免疫细胞与组织染色实验

免疫组化技术是病理科主要的辅助诊断技术之一，质量控制要求严格，目前病理技术人员关注的焦点一般在操作流程及抗体质量上，而一直忽视实验用水的质量问题。免疫组化实验流程较多，常涉及烤片，脱蜡，水化，抗原修复，抗体孵育，显色，复染，脱水及封片。实验用水常为蒸馏水或纯水，其中蒸馏水是将水蒸馏后去除电解质及与水沸点相差较大的非电解质，如屈臣氏饮用水; 而纯水则利用反渗透法去掉了水中的全部非水物质(全部电解质与非电解质) ，是一种偏酸( ...

免疫荧光实验步骤脱蜡至水二甲苯Ⅰ(8min)二甲苯Ⅱ(8min)无水乙醇和二甲苯1:1(5min)无水乙醇(3min)95%乙醇(3min)85%乙醇(3min)75%乙醇(3min)PBS洗3遍二．抗原修复柠檬酸钠抗原修复液修复。抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性 ...

刚入师门的呆萌·王最近悲喜交加。师傅董太师看他骨骼清奇颜值高，便给了他「镇组之宝」——一块尚方宝肉，并拍拍他的肩膀，「小王，拿着这个好好做，稍微做出点东西，你就能顺利拿上学位，当上小 PI，迎娶白富美，走向人生巅峰！」小王兴高采烈拿着这沉甸甸的宝肉，但左右思量都觉无从下手呀！便去请教大湿兄傲娇·李，「师兄，师傅给了我一块宝肉，让我做点东西，你说我是油炸、清蒸还是红烧好呀？我寻思，我可能还做不过门口的黑料大爷呢，咋办？」傲娇·李听了，噗 ...

随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM, USA); Alexa Fluor®系列(Life technology, USA); DyLight系列; Cy系列; IR Dye系列等等。使用最多的为Alexa Fluor®系列和CFTM系列。一、CFTM系列染料的核心对比Alexa Fluor®系列具有以下几点优势：1、新型罗丹明核心罗丹明染料 ...

DAB染色后切片着色呈阴性结果背景：其实免疫组化在DAB染色后一般有四种情况：阳性染色效果很好、阴性染色、非特异性染色很深、阴阳脸（染色不均匀）。而阴性染色是许多初学者经常遇到的头疼问题。我身边有个研究生同学在我们实验室初次涉入免疫组化，听说步骤不难，跟我后面做了几次之后，就自己开始做了，连续做了三次，结果均是阴性染色。很扫兴，不知是什么原因导致的。问题及其解答：免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些？1、抗体浓度和质量 ...

案例一：DAB染色后切片着色一片黄/背景深背景：奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验，许多从北京购买的试剂买不到，对我们的许多实验产生了很大的影响。我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒，效果不错，在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验，第一批组化实验结果很好，抗体浓度感觉比较合适（Santa Cruz公司1：200），等做第二批时发现封闭血清不够了，为了保证实验顺利进行，我又从福州迈新顶了一 ...

expolee 大家好，最近检测肿瘤markerA表达，qPCR和WT检测肿瘤细胞是高表达的，收集病人标本做成组织芯片后免疫组化检测则是：肿瘤组织弱表达、正常组织弱表达，怎么解释呢？尽管IHC只是定位，可弱表达的话有没有再往下做下去的意义了？欢迎大家发言，谢谢！shylook 组织标本保存问题IHC是否规范是否摸过抗体使用浓度 包括二抗一抗能能否做IHCexpolee 同时检测两个指标（一抗分别来自不同公司）IHC结果一个公 ...

songyong 大家好，我在检测人子宫内膜中的NF-kappaB，但做了几次都没做出来，怎么办呢？我一抗用的是CST的，按他们公司的Protocols做也做不出来。大家可以推荐一个NF-kappaB可用于免疫组化的一抗吗？谢谢！genebio8890 投诉，换货小小困惑 我也做你的因子，我是不太懂，你用的是什么剂型的啊？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师 ...

chenlinana 各位战友，本人最近做p-caspase3的免疫组化染色，阳性结果明显，但是有一个奇怪的现象：说明书上p-caspase3是胞浆染色，但是我的片子是胞浆和胞核都染色，而且是胞核明显，查看了园子里的资料，有人提出凋亡细胞存在胞浆/胞核移位情况，但本人不明白这是什么意思，难道凋亡的细胞胞浆和胞核已经完全混淆了吗？请指教，是否有文献支持这种说法。chenlinana 怎么没有人回答呢，万分焦急。期待中......刺 ...

songyong 各位亲们：请问用免疫组化的方法检测出来的NF-kB 是已经活化了的NF-kB呢？还是无活性的也包括进去啦？谢谢ronaldo_zj 体内的细胞信号通路研究确实不好评价，不过就NF-kappaB这个通路来说，我个人觉得可以通过一下几个方法来衡量：1. 经典的NF-kappa B的活化往往都是NF-kappaB（包括p50、p65、p52等）作为转录因子活化而转位至细胞核内发挥转录调节功能。所以我觉得楼主可以首先观察和比 ...

dhy481 如图，红色是TRITC标记的细胞膜上的一个蛋白，绿色是FITC连接的一段小肽，是在细胞固定前加入到培养基里的，大家帮忙看看，这是不是共定位，谢谢大家～woxingwosu 看起来好像不是共定位。如果要说共定位，或者说小肽能结合到膜上的蛋白，我认为至少在膜上的绿色至少要比其他的地方要亮的多，这样才能说明是共定位，你这个有可能是非特异性的分布而已。需要加个对照来看看吧。个人意见，呵呵～～P.S. 这个图照得太不清楚了， ...

