免疫细胞与组织染色实验

荧光素标记抗体技术撰稿　金伯泉、赵宁--------------------------------------------------------------------------------　　(一)　原理　　目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光 ...

一、标本制作　　可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。　　二、荧光抗体染色方法　　（一）直接法　　1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。　　2．洗片 　倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次，搅拌，每次5min，再用蒸馏水洗1m ...

制备好免疫胶体金后，还需要将其稀释到一定浓度，并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说，特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如下，不足之处欢迎批评或补充。1 合适的离子种类和强度免疫胶体金毕竟是含有生物活性分子， ...

最近在学习免疫荧光技术，总结方法如下。免疫荧光非特异性染色的消除方法一、非特异性染色的主要因素　　组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点：　　（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。　　（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。　　（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。　　（ ...

看过不少此类文章,做免疫组化过程中遇到困难看看这篇文章,也许很有帮助!影响免疫组化的因素及对策（一）免疫组化染色假阳性及其对策1 、消除内源酶的影响 在涉及免疫过氧化酶的各种染色中，均用过氧化物酶来标记抗体，酶的作用是催化底物，使显色剂显色，正常组织中也含有一定量的过氧化物酶，其同样也能催化底物显色，而影响免疫组化染色的特异性，因此在加入标记酶前应设法将其灭活，以保证染色反应的特异性。通常情况下，去除内源酶的方法是先用 3% ...

一、非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处，坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性，均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。二、非特异性染色的原因1. Ig与Fc受体结合多见于冰冻切片（特别是淋巴造血组织，淋巴细胞，单核细胞，组织细胞表面多），主要是和二抗反应，因为一抗一般稀释度均较大，因此Fc受体的干扰基本不存在。由于福尔马林固定破坏了大部分的Fc受体，所以石蜡切片不多见。 ...

免疫组化网络资源集锦!!自己选看啊!8D1.Immunohistochemistry Resource Group - Information and support for the field of immunohistochemistry. Images, resources, group reports, online database, applied IHC and molecular morphology, IHC references, and employment information.-- http:/ ...

1、载玻片的处理：抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中，停留20~30秒钟，取出稍停片刻，再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES，置 ...

免疫组化常见问题的处理当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。比如，如果一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗 ...

　一、标本制作　　可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。　　二、荧光抗体染色方法　　（一）直接法　　1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。　　2．洗片 　倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次，搅拌，每次5min，再用蒸馏水洗1m ...

Immunofluorescence StainingFormaldehyde fixation for cultured/cytospun cellsAll steps are performed at room temperature unless otherwise indicated.Square and rectangular coverslips may be fixed and washed in small Coplin jars, 35 mm petri dishes, or 6 well TC trays.Small ro ...

今天偶尔在晶美网站看到量子点技术。感觉挺新鲜。拿来大家共享。《SCIENCE》评为2003年十大科学突破之一！！Quantum Dot Corporation是世界上专门提供量子点产品的公司！量子点（quantum dot， QD）又可称为半导体纳米微晶体（ semiconductor nanocrystal），是一种由II-VI族或III-V族元素组成的稳定的、溶于水的、尺寸在2~20nm之间的纳米晶粒。目前研究较多的是CdS、CdSe、C ...

免疫荧光常见问题1．问：免疫荧光：用免疫荧光方法做同样的内容，组织切片和培养细胞，两者操作过程中有哪些不同？参考见解：只是固定方法不同,细胞固定用甲醇,切片固定用多聚甲醛,而染色方法是一样的.2．问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤以及注意事项参考见解；我正在做冰冻组织切片的免疫荧光的双染。有些体会：1.选取primary antibodies时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbi ...

本人刚开始做实验，杳看了一些资料，准备用以下两种方法中一种进行实验，请大家指教，看看具体条件行不行，有什么要改进的地方，谢谢！！！方法一：1、白片(石蜡切片)放于处理好的载玻片上，烤片60度1h（此载玻片未经粘片剂处理）2、二甲苯5min *33、异丙醇5min *34、乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min5、双蒸水洗3miundefined36、丙酮洗3 次7、APES胶立式染缸1-3min8、丙酮洗9、双蒸水冲3次10、PBS洗5min1 ...

蓝色 {color: #00F;}接上一期 师兄精选：免疫组化菜鸟攻略（一），本期我们再聊聊免疫组化（我比较随性，想到哪写到哪）首先，先介绍下免疫组化一般操作流程：1. 石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(PH7.4)冲洗三次，每次5分钟。2. 根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复。修复方式：我采用压力锅进行抗原修复，取一定量的修复液于压力锅中，加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，盖 上锅盖 ...

免疫组化是一门比较传统的技术，国外杂志对免疫组化还很重视，今天师兄就先跟你们简单侃侃，侃的不好，勿喷哈。基础知识免疫组织化学( immunohistochemistry )又称免疫细胞化学( immunocytochemistry )，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜（包 ...

1、石蜡切片和冰冻切片的比较？（1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。（2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。 ...

免疫荧光是标记免疫技术发展最早的一种，它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，通过将抗体与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括，细胞固定和通透，封闭，孵育一抗，二抗等。除了这些基本步骤，以下建议可以帮助您获得更好的实验结果。 1、细胞固定和通透 为达到最佳的检测效果，细胞需要经过固定和通透。这些步骤非常关键，细胞和抗原需要保证最佳的结构，并利于抗体与抗原 ...

请大家先学习图像分析基本原理及分析过程 免疫组化技术是当今广泛应用的检测组织切片内特定蛋白的实验手段。利用图像分析软件来判读切片图像上蛋白表达程度是随着软件技术的发展逐步应用到免疫组化技术中的。组织上的蛋白表达程度，在图片上表现为免疫染色的深浅及面积大小。用肉眼只能定性地进行判读，最多粗略地作一个主观的分级评价。使用图像分析软件则可以对图片染色的程度作一个定量的测量。这个测量结果与切片上的蛋白表达强度有理论 ...

图像分析基本原理及分析过程概述在生物及医学研究中，对图像的判读与分析特别是对显微镜下微观图像的观察研究从来都是重要的研究手段。随着技术的进步，分析图像的方法也从眼观尺量进入到了使用计算机软件进行定量分析的阶段。计算机软件的发展速度呈加速前进，采集图像的设备也不断更新，这使得我们能有更多的手段来分析测量复杂的生物图像。现在我们可以使用CCD数码相机来采集图像。使用功能比较强大的图像分析软件来进行图像分析测量 ...