻外源片段的BA ...

Hello I have been trying over the last few months to introduce a single point mutation in a looped portion of an RNA using the dut-ung method of mutagenesis. So far I have had little success.&nb ...

前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会，结合丁香园战友的宝贵经验，谈一下质粒重组的一些个人经验。 1、回收PCR产物： 在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHIHindIII提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各 ...

Hidoes any ...

一 、分子图谱的构建 分子图谱为植物基因，QTL的鉴别和定位、种质资源鉴定、物种进化等研究提供了有利的研究手段。主要包括以下步骤：根据遗传材料之间的多态性确定亲本组合，建立作图群体；群体中不同植株或品系的标记基因型分析；标记间的连锁关系。 二、品种、品系鉴定和杂交种纯度分析 指纹图谱是鉴别品种、品系的有利工具，具有快速、准确等优点。在市场经济的条件下，指纹图谱在检测良种质量（真伪、纯度），防止伪劣 ...

一、电转化感受态细胞的制备 1.用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照） 2.37℃，220rpm，培养14-16个小时。 3.第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。 4.将菌液在冰上预冷30分钟 ...

DNA的重组 DNA Recombination一、同源重组 发生在同源序列间的重组称为同源重组(homologous recombination)，又称基本重组。 是最基本的DNA重组方式，通过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。 二、细菌的基因转移与重组（一）接合作用(conjugation)： 当细胞或细菌通 ...