免疫细胞与组织染色实验

1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存)，厚度为 5～6μm。 2. 载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。 3. 如不马上染色，可密封后- 20℃保存。 4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。 5. PBS 洗 2 次，每次 5 分钟，( 必要时应用 0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔) 6. 3% H2O2灭活内源性过氧化物 ...

间接标记法 1. 制备单细胞悬液； 2. 细胞计数，取出 1×106 个细胞于试管中； 3. 用台盼蓝染色计活细胞数，要求活细胞数 >90～95%； 4. 在试管中加入一抗， （剂量按照说明书的要求） ，孵30育～60 分钟； 5. PBS 洗涤 1～2 次，1500rpm，离心 3 分钟，弃上清； 6.加入二抗，孵育 20～30 分钟； 7. PBS 洗一次，15 ...

1. 取出细胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20~30 分钟。 2. 蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。 3. 打孔液浸泡 5 分钟。 4. 蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。 注：第 3、4 步仅用于检测细胞内抗原，检测细胞膜抗原时不用。 5. 正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 （保持组织呈湿润状态）滴加正常山羊或兔血清 （与第二抗 体 同源动物血清）处理，37℃ ...

一．石蜡切片免疫组化染色实验步骤： 1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时） 。 二甲苯 、II各 10 分钟。 梯度酒精：100%，2 分钟 95%，2 分钟 80%，2 分钟 70%2 分钟。 蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。 2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2O 2，室温 10 分钟（避光） ...

1. 将藻酸钠溶于无菌生理盐水，终浓度为 1.5%； 2. 收集培养的肿瘤细胞，用无血清的培养基洗涤1 次，将细胞沉淀重悬于1.5%藻酸钠溶液中； 3. 将上述肿瘤细胞悬浮液用 1 ml 加样枪缓慢滴入磁力搅拌的 250 mMCaCl2 溶液中，形成乳白色的藻酸盐小珠。继续静置于 250 mMCaCl2 中 30 min 即可 使用。以上操作步骤均在无菌条件下进行； 4. 将第 4 ...

一、原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。不标记抗体法又可分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。前者利用基因工程方法 ...

一、 原理 免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。 二、材料与试剂 1．马脾铁蛋白 2．硫酸铵 3．硫酸镉 4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将XC配制成1%溶液。注意配制的水及容器必须特别清洁，配制后放置4℃数天，以不 ...

Ecl 显色原理：鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。 2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。 3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。 4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1mi ...

显色（HRP酶） 1．增强化学发光法(ECL) Ecl 显色原理：氨基苯二酰肼类主要是鲁米诺及异鲁米诺衍生物，是最常用的一类化学发光剂。鲁米诺（luminol，5＇-氨基-2，3-二氢-1，4-酞嗪二酮）的分子结构及化学反应式如下： 鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1） ...

染色质免疫沉淀（ChIP）是研究蛋白质-DNA相互作用的一项强大技术，广泛用于多个领域的染色质相关蛋白的研究（如组蛋白及其异构体，转录因子等），特别适用于已知启动子序列或整个基因位点的组蛋白修饰分析研究。这项技术采用特定抗体来富集存在组蛋白修饰或者转录调控的DNA片段，通过多种下游检测技术（定量PCR，芯片，测序等）来检测此富集片段的DNA序列。

考马斯亮蓝(CBB)是SDS-PAGE电泳时常用的蛋白质染料，具有染色程序简单，效果好等优点，但其灵敏度要低于银染和荧光染色，因此后人在原始考马斯染色方法上作了一些修改。本视频介绍Kang等在2002年发表的快速、灵敏的胶体状考马斯G-250蛋白染色法。

视频演示了一个成年猴脑目的蛋白免疫检测的系统方法。这种方法依赖于组织包埋切片技术和专门的自由浮动切片批量染色工具。

膜蛋白的功能受细胞膜脂质成分的调节。这种调节作用由特定的脂质-蛋白质相互作用，以及更全面的脂双层-蛋白质相互作用而产生。这些相互作用在药理学研究中特别重要，因为目前市场上许多药品可以通过改变脂双层材料性能，来改变膜蛋白功能。短杆菌肽通道的形成依赖于短杆菌肽亚基构象的改变，反过来又依赖于脂质性能。因此，短杆菌肽通道电流可以指示由某些化合物导致的双分子层性质的变化。

果蝇神经肌肉接头（NMJ）是一种研究突触发育和可塑性的模型系统。免疫组织化学技术可以用来清晰成像NMJ组成部分。在这段视频中我们将演示如何使用抗体染色法可视化果蝇幼虫NMJ。

视频展示了普遍使用的线虫寿命测定方法，线虫在固体线虫生长培养基上依靠紫外杀死的细菌来生存。这些程序可以很容易地改变为各种常见条件下寿命的检测，包括在饮食中加入活菌或有RNA干扰作用的物质，以及限制饮食。

该视频演示如何从夏威夷短尾鱿鱼（Euprymna scolopes）获得血细胞，以及利用这些细胞进行细菌粘附实验的方法。

未脱钙骨组织学可以显示骨组织的微细构造，但是它存在技术上的挑战，特别是对于大尺寸的样品。这里我们将介绍一种能制作高质量切片标本的方法，对技术难点以及如何克服这些困难也作了讲解。

植物通过模式识别受体(PRRs)识别环境中潜在的病原体，这些受体和微生物的保守结构病原相关分子模式(PAMPs)相互作用。这里将示范一个基于细胞死亡的PAMPs分子引发的植物免疫反应实验。

细胞内抗原的检测-间接免疫荧光法 细胞内抗原的检测过程与细胞表面抗原检测过程基本一致，只是在与一抗孵育前，需要预先对细胞用非离子去污剂进行透化处理。【操作方法】（1）取已固定好的细胞爬片或甩片或经过预处理的组织切片（石蜡或冰冻切片）；（2）用含0.2%TritonX-100或NP-40的PBS溶液透化固定后的细胞2min（室温），有些标本可能需要长达15min，时间视抗原而定；（3）余下步 ...

斑点免疫金银染色法（dot-IGS/IGSS） 1984年，Moeremans等将斑点酶联免疫吸附法（dot-ELISA）与免疫金银染色法相结合，建立了固相载体上的斑点免疫金银染色法（dot-IGS/IGSS）。蛋白质抗原通过直接点样或转移电泳吸附在硝酸纤维素膜（NC膜）上，与特异性抗体反应后，在滴加（或浸入）胶体金标记的第二抗体，结果在抗原抗体发生金颗粒聚集，形成肉眼可见的 ...