噬菌体

管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。其中，芽孢悬液的制备就有很多需要注意的地方。在用管碟法检定抗生素时，需要将菌悬液与培养基混合均匀、覆盖在底层培养基上，以形成抑菌圈。其中，对于菌悬液的制备要求为：将所用菌的斜面培养物用 1～2 ml 灭菌水洗下，形 ...

1. 准备 NZY agar plates（至少用前 24 小时倒好） ，用前在37℃培养箱中烘烤1-2 小时以去除水滴。 2. 将过夜培养的 XL1-blueMRF' 细菌 2000 转/ 分，离心10 分钟，将细菌溶解在10mMMgSO4 中，调整细菌浓度为 OD600=0.5。 3. 融化 NZY top，并将 NZY top 放在 50℃水浴中。 4. 将适量的 XL1-blue ...

λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径，其一是裂解生长，环状DNA分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；其二是溶源性生长，即感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体DNA中与之一起复制，并遗传给子代细胞，宿主细胞不裂解。平板培养 ...

1、铺平板感染培养物的制备： 对直径为10cm的培养皿，取105pfu的噬菌体（通常约为一个噬菌斑重悬液的1/10或一个大噬菌斑重悬液的1/100）与0.1ml铺平板细菌混匀。 对直径为15cm的培养皿，去2×105pfu的噬菌体与0.2ml铺平板细菌混匀。 至少要置一个含为感染细胞的对照管，将感染培养物和对照均置于37℃培养20min，将病毒吸附到细胞上。 如果制备不易生长的&la ...

Introduction: The phage lysate from the plate contains bacterial DNA and RNA as well as phage DNA encased in the phage coat. The following procedure digests bacterial RNA and DNA precipitates the pha ...

1. suspend a single plaque in 1 ml PSB2. adsorb 10 min at 37°C: 0.1 ml eluted phagundefined/0.1 ml MgCa/0.1 ml saturated K802 culture grown in NZY broth/0.2% maltoseuse 10 ml of this to inoculate 2.5 ml ...

Inoculate 5 ml of lambda-broth in a glass culture tube with a single colony of an appropriate host strain of E. coli. Incubate the culture on a roller at 37°C overnight. Transfer the culture to ...

1. Grow a fresh overnight culture of lambda host cells (we use K803 for EMBL3) in LB or T-broth fortified with 10mM Mg++ .2. Mix a small amount (1 to 20μl aim for an M.O.I. of +0.01) of high titer ...

Purpose: Mini-prep method for lambda phage DNA purification from lysates. Time required: 4 hours once the lysate is in hand Special supplies required: BioRad Econo Columns (Cat.# 731-1550) Whatman ...

一. 液体培养法 1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养16~24小时 2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合，静置15分钟使其感染。 3. 将混合液接至含10 ml新鲜液体培养基的试管中，于适当温度下振荡培养约8~24小时，培养时间依噬菌体之不同而异。 4. 将培养液移入离心管中，以10000 rpm (5000 g)离心10分钟 ...

材料： 1. 缓冲液和溶液：氯仿；NaCl（固体）；聚乙二醇（PEG 8000）；SM 2. 酶和缓冲液：胰Dnase I (1mg/ml)；胰Dnase I (1mg/ml)于TE中（ph7.6） 3. 离心机和转子：Sorvall GSA 转子或相当型号 4. 专用设备：量筒（2L） 5. 载体和菌株：大肠杆菌培养物，经λ噬菌体感染和裂解 方法： 用PEG沉淀噬菌体 ...

一、目的： 1. 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。 2. 学会检查噬菌体的方法。 3. 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。 二、原理： 噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清，或在含有 ...

材料： LB或NZCYM顶层琼脂或琼脂糖，含有X-gal。对于3ml顶层琼脂，加40ul 2%X-gal。X-gal要在临用前才加入已冷却的顶层琼脂（47℃）中。 大肠杆菌铺平板细菌。只有不是β-半乳糖苷酶的过量表达株，可采用任何支持特异性λ噬菌体裂解生长的大肠杆菌。细菌染色体上单拷贝lacZ基因的存在不影响噬菌斑的检测。 方法： 1. 将λ噬菌 ...

噬菌体滴度的测定 在宿主细胞过量的情况下，噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因，在感染以前，要将噬菌体进行稀释，而不是将宿主细胞稀释。以低MOI（感染重复性）铺板，也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA序列。【材料和试剂】（1）微波炉（2）LB/IPTG/Xgal培养板（3）LB培养基（4）顶层琼脂糖凝胶【操作步骤】（1）在5~10ml LB培养基中接种单个ER2537克隆， ...

以器官和组织为靶目标的噬菌体肽筛选 1．实验材料 (1)肽库：美国NewEnglandBiolabs的环状7肽库(Ph，D-C7CTm Phage Display Peptide LibraryKit)。 (2)人正常细胞株和人肿瘤细胞株。 (3)裸鼠。 2．实验器材和常用试剂 同蛋白质分子为筛选靶目标的实验方法。 3．实验方法 1)目标噬菌体 ...

本文叙述了用甲酰胺和SDS/蛋白酶K从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA以及可被单一限制酶或双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备方法。因为在某些情况下，制备好的λ噬菌体DNA还必须经单一限制酶或双限制酶切割作用才可用于克隆。

请问伤寒沙门氏菌如何用噬菌体分型，这种噬菌体的试剂到哪购买？ 江西省卫生防疫站的何晓青自制了12株沙门氏菌噬菌体分型系；另外中国医学细菌保藏管理中心沙门氏菌分型噬菌体专业实验室也有。你可以跟他们联系一下。 具体做法请参考以下文献： 何晓青等，中华预防医学杂志，199428(3):136另外，河南省卫生防疫站底秀娟建立了一种伤寒沙门氏菌分型的新方法也提供给你，具体见附件．希望对你有帮助！ 一种伤寒沙 ...

我们做的是大肠杆菌的基因工程菌。前段时间连着三批都感染了噬菌体，每天一批，我们做的是60T发酵罐。 噬菌体爆发迹象： 1、PH一直回升，会比较高（我们正常是7.00，回升到7.8）。 2、DO也很快回升，会上升到130%多。 3、发酵液变稀，OD值很快下降。 4、镜检看不到任何菌体。 5、爆发的时间一次比一次提前，都是发酵前期。 噬菌体爆发的速度很快，也就那么30分钟左右，当时我们刚刚移种也就那么 ...

各位好！我有几个关于PHAGE DISPLAY 问题想请教下你。请问一下Ph.D随机太库和M13 cDNA肽库两者的优缺点?？各在什么情况下选择较佳？还有NOVEGEN 的预制人组织的cDNA文库原理，在什么情况下使用?我打算研究与睾丸组织中相互作用的蛋白，是否用NOVEGEN的预制人睾丸cDNA文库?最后请问这些文库的代理商？噬菌体： M13KE ...

园友们最近有个问题不知道该怎么很好的解决就是要估算T7噬菌体浓度!不知道T7 phage的分子量请您指点一二谢谢! 对于病毒的定量测定，主要有一下几种方法： （1）病毒效价。 最常用的方法，将T7和大肠杆菌悬液以及半固体营养琼脂混合后倒在高琼脂浓度的平板上，培养，然后计数噬菌斑数，计算每毫升噬菌体悬液形成的噬菌斑数（PFU）。 （2）电镜下直接计算病毒颗粒数目。 这当然不是很可行了，不实用。 （3 ...