DNA基础知识

方法一： 效率非常高，一般可到1undefined8，好时可到1undefined9，特别适宜于大片段与文库构建及珍贵材料的连接转化。 实验试剂： A液：1M，MnCl2： B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌； C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅1 ...

I need to purify 20mer from a mixture containing 200mer and 20mer. How to purify this small fragment? Thanks~~ -HS- -------------------------------------------------------------------------------- Hi ...

Protocol for Sequencing Very Difficult Regions Ziyun Yao and B.A. Roe 02-14-2002 Target DNA (SAP-ExoI cleaned PCR 7-deaza-dG containing product) ...

在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA为此需要大量提取质粒DNA。 许多年来，一直认为在氯霉素存在下扩增质粒只对生长在基本培养基上的细菌有效，然而在带有pMBl或ColEl复制子的高拷贝数质粒的大肠杆菌菌株中，采用以下步骤可提高产量至每500ml培养物2-5mg质粒DNA，而且重复性也很好。 1、将30ml含有目的质粒的细菌培养物培养到对数晚期（OD600约0.6)。 ...

一、原理 基因组DNA 文库包括了基因组所有顺序的随机克隆片段。一个好的基因组DNA 文库的大小应足够大，以便包括所有的基因DNA 顺序。DNA 克隆片段也应足够大，其中包括整个基因、连接基因及它们稳定形式所要的侧翼顺序。为了获得高的克隆效率和较大的插入片段，λ噬菌体载体和质粒经常被使用构建基因组DNA 文库。λ噬菌体文库易于操作，噬菌体载体上有多克隆位点。&lambd ...

Hi Dear All Have you ever tried to ligate 3 DNA fragments with sticky ends into Vector(5.2kb). A. Fragment: 3.0kb with HindIII/ Bam HI cut from a Vector. B. Fragment: 0.5kb BamHI / XbaI cut fro ...

Hi I am a Biochem student.I am extracting DNA from plants that have been exposed to contaminants then using restriction enzymes to see if there is any change.I was wondering if there was a ...

基因工程又称遗传工程、DNA 重组技术、分子克隆等。它是七十年代在分子生物学发展的基础上形成的新学科。所谓基因工程，就是在分子水平上，用人工方法提取（或合成）某一生物的遗传物质，在体外切割，拼接和重新组合，然后通过载体把重组的DNA 分子引入受体细胞，使外源DNA 在受体细胞中进行复制和表达。按人们的意愿定向创造生物新性状，使之稳定地遗传给下一代。所以基因工程具有广阔的应用前景，即能为工农业生产和 ...

涂布棒在酒精蘸一下，然后烧一下，能不能保证把所用的菌烧死？ 参考见解：涂布棒可以在酒精中保藏，但是酒精不能即时杀菌。蘸了酒精后再烧一小会，烧的是酒精而不是涂布棒。建议涂布棒还是干烧较长时间后，冷却了再涂。同时作多个转化时，应用几个涂布棒免得交叉污染。 原先测序鉴定没有问题的细菌，37℃摇菌后发现质粒大小或序列出现异常? 参考见解：这种情况出现的几率较小，常出现在较大质粒或比较特殊的序列中。解决办 ...

(一) ...

实验目的 1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。 3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。 实验原理 转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。 转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞 ...

Does somebody know how to increase DNA concentration from a too weakly concentrated DNA sample obtained with a Qiagen Extraction Kit (the elution buffer was ddH2O) ?? -BATY- ------------------------- ...

PCR扩增反应完成之后，必须通过严格的鉴定，才能确定是否真正得到了准确可靠的预期特定扩增产物。凝胶电泳是检测PCR产物常用和最简便的方法，能判断产物的大小，有助于产物的鉴定。凝胶电泳常用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，前者主要用于DNA片段大于100bp者，后者主要用来检测小片段DNA。 1．琼脂糖凝胶电泳 这是实验室最常用的方法，简便易行，只需少量DNA即可进行实验。其原理是不同大小 ...

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA 送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法，其目的是要达到设置转染效率，影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒DNA 的纯度、靶细胞的生长状态等，下面重点介绍向几种常用的转染技术： 被用于作靶基因转染的细胞，其生长状态如何， ...

本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。） 一、片断平移的克隆（也适用于多片断连接） 简介：将用作载体的质粒A（制作大片断）酶切3μl ，要切出小片断的质粒B酶切7μl；琼脂糖回收胶电 ...

原理： 转化(Transformation )：将外源DNA 分子引入受体细菌，使之获得新的遗传性状。 受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株，不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R-M-)，可以容忍外源DNA 分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法，如电击或CaCl2 、RbCl/KCl等化学试剂的处理后细胞膜的通透性增高，成为感受态细胞(Compenent cells)， ...

H. Simmler and H. Singpiel Acconovis GmbH Lindenhofstr. 42-44 68163 Mannheim Germany eMail: simmler@acconovis.com R. M¨anner Universit¨at Mannheim B6 23-29 68131 Mannheim Germany maenner@ti.un ...

一、目的与原理 转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。 二、材料和方法 1.材料：大肠杆菌 2.仪器： 离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜 3.试剂 LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ; TF ...

To efficiently determine the chromosomal location of phenotypic mutants we designed a genome-wide mapping strategy that can be used in any crop for which a dense AFLP (Amplified Fragment Length Polymo ...

【摘 要 】FISH技术是80年代开始发展起来的一种新的定位技术。在人类基因组研究中得到了广泛的应用。通过中期染色体的FISH可以进行SCP，Cosmid和YAC的染色体定位，嵌合克隆的鉴别；通过间期核的FISH可以在50kb的分辨率下进行基因作图；最新的研究进展已可以进行伸展的染色质丝（chromatin fibre）的FISH，直接测量基因的长度，从而达到高精度基因作图的目的，总之，随着FIS ...