基础免疫实验

一、实验原理 火箭免疫电泳（rocket immunoelectrophoresis，RIEP）是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时，含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰，峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。因此，当琼脂中抗体浓度固定时，以不同稀释度标准抗原泳动后形成 ...

一、免疫固定电泳介绍 鉴定某一蛋白成分最好的方法是通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原性。免疫 固定电泳是抗原在载体上电泳后直接用抗血清作用于蛋白，进行抗原抗体反应，使 抗原在电泳位置被免疫固定。 血、尿中游离轻链（本周氏蛋白）的检测对诊断轻链病是不可缺少的步骤，并对多 发性骨髓瘤等疾病的预后判断也有一定帮助。免疫学方法是使用抗轻链（KAP或LAM） 抗血清进行免疫分析。 二、实验仪器 Sebi ...

一、项目名称 免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION） 二、检验方法名称 琼脂糖凝胶免疫固定电泳 三、方法学原理 血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四 ...

一、概念与临床意义 冷凝集实验主要用于由肺炎支原体引起的原发性非典型性肺炎的辅助诊断。参考值：凝集价≤1：32；临床意义：由肺炎支原体感染引起的原发性非典型性肺炎患者的血清中常含有较高的寒冷红细胞凝集素，简称冷凝集素，它能与患者自身红细胞或“O”型人红细胞于4℃条件下发生凝集，在37℃时又呈可逆性完全散开。75％的支原体肺炎病人，于发病后第二周血清中冷凝集素效价达1： ...

机体受某些抗原刺激后，可产生不完全抗体，由于这种抗体体积较小、长度短，只能与颗粒抗原一方相结合(又称单价抗体)，因而不能出现肉眼可见的凝集反应。 Coombs首先根据抗体存在于球蛋白，注入异种动物的球蛋白又是抗原的原理，将含有不完全抗体的血清球蛋白免疫异种动物，获得抗球蛋白抗体，此种抗体可以起到桥梁作用，连接已结合有不完全抗体的抗原，产生肉眼可见的凝集反应，这种反应称为抗球蛋白试验。抗球蛋白试验又 ...

五、火箭电泳试验 火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为：在电场作用下，抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动，二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线，而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系，因此本法可以测定样品中抗原的含量。 1.材料： （1）诊断血清（抗体）：抗人IgG或IgA免疫血清 （2）待检血清（抗原）：人血清 （3）参考血清 （4）pH8.6，离子强度0.05M巴 ...

四、免疫电泳实验 免疫电泳实验是先将抗原物质在琼脂凝胶中做电泳分离，然后于凝胶槽中加入抗体血清。使抗原抗体进行双向扩散，在比例适宜部位形成特异的抗原抗体沉淀弧线。每条沉淀弧线代表一组抗原抗体复合物，故可用抗原成分分析；且可以根据其迁移率与抗体所出现的特异反应进行鉴定。 1.材料： （1）待检标本（抗原）：正常人血清。 （2）抗体：正常人血清的家兔免疫血清。 （3）1.5%离子琼脂（系用巴比妥缓冲液 ...

三、对流免疫电泳试验 对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果，故可用于快速诊断，敏感性比双向扩散技术高10-15倍。 血清蛋白在PH8.6条件下带负电荷，所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷，而且它的分子量又较大（为r球蛋白）。所以游动慢。更重要的是抗体分子受电渗作用影响较大，也就是说点渗作用 ...

二、琼脂扩散试验 琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。 抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散试验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火 ...

可溶性抗原与相应的抗体混合，在电解质存在的条件下，两者比例适合，即可有沉淀物出现，叫沉淀反应（Precipitation）.由于沉淀反应抗原多系胶体溶液。沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。 为了求得抗原与抗体的适宜比例，保证有足够的抗体，而且抗原分子小，具有较大的反应面积，因此操作上通常是稀释抗原，不稀释抗体。 沉淀反应的种类有环状沉淀、絮状沉淀、荚膜膨胀、琼脂扩散及免疫电泳等。此外还有放射性同位 ...

实例一、间接血凝检测多杀性巴氏杆菌荚膜抗原 （一）材料与试剂 1．绵羊红血球 2．标准多杀性巴氏杆菌荚膜菌种A、B、D、E。 3．待测荚膜群的多杀性巴氏杆菌 4．戊二醛（G.R.） 5．pH7.2的PBS液 6．阿氏液（Alserers） 葡萄糖&nb ...

