DNA基础知识

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无水的单个核苷酸分子量为： A= 313.21 T= 304.2 C= 289.18 G=329.21 粗略估计，通常四个碱基的平均分子量，一个DNA 核苷酸（在盐溶液中）的平均质量为325道尔顿。 MW of a single-strand DNA molecule= （#of bp）× （325 ...

基因转染是将具生物功能的核酸（RNA或DNA）转移或运送到细胞内，并使核酸在细胞内维持其生物功能的核酸转移技术。转染技术的目的是主要是研究真核基因的表达和调控，目前的方法包括磷酸钙共沉淀法，电穿孔法以及同DEAE-dextran或阳离子脂质体试剂形成复合物法。 在这些不同的方法中，DNA转导的效率，转导的机制，可重复性及使用的方便性都存在差异。而且，有效的DNA转导会伴随某些毒性或细胞抑制，其 ...

组织培养试剂 一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基（如，RPMI 1640和DMEM）。培养基的成分包括营养物质（氨基酸，葡萄糖），维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物质 ...

1、接种细胞：收集对数生长期细胞，调整细胞悬液浓度，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200?l. 2、培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。 3、呈色：培养试验设定时间后，每孔加含20?l MTT 溶液（5mg/ml)的培养液200?l，继续培养1-4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要 ...

1. 在6孔板中接种1~3×105细胞/孔，加入2ml完全培养基，置CO2孵箱中37℃培养过夜。 2. 待细胞长到50-80%单层时，在无菌离心管中配制如下溶液： i. 溶液A：将4?g待转染的超纯DNA稀释到250?l无血清培养基中，静置5min ii. 溶液B：将2-25?l LipofectAMINE ...

1.目的与原理实验目的：学习DNA的Feulgen染色方法，观察染色结果，了解反应原理。实验原理：DNA经弱酸(1mol／L HCl)水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛基，这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应，形成紫红色的化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具 ...

载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 1 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 2 抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ Kan+ 3 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 4 P/E 启动子 ...

基因敲除 - 概述 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和RNAi技术，它们同样可以达到基因敲除的目的。 基因敲除 - 介绍 ...

材料： 质粒DNA 指数生长的真核细胞 PEI （聚乙烯亚胺） 1×HBS （pH7.4） 配方： PEI 储存液（100 μM）：称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS （pH7.4）中， 0.2 μm 滤膜过滤，储存于4℃备用。 1×HBS （pH7.4）： 将8.76 g NaCl 溶解于900 ml 超纯水，加入20 m ...