DNA基础知识

大家都对单核苷酸多态性（SNP）不陌生了，学理学生物的、学医学的、学农学的对此都算是有了一定的了解，这玩意在我的概念中就是检测碱基的变化状况而已（似乎太白话了），虽然只是检测，但是检测方法却是多种多样，如何选择合适的检测方法对整个实验来说确实是个重要的问题，选择无外乎三样：时间、钱、文章档次。目前来说，SNP检测应用比较多而且真正实用的，用来发文章的有测序、限制性片段长度多态性（RFLP）检测、质谱检测、Taqman检测 ...

进行中的核转录分析nuclear run on transcription assay在细胞和提取物中加入放射性核素标记的核苷三磷酸，使其掺入到正在转录的mRNA分子中。通过核酸分子杂交的方法，即可以同时鉴定出多种不同基因是否转录以及其转录的量。该方法作为一种比较可靠的测定转录活性的方法，排除了northern blot等方法中mRNA的半衰期对实验结果的影响，可同时分析多种基因的转录活性。The idea of this assay is to i ...

最近做DNA shuffling，本来去年做过，但这次做不知怎么搞的，片段用DNase I怎么也切不好，跑胶后什么也没有，请问哪位做过，交流一下protocol,我的片段1.2kb,想得到100bp的,谢谢建议讨论从如下方面展开：1、技术名字、基本原理2、具体实现方法/手段3、应用4、优缺点5、相关技术发展概况6、在PNAS、science、nature、JBC等杂志上的经典应用文献翻译与点评7、其他本版前期的明星技术：1. 【交流】 ...

分光光度计分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来 ...

慢病毒——基因转移的潜在新载体　　用于基因治疗的载体系统可分为病毒性载体和非病毒性载体两类。目前常用的病毒载体包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等,但是这些载体均存在不足之处,严重影响了基因治疗的有效性及安全性。在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题,是无法高效转导非分裂期细胞,而腺病毒载体虽然能转导非分裂期细胞,但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容 ...

真假GelRed风波目前，美国Biotium中国区唯一总代理商接到一些客户投诉，声称从某些经销商那里买到了假货GelRed产品，实验效果很不理想。由此，总代理公司受美国总公司方面委托，一方面致电新老客户当心假货，建议从正规渠道购买原装产品；另一方面安排实验部门开展核酸凝胶电泳实验，帮助广大客户鉴别真假GelRed。目前市场上几种代表性的核酸染料：GelRed是一款集高灵敏度、低毒性和光稳定性于一体的核酸凝胶染 ...

有句话说得好：试用，是一种生活态度！能让我们的生活换一种方式，无所谓成功与否，尝试着申请都会让工作和生活充满快乐和期待。试了，才会发现快乐，未知，才有更广的世界。丁香通试用中心聚集了各类业界有名的商家所提供的试用机会以及业内人员最真实客观的试用报告，好东西就该亮出来，试用中心9月免费试用装精品来袭，小伙伴们接招吧！新活动：凡申请2件试用装送1个丁当，申请3件送2个丁当，赶快行动吧！参与方式：申请后将对应试用装申请记 ...

我索要质粒前也是参考了很多丁香园的帖子，所以有些语句可能和以往的范本雷同，请大家见谅哦2007年3月20日主题：explore the possibility of getting *** from your laboratory信件：Dear Dr. **,I am a post graduate student in ***Institute, Chinese Academy of Sciences. And one of my projects focuses on ***. It seemed that the mechanism you ind ...

LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤此实验步骤设计用来进行24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染，其为设计用来在生长培养基中直接加入复合物。1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中（参见表6了解建议的细胞密度）。2. 对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μg DNA。多孔操作可以批 ...

本期明星技术：allele-specific expression analysis/assay人类基因组计划的结构基因组测序完成后，留下了海量的序列信息。然而，这些序列有何功能，多数尚不得而知。在序列功能研究中，除了基因及其亚结构功能探讨外，还有一个重要的内容，那就是同一序列的多型性也可能具有不同的功能（或具有不同的功能强度）。特别是近来的研究已经肯定性地证明，很多位点同一位置因碱基不同而所致的多态或突变（如SNPs）， ...

