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核酸的定量测定:衣酚(苔黑酚)法

一、目的: 了解并掌握地衣酚法测定RNA含量的基本原理和具体方法。 二、原理: RNA含量测定,除可用紫外吸收法及定磷法外,常用地衣酚法测定。其反应原理是:当RNA与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变成糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(地衣酚orcinol)反应,在Fe 3+或Cu 2+催化下,生成鲜绿色复合物。反应产物在670nm处有最大吸收。RNA浓度在20―250μg・ml-1范围内 ...

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核酸及核蛋白染色体

一、Feulgen氏染色法: 该方法是显示DNA的一种常用方法。其基本原理是在酸水解下,去DNA中的嘌呤,使脱氧核酸的醛基暴露出来,然后再与Schiff氏试剂反应,生成紫红色产物,用于显微分光光度计和流式细胞测量计对细胞进行静态DNA测量和流式细胞测量。 操作方式: (1)切片常规脱蜡至水。 (2)蒸馏水洗,1NHCI水溶稍洗。 (3)浸入1NHCI水溶液60℃,8-10分钟。 (4)取出后, ...

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DNA的限制性内切酶常识知识

限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶)它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独 ...

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DAPI染DNA的原理及使用方法

DAPI 即4'6-二脒基-2-苯基吲哚(4'6-diamidino-2-phenylindole),分子式为C16H15N5·2C3H6O3 ,分子量457.48。DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处,一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍,常用与荧光显微镜观测,根据荧光的强度可以确定DNA的 ...

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地高辛配基随机标记探针法

(一)概述基因诊断是以核酸分子杂交技术为基础,在核酸水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷和一些传染病病原体的方法。其基本过程是:制备探针,标记探针,检测样本。开展这项工作的关键是要得到高灵敏度、高特异性的探针。以往人们是用放射性同位素来标记探针。近年来,非同位素标记方法发展很快,已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记探针法,是较为成功的一种非同位素标记方法。其原理是:用化学方法把类固醇类半抗原 ...

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植物总DNA提取

This protocol describes a method for isolating DNA from plant tissue.Procedure1. Preheat the CTAB Isolation Buffer at 60°C.2. Grind 2 g of fresh leaf tissue to a powder in Liquid Nitrogen in a chilled ...

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碱裂解法提取大量质粒

该法是R.Treisman尚未发表的方法,同时也是Brinboim和Doly(1979)及Ish-Horowicz和Burke(1981)所用方法的改进。该方法对于目前使用的所有大肠菌菌株都卓有成效,并可与随后的纯化步骤,如聚乙二醇沉淀或氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心等,一并联合使用。注:括号中给出的体积可适用于未经氯霉素处理的培养。试验准备:1、 溶液I:50mmol/L葡萄糖25mmol/L ...

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垃圾DNA可促进癌细胞生长

据国外媒体5月2日报道,由英国和德国科学家组成的研究小组首次确认了垃圾DNA对于霍奇金淋巴瘤细胞等癌细胞生长的促进作用。而这一名为长末端重复序列(LTR)的垃圾DNA片段也可在其他种类的癌症中发挥作用。相关研究发布在近期出版的《自然·医学》杂志上。

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细胞周期测定的方法步骤

一、原理 细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法,但它不能代表细胞群体的周期,故现多采用其他方法测群体周期。 测定细胞周期的方法很多,有同位素标记法、细胞计数法等,这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。 BrdU (5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后,可做为细胞DNA复制的原料 ...

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DNA复制中核小体装配方式

2010年4月2日,北京生命科学研究所(NIBS)朱冰实验室在science杂志发表文章,报导了DNA复制过程中核小体装配的方式。

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常见动物实验中实验动物的选择

本文主要介绍药理学研究、药物安全性评价试验、心血管疾病等临床各类疾病研究中实验动物的选择。

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高分辨率熔解HRM

高分辨率熔解(High-resolution melting,简称HRM)分析是一门新兴的技术。它仅仅通过PCR之后的熔解曲线分析,就能检测PCR片段的微小序列差异,从而应用在突变扫描、序列配对和基因分型等多个方面。

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选择合适的全血DNA、RNA提取方法

从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了,提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析,如何选择最适合的方法,成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。

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基因转染技术介绍

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法,基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内,并在细胞内表达。转染方法有多种,根据不同的细胞,贴壁或悬浮细所可选用不同的方法,其目的是要达到设置转染效率,影响转染产率的因素有多种,包括转染方法、操作技术、质粒 DNA的纯度、靶细胞的生长状态等。

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DNA化学合成的应用

DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段,并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。

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肽核酸(PNA)原位杂交介绍

本文对肽核酸PNA原位杂交进行了简要的介绍。

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DNA胶回收中常见问题和解答

本文总结归纳了一些胶回收中常见的一些问题和解决方法。

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冻融法回收DNA片段操作步骤

本文简单介绍了一种胶回收的方法。

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长度多态性分型

长度多态性是个体遗传特征在群体中的反映,对个体遗传标记的表型或基因型分型的技术方法分为限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length polymorphismRFLP)和扩增片段长度多态性(Amplification Fragment Length PolymorphismAmp~FLP)。 1.限制片段长度多态性 限制片段长度多态性(Restriction Frag ...

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何大一:名人面对面

谈禽流感及艾滋病问题。禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性传染病,也能感染人类。艾滋病,即获得性免疫缺陷综合征,是人体注射感染了“人类免疫缺陷病毒”(HIV)(又称艾滋病病毒)所导致的传染病。

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