DNA基础知识

在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的DNA分子片段。主要目的是获得某一基因或NDA片段 ...

一、 病毒标本中提取DNA(支原体、腺病毒)处理方法 （1）将擦拭过的咽拭纸放入1.5ml装有1ml生理盐水的eppendorf管中。 （2）以10000r/min离心5分钟，去上清液。 （3）沉淀物加入30 ml TE液混匀后煮沸10分钟，4℃保存备用。 二、 从细菌中提取DNA 1．NG（淋球菌）DNA的提取 标本可取自尿道、生殖道或结膜分泌物。 （1）取男性尿道口或女性宫颈处分 ...

Gene cloning or recombinant DNA technology is the joining of two or more segments of DNA to generate a single DNA molecule capable of autonomous replication within a given host (1). Ligase enzym ...

辐射性杂交(radiation hybrid RH) 制图技术是1975 年由Goss 和Harris 创立的一种体细胞杂交技术，适用于构建人类基因组长范围内的高分辨率连续物理图谱。成熟的辐射性杂交制图技术是由Cox VR 等人于1990 年建立的。 1 ．原理 利用高剂量的X 射线将候选染色体打断成若干片段，含有这种片段的细胞可与仓鼠细胞形成杂交克隆。在这种杂交中，人类染色体片段被插入到仓鼠染 ...

Sequence Analysis . Automated (Semi-Automated) Sequencers generate a four-color chromatograms on the results of the sequencing gel as well as a text file of sequence data. The sequencer can not verif ...

TSS方法制备感受态细菌（又称一步法） 一、 准备工作 1、 缓冲液1×TSS的配制： 事先配制1M的氯化镁――20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装，不用灭菌。 取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯化钠，10 g PEG(MW= 3350) 5ml DM ...

（1）诊断技术分类 1)根据目的基因是否被放大分类 可分为杂交法和扩增法。前者被检测的目的基因不被放大，如分支链DNA技术，但用杂交法可以进一步检测经过放大了的基因片段，如PCR产物杂交分析；后者包括PCR及连接酶链反应，Qβ复制酶系统等。 2)根据被测基因的核酸类型分类 ①在杂交法中，Southern印迹用于检测DNA；Northern印迹用于检测RNA；斑点印 ...

自杀性质粒载体完全可以自己构建，只要保证两点： 1.自杀性质粒载体不能在你的宿主菌里进行复制，也就是说载体上不能有能在宿主菌中复制的复制子； 2.要由筛选标记． 自杀性质粒载体不能在你的宿主菌里进行复制，否则会导致细菌染色体突变株的构建失败。但是在构建时，要注意以下方面： 1、在制备质粒载体和DNA插入片断时 2μg 5kb大小的线状DNA大约含有1.4poml/L5'末端磷酸。5&lsqu ...

一、质粒 绝大多数的生物都是以DNA 的形式来储藏其遗传信息。遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori origin of replication，或译为复制起点)，使整个基因体得以复制。含有复制原的遗传物质称为replicon，我们姑且把它译为为复制体吧！原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phage genome)等三类。其中质 ...

What is a crystaline precipitate that I get sometimes (not always) when I precipitate my genomic DNA preps and how can I get rid of it? theories are protein(that was not completely removed durin ...

Map-Based Cloning of KAM2 Map-based cloning of the KAM2 gene was performed essentially as described previously (Tamura et al. 2005). We used codominant cleaved amplified polymorphic sequence markers ( ...

Michael Koelle's LabDepartment of Molecular Biophysics and Biochemistry Yale University http://info.med.yale.edu/mbb/koelle/protocols/protocol_subcloning.html ...

同步双酶切是一种省时省力的常用方法。选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步。NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer，以保证100%的酶活性。NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书。能在最大程度上保证两种酶活性的缓冲液即可用于双酶切。由于内切酶在非最佳缓冲液条件下的切割速率会减缓，因此使用时可根据每种酶在非最优缓冲 ...

MassPREP自动酶切仪操作步骤 一 开机前检查： 1 检查仪器台面（DECK）上所有的实验材料（Labware）。 2 检查SystemWater 水桶的水位。 3 检查恒温循环水浴（Chiller）水箱的水位，并定期更换或填充Chiller 中的循环水。 4 倒掉废液桶中的废液。 二 开机步骤： 打开Chiller、Heater、仪器及计算机电源，进入WinPREP程序 ： 1 仪器初 ...

载体：携带外源DNA 进入宿主细胞的工具。 一、载体的功能 1.运送外源基因高效转入受体细胞。 2.为外源基因提供复制能力或整合能力。 3.为外源基因的扩增或表达提供条件。 二、载体应具备的条件 1.具有对受体细胞的可转移性。 2.具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。 3.长度尽可能小，以提高其载装能力。 4.具有多种单一的酶切位点。 5.具有合适的选择性标记。 附图： ...

下面的简单方案是Clhen等（1972）所用方法的变通方案，常用于成批制备感受态细菌，这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107个转化菌落，这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆的需要。该方法完全适用于大多数大肠杆菌菌株，并且比方案I快速，重复性更好。该法制备的感受态细胞可贮存于-70℃，但保存时间过长会使转化效率在一定程度上受到影响。 1）从于37℃培养16-20小时 ...

1.Inoculate a couple of 20 ml LB broth in a 125 ml flasks with 0.5 ml of an overnight culture of the recipient strain. 2.Shake at 37℃ until O.D. 600=0.13 - 0.15 (1 - 2 hours). Measure by taking ...

Buffer TfbI pH5.8 500ml1.47g KOAC ...

20世纪50年代Watson和Crick提出了DNA双螺旋结构模型，标志着分子生物学作为一门独立学科的诞生，70年代以来，分子生物学已成为生命科学领域最具有活力的学科前沿。由于分子生物学理论和技术方法不断地被应用于临床，在疾病和预防、预测、诊断、疗效地评价等多方面发挥着愈来愈重要的作用。分子生物学与临床医学的广泛交叉和渗透，产生了一个崭新的学科方向—分子医学；70年代末，美国科学院院士 ...

DNA Isolation by a Cleared Lysate Method Followed by Double Acetate Precipitation Version 3b - updated September 26 1999 The Most Recent Roe Lab Implementation (by Feng Chen Hau-Qin Pan and Fu Ying) A ...