实验基础

实验九 荚膜染色法 　　一、目的要求　　学习并掌握荚膜染色的基本方法。　　二、基本原理　　荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易被染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄，易变形，因此，制片时一般不用热固定。　　三、器材　　圆褐固氮菌（Azotobacter chroococcum）；　　荚膜染色液，纯甲醇等。　　四、 ...

实验八 细菌芽孢染色法 　　一、目的要求 　　学习并掌握芽孢染色法。 　　二、基本原理 　　芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加 ...

实验七 革兰氏染色法 　　一、目的要求 　　了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。 　　二、基本原理 　　革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G 表示；染色反应呈红色 ...

实验六 细菌的单染色法 　　一、目的要求 　　1．学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。 　　2．巩固显微镜的使用方法。 　　二、基本原理 　　所谓单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。 　　在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以常用碱性染料进行染色。碱 ...

Ⅳ．微生物的染色与形态结构观察 　　虽然各种类型的显微镜能够观察到微生物的各种形态结构，但一般实验室常用的是普通光学显微镜。由于细菌体积小且透明，在活体细胞内又含有大量的水分，因此，对光线的吸收和反射与水溶液相差不大。当把细菌悬浮在水滴内，放在显微镜下观察时，由于与周围背景没有显著的明暗差，难于看清它们的形状，更谈不上识别其细微结构。而经过染色，就可借助颜色的反衬作用比较清楚地看到菌体形态， ...

实验五 电子显微镜 　　一、目的要求 　　1．了解电子显微镜的工作原理。 　　2．学习并掌握制备电镜标本的方法。 　　二、基本原理 　　1．电子显微镜的分辨力和放大率 　　电子显微镜是利用电子流代替光学显微镜的光束使物体放大成像而由此得名的。发射电子流的电子源部分称为电子枪，电子枪由发射电子的“V”形钨丝及阳极板组成，在高真空中，钨丝被加热到白炽程度，其 ...

实验四 相差显微镜 　　一、目的要求 　　1．了解相差显微镜的基本原理和用途。 　　2．学习掌握相差显微镜的操作技术。 　　二、基本原理 　　暗视野显微镜可以看到活细胞的外部形态，但是看不清内部结构。相差显微镜不仅能观察活细胞的形态，而且还能看到细胞内部结构以及细胞分裂的连续过程。 　　光线通过透明物体如活细菌细胞后，由于受透明物体中密度和折射率不 ...

Ⅲ．显微镜的构造、性能和使用方法 　　由于微生物个体细小，因此我们必须用显微镜来研究它们的个体形态和细胞结构。熟悉显微镜和掌握显微镜的操作技术是研究微生物不可缺少的手段。 　　现代显微镜一般可以分为两大类，一类是光学显微镜，另一类是非光学显微镜。这两类显微镜又可根据不同的情况分成若干类型，现列表如下： 　　本部分包括普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜和电子显微镜 ...

实验二 普通光学显微镜 　　一、目的要求 　　1．熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能。2．学习并掌握油镜的原理和使用方法。 　　二、显微镜的基本构造 　　显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成（图Ⅲ-1）。 　　1．机械装置 　　镜座（base）和镜臂（arm）镜座位于显微镜底部，呈马蹄形，它支持全镜。镜臂有固定式和活动式两种，活动式的镜臂可改变角度。 ...

实验三 暗视野光学显微镜 　　一、目的要求 　　1．了解暗视野显微镜的基本原理及用途。 　　2．学习并掌握使用暗视野显微镜观察微生物样品的基本技术。 　　二、基本原理 　　生活的细菌在明视野显微镜下观察是透明的，不易看清。暗视野显微镜的原理与来自缝隙的一束强光通过暗室时，可清楚地看到其中细微灰尘的现象是一样的，即给样品照明的光不直接穿过物镜，而是由样品上反 ...

实验一 实验室环境和人体表面微生物的检查 　　一、目的要求 　　1．证明实验室环境与体表存在微生物。 　　2．比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。 　　3．体会无菌操作的重要性。 　　二、基本原理 　　平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁 ...

实验五十一 昆虫病毒的培养 　　一、目的要求 　　1．学习用感染宿主的方式培养昆虫病毒的基本方法。 　　2．观察核型多角体的形态。 　　二、基本原理 　　昆虫病毒是以昆虫为宿主的病毒，与宿主的特异性高。研究昆虫病毒的重要目的是保护益虫和杀灭害虫。例如蚕遭到病毒的侵害会造成巨大的经济损失，因此，研究与杀灭这些病毒，对防治与控制蚕病从而达到保护蚕业生产有重要价值；另方 ...

实验十七 细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落观察和细菌菌落制片 　　一、目的要求 　　1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特征。 　　2．学习细菌菌落制片的方法。 　　二、墓本原理 　　菌落形态是指某种微生物在一定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用 ...

实验十九 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 　　一、目的要求 　　1．明确培养基的配制原理。 　　2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。 　　二、基本原理 　　牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源， ...

实验十八 微生物大小的测定 　　一、目的要求 　　掌握用显微测微尺测量微生物大小的基本方法。 　　二、基本原理 　　微生物细胞大小，是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小，只能在显微镜下测量。用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺（图Ⅳ-4）和镜台测微尺（图Ⅳ-5）。 　　镜台测微尺（图Ⅳ-5）是中央部分刻有精确等分线 ...

Ⅵ．消毒与灭菌 　　消毒（disinfection）与灭菌（sterilization）两者的意义有所不同。消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体而言，灭菌则是指杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。消毒与灭菌的方法很多，一般可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法。 　　一、加热法 　　又分干热灭菌和湿热灭菌两类。 　　1．干热灭菌 　　有火焰 ...

实验二十 高氏1号培养基的制备 　　一、目的要求 　　通过对高氏1号培养基的制备，掌握配制合成培养基的一般方法。 　　二、基本原理 　　高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基。这种培养基是由可溶性淀粉（作为碳源），KNO3（作为氮源），NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O（作为无机盐，为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子）和FeSO4 ...

实验二十一 马丁氏培养基的制备 　　一、目的要求 　　通过对分离真菌用的马丁氏（Martin）培养基配制，掌握对选择培养基的配制方法，并明确选择的原理。 　　二、基本原理 　　马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红（玫瑰红，Rose Bengal）和链霉素等组成。其中葡萄 ...

实验二十二 干热灭菌 　　一、目的要求 　　1．了解干热灭菌的原理和应用范围。 　　2．学习干热灭菌的操作技术。 　　二、基本原理 　　干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭 ...

Ⅶ．微生物的纯培养 　　自然界中各种微生物混杂地生活在一起，要研究某种微生物的特性，其先决条件必须使该微生物处于纯培养状态，也就是说，培养的是微生物的某一个种或株，培养中的所有细胞有着共同的来源和仅是同一细胞的后代。使用显微操作器（micromanipulator）单细胞挑取法，可以直接得到纯培养，但一般都用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或划线平板法来分离、纯化微生物以获得纯培养，因后几种方 ...