一、原理 同炭凝，只是载体换为聚苯乙烯乳胶，它是一种由0.6μm～0.7μm的颗粒所组成的胶体溶液，具有良好的吸附蛋白质的性能。 间接乳胶凝集目前已用于鼠疫菌、沙门氏菌、流感杆菌、脑膜炎双球菌、葡萄球菌肠毒素等的诊断。 二、材料与试剂 1．聚苯乙烯乳胶 2．免疫血清 3．正常血清 4．标准抗原 5．待检抗原 6．0.02Mol/L pH8.2硼酸缓冲液 硼砂&nbs ...

一、原理 间接炭凝集反应简称炭凝。它是以炭粉微粒作为载体，将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上，形成炭粉抗体复合物，当炭血清与相应的抗原相遇时，二者发生特异性结合，形成肉眼可见的炭微粒凝集块。 目前炭凝反应已用于炭疽、鼠疫和马副伤寒性流产等病的诊断。 二、材料与试剂 1．炭粉 炭粉粒子最好大小在0.12mm～0.15mm，目前市场上出售的炭粉均不合要求，必须过300目/寸的标准 ...

原理： 肠道杆菌中的许多细菌都有部分相同的抗原结构。因之一种细菌可与另一种细菌相应的抗血清发生交叉凝集反应。用一种过量的细菌抗原与发生交叉凝集反应的抗血清相结合。可将其共同抗体吸去，剩下抗体只能与特异性抗原起反应，这种试验即称凝集吸收试验。 利用凝集吸收试验可制备单价因子血清，以进行细菌抗原结构的分析及鉴定菌型。 材料： 1.免疫血清：1：10稀释伤寒杆菌免疫血清。 2.菌液：肠炎杆菌菌液 ...

金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白能与人及多种哺乳动物（猪、兔、羊、鼠等）血清中IgG类抗体的Fc段结合。IgG的Fe段与SpA结合后，两个Fab段暴露在葡萄球体表面，仍保持其抗体活性和特异性当其与特异性抗原相遇时，也出现特异凝集现象。在以凝集反应中，金黄色葡萄球菌菌体成了IgG抗体的载体称为协同凝集反应.本反应也可用于检测微量抗原. 材料： 1.抗原:可溶性伤寒杆菌O抗原 2.免疫血清：伤 ...

若使可溶性抗原与相应抗体先混合，充分作用后再加入有关的免疫微球，因抗体已被可溶性抗原结合，不再出现免疫微球的被动凝集现象，叫间接凝集抑制试验，临床化验检查中常用的免疫妊娠试验就是一种间接凝集抑制试验。 妊娠试验： 孕妇尿中绒毛膜促性腺激素的含量比正常尿高。因此当往尿中加入抗绒毛膜促性腺激素抗体时，由于发生抗原抗体反应的结果，抗体被消耗，此时再往尿中加入胶乳抗原（吸附有人类绒毛膜促性腺激素的聚苯 ...

一、胶乳凝集试验方法 1．胶乳凝集试验：先加受检标本，滴于反应板上，再加致敏胶乳1滴，连续摇动2-3min后观察结果。胶乳凝集者为阳性，不凝集者为阴性。同时需做阴、阳性对照。 2．胶乳凝集抑制试验：在反应板上先加受检标本1滴，再加1滴配对抗血清混匀，最后加1滴致敏胶乳悬液，连续摇动2-3min观察结果。胶乳凝集者为阴性，不凝集者为阳性。同时需做阴、阳性对照。 二、致敏胶乳试剂的制备（物理吸附法） ...

将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的颗粒载体上，然后与相应的抗体结合，也可出现颗粒载体的凝集现象，称为间接凝集反应。间接凝集反应比直接凝集反应敏感性为高，可用于微量抗体或抗原的检查。 一、 间接血球凝集试验 间接血球凝集试验是根据红血球表面的吸附作用而建立起来的。将细菌可溶性抗原提出使之吸附于红血球表面，此时红血球即称为“致敏红血球”。这种致敏的红血球具有细菌的抗原性，与相应 ...

一、原理 可溶性抗原（或抗体）吸附于免疫学反应无关的颗粒（称为载体）表面上，当这些致敏的颗粒与相应的抗体（或抗原）相遇时，就会产生特异性的结合，在电解质参与下，这些颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应(Indirect agglutination reaction)。 载体的存在使反应的敏感性得以大大提高。间接凝集反应的优点为：①敏感性强：间接凝集反应是最敏 ...

颗粒性抗原（细菌、螺旋体、红细胞等）与相应的抗体血清混合后，在电解质参与下，经过一定时间，抗原抗体凝聚成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反应。血清中的抗体称为凝集素（Agglutinin），抗原称为凝集原（Agglutinogen）。 细菌或其他凝集原都带有相同的电荷（阴电荷），在悬液中相互排斥而呈均匀的分散状态。抗原与抗体相遇后，由于抗原和抗体分子表面存在着相互对应的化学基团，因而发生特异性 ...