DNA基础知识

相关专题 核糖核酸酶保护实验 核酸酶保护法是一种用于生物化学和遗传学识别个人在异构RNA的提取样品RNA分子细胞实验室技术。 该技术可以识别一个或多个已知序列的RNA分子，即使在较低的总浓度 。提取的RNA先用混合反义 RNA或DNA探针是相辅相成的利益和互补链的序列或序列杂交 ，形成双链RNA(或DNA-RNA的杂交)。.然后将混合物接触到 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验探针的原理及其应用 RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式，用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1. 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 对于放射性RPA，杂交双链进行变性聚丙酰胺凝胶电泳，用放射自显影或磷屏成像系统检测被保护的探针的信号。 对于非放的RPA，杂交双链经过变性聚丙酰胺凝胶电泳后电转移至尼龙膜，UV照射使被保护的RNA探针与膜交联而固定，再用试剂盒提供的链霉亲和素-辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)和化学发光底物与膜上 ...

相关专题 1、引物延伸分析（primer extension analysis） 引物延伸分析用于定量mRNA的量，测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端， 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域，随后用RNA作为模板，用反转录酶延伸引物得到cDNA，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析cDNA ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)即糖核酸酶保护实验(Ribonuclease protection assay，RPA)是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。本文主要介绍了核糖核酸酶保护分析实验的从试剂准备到、操作步骤以及实验结果全部的操作流程，供大家分享。 试 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 三种不同的核酸酶——S1核酸酶、RNA酶、外切核酸酶Ⅶ被用来进行RNA定量，确定内含子位置，以及用来鉴定在克隆的DNA模板上的mRNA 5′端和3′端的位置。当检测RNA被杂交到DNA模板上时，用核酸酶S1进行保护试验的分析;当检测RNA被杂交到来自DNA模板的RNA上时用RNA酶。外切核 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 外源DNA片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化，则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口，当杂本导入感受态细胞 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 1. Add appropriate volumes of RNA ( Try 5 and 10 ug RNA plus 600 or 800 pg dig labelled probe. 2. Include 2-3 yeast RNA samples/probe used. 2ul of 5mg/ml sto ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 The ribonuclease protection assay (RPA) is a highly sensitive and specific method for the detection of mRNA species. The assay was made possible by the disco ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 Ribonuclease Protection Assay contributed by James McCaughern-Carucci Yale University Most RNase Protection protocols require an overnight hyb with numerous ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 1 analysis of yeast mRNA using oligonucleotide probes Steve Hahn. last modified Sat Oct 17 1998 Mix the following in an 0.5 ml eppendorf tube: 10-20 microgra ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。 1。原理：双链RNA(杂交的)能够抵抗RNA酶的降解。 2。应用：检测RNA表达 3。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1. 检测灵敏度 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 S1 Nuclease Protection Assay End-label oligo (20-25 mer) 4 µl 5X T4 Kinase Buffer 5 µl ATP (7000 Ci/mmol) 10 µl water + oligo (200 ng) 1 µl T4 Kinase 1. 37 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 核糖核酸酶保护实验(Ribonuclease protection assay，RPA)是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA;未结合的单链RNA经R ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1. 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 RNA酶保护试验实际上是很早就出现的技术。在1982年出版的第一版圣经(分子克隆)还没有提到。在1989年出版的第二版中已经出现：7.71 Mapping of RNA with Ribonuclease and Radiolabeled RNA(可参见中译本P383-387)。在2001年出版的第三版中的第七章 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 核糖核酸酶是催化RNA水解、作用于RNA中的3′，5′-磷酸二酯键的内切酶，分别生成5′-磷酸核苷和3′-磷酸核苷。 核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键，在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶。不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶 ...

相关专题 DNA连接与转化 氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml) 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml) 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10 ...

相关专题 基因芯片是目前常用的一种基因检测方法。基因芯片又称DNA芯片，它的测序原理是通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的杂交测序方法。 基因芯片是在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针，当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置， ...

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