病毒

80年代的技术很经典，但那时分子生物学不够发达，现在方法有无进步呢?如何利用现在的技术来鉴定全新的病毒呢?有此想法很久了，可一直未搞清楚。这也跟如何发现一个新基因的道理是相通的。这是真正创新的基础。 我先来最简单的，1、采集各种病料，用各种细胞、宿主盲传，分离病毒，期望看到细胞病变。如果连细胞病变都没有，没折了？有别的办法证明有病毒吗？。2、纯化病毒，做电镜观察，与已有病毒形态、大小相似好办，要是 ...

问：我准备做病毒空斑实验，不知到怎样配置甲基纤维素覆盖培养液，敬请各位指教 答：1、我是这么做的： 24孔板VERO，HSV1 1）24孔板预板 2）24h后，弃培养液，用hanks液洗1次 3）接种病毒液0.1ml/ ...

问：现在我在做HSV－2的培养。接种的细胞是Hep－2细胞，对HSV-2是敏感的。曾经复制过一次，3天后出现典型的CPE，效果很好。但是这次不知道怎么回事，4天了还是没有出现CPE，而且培养基都快变黄了。pH值对病毒的吸附、复制影响大吗？我该怎么办呢？盲传是怎么回事？ 答：是不是两批接毒量不一样呀？如果毒量小的话，可能出现的晚，但也会出现的，同时与细胞的培养情况与有关的。盲传就是在不知是否有病毒 ...

一、细胞的裂解 1、单层细胞的裂解 a）吸出培养液，以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞，重复1次，将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上，再将铝板置于冰盘上。 b）直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液，并使之遍布整个平板的表面。（RNA提取缓冲注液配方：0.14mol/L NaCl，1.5mmol/L MgCl2， ...

一、标本的采集和储存 出现症状后72小时内采样。粪便量尽量不少于5ml。贮存于2～8℃，但最多不能超过3天；长期贮存应在－20℃或－70℃。成形便和肛拭子诊断意义较小。 二、所需材料 IDEIA™ norovirus试剂盒（DakoCytomation公司）1000µl和200µl微量加样枪及相应不带滤芯的枪头酶标仪洗板机吸水性能好的卫生纸去离子水(无须高压) ...

轮状病毒（rotavirus，RV）纯化方法，仅供参考 方法一 氯化铯密度梯度离心纯化法（用密度梯度来做，首先我们需要什么样的转头，角式的，或者是甩平转头，一般用甩平转头。在准备密度梯度时，对病毒的浮力密度要清楚是多少，具体数字，然后我们才能知道用多大浓度的梯度介质。） 1、病毒浓缩 （1）PEG沉淀病毒：在收集到的病毒上清加入终浓度5％的PEG6000 4℃搅拌过夜，10000rpm 4℃ 1. ...

一、异硫氰酸胍提取法（这是提禽流感病毒的详细步骤，供参考） 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照加入1.5ml灭菌eppendorf管； 2、加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀； 3、13000rpm离心15min； 4、在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400ul于-20℃预冷的异丙醇； 5、取第3步离心的上清（一定不要吸取到中 ...

1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒； 2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱，Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。)； 3、4℃过夜或放置一段时间； 4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀； 5、将病毒沉淀 ...

1、试剂来源 Vero/slam细胞由国家麻疹实验室提供，使用代次不超过15代。 2、操作步骤 2.1维持液的配制 100mlDMEM& ...

传统的空斑实验方法测呼吸道合胞病毒的PFU值由于其空斑形成较小且需要借助特异性的表面融合蛋白抗体来确定故操作繁琐费用较高。这里介绍给大家三种简单易行的空斑形成实验操作方法： 方法一 1、以5×10e5/ml的密度接种Hep－2细胞到6孔板中，每孔加入3ml细胞悬液； 2、待细胞长成单层后（不得超过48hr），移去营养液，每孔加入400ul的PBS和100ul毒液（10倍系列稀释）； 3 ...

概述 大多数微生物可用超低温保存，超低温保存法是适用范围最广的微生物保存法。需要复杂营养的微生物种，如用其他的贮存方法不能保持其活力（ 如植物的病原性真菌），通常可用超低温的方法保存（ATCC 1983；Halliday，Baker 1985）。此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1℃／分钟）冷冻，直至—150℃，再将这些小管贮存在-150～-196℃的液氮中。 超低温的 ...

有学者利用离子交换层析和分子筛层析纯化甲型流感病毒。整个过程操作方便，可操作性强，避免了密度梯度离心等操作。 Hemagglutinin Stability Stability of HA activity was investigated by titrating inactivated supernatant to different pH using 1M sodium hydroxide ...

一、目的 流感病毒的MDCK细胞分离方法是流感实验的关键技术，用于流感病毒的分离、培养。本SOP是为确保MDCK细胞分离流感病毒的操作准确、规范和可靠而制定。 二、范围 适用于实验室所有技术人员进行流感病毒的MDCK细胞分离。 三、程序 （一）生物安全要求 H5H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒的MDCK细胞分离实验室生物安全级别：BSL-3。实验操作人员需进行BSL-3防护，具体详 ...

病毒含量较高的样品浸出液或体液，可不经过病毒分离直接用于诊断鉴定。病毒含量较少的样品，则需通过病毒的分离增殖来提高诊断的准确性和鉴定的可靠性。病毒分离首先要对样品进行适当的处理，然后接种实验动物或培养的组织细胞。 (一)组织器官样品的处理 1、用无菌操作取一小块样品，充分剪碎，置乳钵中加玻璃砂研磨或用组织捣碎机制成匀浆，随后加1-2ml Hank's平衡盐溶液制成组织悬液，再加1-2ml继续研磨， ...

一般情况下分离病毒可以用传代细胞、原代细胞或者直接用动物接种或者鸡胚接种，只有在找不到适合病毒生长的原代细胞或者传代细胞的情况下才运用动物接种或者鸡胚接种的方法分离病毒。 大致过程应该是这样的： 第一，获取病毒分离样品，这个要求比较高，采集后如果不能立即操作则必须低温保存，并尽快送实验室操作。另外也可以冷冻保存，一般情况下病毒是不容易冻死的。当然某些特殊病毒除外，这需要查阅相关资料。 第二：病毒分 ...

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome VirusPRRSV) PRRSV was propagated in MARC-145 cells and purified by sucrose density gradient separation.Polyethylene glycol 8000(Sigma Chemical ...

简易纯化方法： 1. Infect cells and incubate at 37°C until cytopathic effect is generalized.2. Scrape the cells off into the culture medium and spin at 3000g for 15 min to spin out the cells. 3. Ta ...