DNA基础知识

Hi everybo ...

实验目的 为了获得大量的质粒作为克隆载体，我们需要将购买来的质粒通过转化的方法导入细菌的细胞内。 制备出感受态的细胞，我们就可以方便的将需克隆的质粒导入其中，使其繁殖，就能获得大量质粒。 本次实验的目的就是增加质粒的数量。 同时，我们能掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的基本原理和实验技术方法。 实验原理及过程 ...

Plasmid DNA isolated by this procedure can be used routinely for electrophoretic analysis restriction endonuclease digestion and transformation of E. Coli. DNA sequencing PCR and most other molecular ...

Prepare: 200ml LB in a 1L flask 1L sterile ddH2O and place in cold room 4 50ml conicals chilled on ice 10% glycerol (cold) Chilled boxes of 100μl and 1ml pipet tips. Chilled 0.5ml tubes. General Th ...

1、 感受态细胞的概念 重组DNA分子体外构建完成后，必须导入特定的宿主（受体）细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。 在原核生物中，转化是一个较普遍的现象，在细胞间转化是否发生，一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化过程中的亲缘关系，另一方面还与受体菌是否处于一种感受状态有着很大的关系。 所谓的感受态，即指受体（或者 ...

一、目的 1.了解感受态细胞生理特性及制备条件，掌握大肠杆菌感受态细胞制备方法。 2.掌握质粒DNA 转化大肠杆菌的方法，了解转化的条件和利用半乳糖苷酶基因插入失活选择重组质粒DNA 的原理。 二、原理 （一）大肠杆菌感受态细胞制备的原理 所谓感受态，是指细菌生长过程中的某一阶段的培养物，只有某一生长阶段中的细菌才能作为转化的受体，能接受外源DNA而不将其降解的生理状态。感受态形成后，细胞生理状态 ...

Sugden labMcArdle Laboratory for Cancer Research University of Wisconsin-Madison Medical School http://mcardle.oncology.wisc.edu/sugden/Protocols/html files/Filter Binding Assay.htm Last Modified 5.2. ...

DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此DNA克隆又称分子克隆，基因操作或重组DNA技术。DNA克隆涉及一系列的分子生物学技术，如目的DNA片段的获得、载体的选择、各种工具酶的选用、体外重组、导入宿主细胞技术和重组子筛选技术等等。 一 目的DNA片段的获得 DNA克隆的第一步 ...

(adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu) A. Sonication The generation of DNA fragments by sonication is perfor ...

Hi.- I have a problem with amplification of DNA by PCR. The extraction of DNA is direct from plant. i use PVP for keep out of DNA Polyphenols from the samples. The problem is: i can't view apmlificati ...

1.Wash the plates briefly using the 96-channel block washer. 2.Place the plates in a tub submerged in dd-water. 3.Put a flask on top of the plates to keep them submerged. 4.Place the tub with the s ...

Donis-Keller Lab Manual Department of Genetics in Washington University School of Medicine http://hg.wustl.edu/hdk_lab_manual/plasmid/plsmid13.html Purpose: To maintain lab stock of highly efficient ...

Does anybody know how to isolate single-stranded DNA from mammalian cells? Thanks for responding. Yin -- -------------------------------------------------------------------------------- Hello I don't ...

Alkaline lysis miniprep 1. Grow bacteria overnight in 37℃shaking incubator with lids very loose and taped on. I normally use 5 ml of liquid medium in a 50ml conical bottom tube. Be sure to include the ...

基因的克隆就是利用体外重组技术，将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的全序列，确定染色体定位，阐明基因的生化功能，明确其对特定性状的遗传控制关系。通过几十年的努力由于植物发育，生理生化，分子遗传等学科的迅速发展，使人们掌握了大量有关植物优良性状基因的生物学和遗传学知识，再运用先进的酶学和生物学技术已经克隆出了与植物抗病、抗虫、抗除草剂 ...

when I extracted DNA from chicken red blood cellI met a very strange question.After the phenol and chloroform treation.I collected the upper layers (it is not liquid but like some transparent s ...

The Minion Lab College of Veterinary Medicine at Iowa State University http://mycoplasmas.vm.iastate.edu/lab_site/methods/DNA /restrdig.html ...

DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 常用的DNA连接酶有两种:来自大肠杆菌的DNA连接酶和来自噬菌体的T4DNA连接 ...

Hancock Laboratory Methods. Department of Microbiology and Immunology University of British Columbia British Columbia Canada http://www.cmdr.ubc.ca/bobh/showmethod.php?methodid=12 REFERENCE: GATA 19 ...

一．原理 ⑴ 5’-RACE法 ① 以目的mRNA 为模板，使用5’末端P 标记的RT 引物进行反转录反应，合成1ststrand cDNA。 ② 使用RNase H 分解 Hybrid DNA-RNA中的RNA链。 ③ 使用T4 RNA Ligase 使单链cDNA进行环化或形成首尾连接物。 ④ 进行PCR扩增。 图 4－2 5’-RACE 法原理 ⑵ 引物 ...