眉眉 有做β-arrestin2的吗？希望跟你学习学习，给我发悄悄话，谢谢！shanshanhu1986 我就在做，悲催amygdala 博士期间的课题就是关于这个的叶子doctor 有做关于β-arrestin2免疫组化的吗？求助本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

香溢 免疫组化, FISH, CGH, LOH, MSI, 克隆性重排等的应用范围及应用”盲点”。请教各位高手，这个题目怎么回答？马上就要考试啦，答不出来，太难了！！谢谢minmin4003 同问啊~~~illusionistx 大家都是校友……ellem 免疫组化的应用范围答：（1）提高病理诊断准确性（2）对疾病的预后和治疗的意义（3）癌基因蛋白的应用（4）对肿瘤增生程度的评价 ki67 PCNA（5）微小病灶的发现 微小癌 微小病灶（如羊水栓塞）（6）在肿瘤分期上的意义（7）指导 ...

husttjmu 各位战友由于条件限制和一点别的原因，组织样本取出来以后不得已在常温下放置了大概30分钟。不知道这样以后，样本是否依然可以用来做免疫组化和免疫荧光呢？对做western blot和RNA提取有多大的影响呢？感谢各位战友的帮助和支持！zjubell 常温下放半小时，对蛋白和RNA基本上无任何影响（当然得看你的需求了），一般情况下的实验都没问题，包括基因芯片和测序。如附图。我对此专门做过测试，RT下放1小时，基 ...

drlxg 诸位战友，因课题需要进行小鼠标本的RhoA、RhoC、Rac1蛋白的免疫组化染色，但查过多家公司的抗体，大多用于westernbot、免疫荧光等试验方法，极少直接标明可用于免疫组化，请问可否能用适合免疫荧光的抗体做免疫组化染色？另不知哪位能有上述三种抗体或其一，因经费紧张买不起大包装的抗体呀！多谢！！:)dianaofyezi 可以试试用免疫荧光的抗体做IHC，但是如果抗体的供货商没有明确标明能够做IHC的话 ...

管树军621 各位大侠，我在论坛上看到大家检测NF/KB与IKBa用的都是WB的方法,我想用免疫组化的方法，好出结果吗，两者相比那种方法更容易出结果呢？我只想只一个好出结果的方法并且试剂相对便宜一些。谢谢！请高手指点。我的邮箱是guanshujun621@163.com00501101 如果你是硕士的话，可以骗过国内的人，蒙混过毕业就行了如果你是博士的话，要发SCI，请不要用组化代替wb，老外没有人这样代替的。lnzyx ...

yangxiexun 最近做肿瘤细胞的stat3的免疫细胞化学，显色后老是成片的显色，有细胞的地方就有颜色，没细胞的就没有，细胞核的颜色色稍深点，显色的地方苏木素染不上颜色。做了个PBS阴性对照，这片细胞就是核蓝染的颜色。真不知怎么回事，做了一个月了还是这样，急啊thomas531 MARK 家族我们都快做烂了,你买CELL CIGANALLING 的,你会有一种中奖的感觉yangxiexun 可我做的不是你那个家族啊，且买的也是s ...

maggertu 想请教个问题，做stat3的免疫组化，是选用stat3抗体，还是p-stat3抗体？看到国外大部分文章都做p-stat3，而国内有些文章用stat3抗体，搞不明白zfyyzz00 stat3抗体只是检测总蛋白，看活性必须要做P-stat3。在转录水平就应该做EMSAmaggertu 谢谢，再请教一下，应该只有磷酸化的stat3才能进行核内转移，那么做stat3抗体，为什么做免疫组化也会有核内染色显示？还有， ...

foreye 我想免疫组化法检测NFkBp65，请问santa cruz的这类抗体好用么？sc109和sc372分别识别的是NFkb p65的N末端和C末端，这两个有区别么？是否都是激活后暴露出来的？（记得C端是结合DNA的位置）请战友前辈指教！谢谢谢谢！lishufang821 我最近也在做免疫组化法检测NFkBp65，买的中山的，现在正在摸浓度，赫赫多交流阿。QQ：493093683biofish 免疫组化抗体的选择问题：能用 ...

常用的免疫酶染色方法又分为以下两种方法：-酶标抗体法直接法间接法-非标记抗体酶法酶桥法PAP法(1) 酶标抗体法通过共价键将酶结合在抗体上，制成酶标抗体，与标本进行反应后，再用酶组化法将酶显色，使之生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，以供光镜和电镜观察。-优点：切片能长期保存、反复观察，适于镜下半定量分析。-缺点：酶与抗体形成的共价键，可损害抗体和酶的活性；易产生非特异染色。(1) 酶标抗体法——直接法将酶直接标 ...