In vitro site-specific mutagenesisAn in vitro technique in which an alteration is made at a specific site in a DNA molecule, which is then reintroduced into a cell.Various techniques are used; for the cell biologist,a very powerful approach to determining which parts of a protein or nucleotide s ...

核酸基因版作为最热的基础医学版之一，战友们表现都比较热心。为发展本版的中坚及后备力量，繁荣本版，及方便大家以后晋级，专业不错的战友请到此自荐；同时加强交流学习，增进感情，共同提高！凡在本版已发50帖且得分10分以上的战友,为核酸版中坚人才,加1分鼓励.我们拟邀请这些战友参加本版的聚会或网络会议等活动.在此跟帖的战友,当达到上述条件时,自动升为中坚人才，同时加分鼓励。以下列格式进行：①用户名②简单介绍(年级专业及研究方向 ...

好久没有来发帖了。今日偶然看到一个小tips。帖出来和菜鸟分享。1．溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基） ...

质粒提取的原理因为觉得对新人很重要，所以再转贴一次。碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可是我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究生水平都差不多 ...

丁香园专访：《生物实验室安全故事手记》主编孟博《生物实验室安全故事手记》主编孟博主编简介：孟博，华东师范大学脑功能基因组学研究所工作。丁香园荣誉版主Biowind。1978年12月出生，汉族，工程师，在读博士。教育经历：1996、9—2000、6：哈尔滨工业大学生命科学与工程专业，获学士学位。学位论文：以反义RNA技术研究鸡GDF-8基因功能2000、9—2002、6：哈尔滨工业大学生化与分子生物学专业，获硕士学位。学位论文 ...

提示：多数资料文件在几M到几十M左右，希望大家留的信箱地址能接受几十M大的附件。目的:增加本版面的服务透明度,更方便地为更多战友服务,也为了防止一些不必要的重复工作,特开辟索取资源帖.跟帖要求:1.格式 ID:资料名称(要写全)邮箱:跟帖日期:2.请正确写清邮箱地址,并注意邮箱的防垃圾功能，确保本邮箱不被拒收。（谨慎使用sina邮箱）如因地址不正确导致信件退回，当月内不再受理。顺延至下月重新索取;3.发帖完毕并得到资源后,不需 ...

做了快一年的分子克隆，犯了很多错误，经历了很多坎坷，也学到了很多东西。分子克隆过程中出现问题最多的大概就是连接了，大家抱怨的也最多，我也陷入在个步骤上很久。经过长时间的摸索我在连接这个问题上有一些体会，在这里跟大家分享一下我的经验，以供和我一样陷入困境及刚开始做克隆的同学参考。关于连接的提问多集中在连接的体系、DNA的用量、vector和insert的比例、连接酶等。但是我认为，连接不成功，问题并不一定出在连接这 ...

SAGE 技术在理论上来说可以检测到一个细胞内所有转录体的表达，而且可以给每一个转录体定量，不管它是低丰度还是高丰度。SAGE和基因芯片技术一样，具有高通量、平行性检测细胞内基因表达谱的特点。但SAGE可在未知任何基因或EST序列的情况下对靶细胞进行研究，这一点是基因芯片技术所不具备的。目前关于SAGE技术的文章在国外发表很多，但感觉国内搞SAGE研究的不是很多。本版特地在继10月份推出基因芯片技术大讨论之后， ...

请问大家，用地高辛标记和用放射性标记做实验，各有什么优缺点？实验过程和实验试剂有什么特殊的要求，拜**答案。。。。做过的请介绍介绍失败的和成功的经验，大家分享，谢谢附文章一篇:原位杂交实验原理与方法一、目的本实验的目的是学会原位杂交的使用方法。了解各种原位杂交的基本原理和优缺点。二、原理原位杂交组化（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标 ...

最近要开展新的实验，对其中的Proteinase K 很感兴趣。对园子里的相关帖子进行里归纳整理，大家共同学习，进步。【求助】请问蛋白酶K买哪里的好？http://www.dxy.cn/bbs/thread/6533303请教：蛋白酶K配方http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/862901_1.html在线求助： 蛋白酶K 的配置http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive ...