基础免疫实验

利用酶标记抗原（抗体）和待测抗体（抗原）在电场中向一定方向移动，在比例适当的地方形成沉淀线，通过酶作用底物而显色，指示沉淀线的存在。该法的敏感性大大高于对流免疫电泳。本试验以检测血吸虫抗体为例。

将放射性元素标记的抗体（或抗原）与相应的抗原（或抗体）沉淀时，沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影，就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线，作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影，再经过显影把“像”显示出来。这样，能检出肉眼看不见的沉淀线，从而提高反应的敏感性，这种方法可应用于凝胶中的所有反应。

【实验原理】 免疫电泳又称为γ球蛋白电泳或免疫球蛋白电泳技术，这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM IgG IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中，首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离，然后将特异性的抗体引入到与电泳方向平行的凹槽中，在抗原和抗体的扩散过程中，抗原和抗体适当比例的结合会导致沉淀的产生（如图）。0.85%盐不仅可以终 ...

（一）原理 免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开，然后加入抗体做双相免疫扩散，把已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇，在二者比例适当的地方，形成肉眼可见的沉淀弧。 该方法可以用来研究：①抗原和抗体的相对应性；②测定样品的各成分以及它们的电泳迁移率；③根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其它特性，可以 ...

原理 在pH8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白只带有微弱的负电荷，在电泳时，由于电渗作用的影响，抗体球蛋白不但不能抵抗电渗作用向正极移动，反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质带负电荷，将抗原置于负极，将血清抗体置于正极，电泳后则在两孔之间相遇，并在比例适当的部位形成肉眼可见的沉淀线。 本法由于抗原抗体分子在电场作用下定向运动，限制了自由扩散，增加了相应作用的抗原抗体的浓度，从而提高了敏感性，它较琼脂扩散 ...

1.Crosslink protein DNA complexes in vivo Grow cells in suspension and collect 5 x108 cells by low speed centrifugation.Resuspend cells in 50ml media.In fume hoodadd 1.4ml 37% fomaldehyde solution to ...

1.Wash adherent cells twice in the dish or flask with ice-cold PBS and drain off PBS.Wash non-adherent cells in PBS and centrifuge at 800 to 1000 rpm in a table-top centrifuge for 5 minutes to pellet ...

1.Crosslink protein DNA complexes in vivo Grow 50ml yeast culture to OD600 0.5-1.0.In fume hoodadd 1.4ml 37% fomaldehyde solution to a 50ml conical tube.Fill tube with culture to just below the 50ml l ...

Hancock Laboratory Methods.Department of Microbiology and Immunology University of British ColumbiaBritish ColumbiaCanada http://www.cmdr.ubc.ca/bobh/showmethod.php?methodid=28 MATERIALS: Running buff ...

Purpose and backgrounds About nuclide... 35-S Decay: (b-ray0.167 MeV) Half life: 87.5 days Thick acrylic shield can block most of the emission.Because of the low energyit is impossible to detect spill ...

PIC Cross-linking and Immune Precipitation James FishburnHahn Lab March 2006 References Fishburn et.al.2005Molecular Cellvol.18 #3: Experimental Procedures pg.376 Immobilized Template assay (Hahn lab ...

1)In the cold roomwash cells with cold "Tris" (the same stuff used for TC). Spin down the cells if you are working with suspension cells in a low speed swinging bucket centrifugeresuspend in ...

General Principles of Immunoprecipitation Lysis buffer. The choice of lysis buffer depends on what kind of IP you are doing. RIPA buffer gives the lowest backgroundbut can denature some kinases.It als ...

Lysis buffer. The choice of lysis buffer depends on what the cells were labeled with and whether you want to obtain an active kinase.The lowest background is obtained with RIPA buffer without EDTA.EDT ...

C3是由α和β两条肽链通过二硫键连结组成，为β1球蛋白，沉降系数9.5s，分子量180kD，含糖量约占2.2%，是血清中含量最多的补体成分，约占总补体含量的1/3以上，在补体系统激活过程中，无论是经传统途径还是旁路途径，均需C3活化后，才能推进后续补体成分（C5～C9）的连锁反应，因此，它在两条激活途径中起关键作用。C3主要在肝实质细胞被合成分泌少量由巨噬细胞和单核细胞合成。生理情况下，体液中或组 ...

一、补体测定 1、血清总补体活性测定 当兔抗羊红细胞血清与羊红细胞结合后，遇到补体即可使羊红细胞发生溶血，依据这一特点可建立测定血清中总补体活性的方法。 当血清的效价和绵羊红细胞浓度保持一定的情况下，在规定的反应温度和时间内，溶血程度与补体量呈正相关。因此，通过测定溶血程度，即可测知补体的含量。目前常用的方法是用 50%补体溶血试验（CH30）测定总补体活性，即求出使50％致敏羊红细胞发生溶血时的 ...

1、材料与试剂 （1）pH7.2巴比妥缓冲液 氯化钠 85.00g 巴比妥 5.75g 巴比妥钠 3.75g ...

可溶性抗原，如蛋白质、多糖、类脂质和病毒等，与相应抗体结合后，抗原抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，如再加入红细胞和溶血素，即可根据是否出现溶血反应来判定反应系统中是否存在相应的抗原或抗体。这个反应就是补体结合反应。 补体结合反应是一种古老的血清学技术，Bordet和Gengou在1901年设计这一试验，由于有敏感性高和适应性广的优点，尽管操作繁杂，目前仍被有效地应用。 1、补体及其 ...

将豚鼠血清用水合肼或氨水处理去除其中的C4，这种C4缺乏血清（简称R4）不能使致敏的SRBC溶解，当加入含有C4的受检血清后，级联酶促反应发生即可导致致敏的SRBC溶解。溶血的程度与待测血清中C4的活性相关。 1、无补体C4-抗原抗体复合物（EAR4）的制备 在新鲜豚鼠血清中按每ml加0.15mol/L氨水0.25ml或0.75mol/L水合肼0.25ml，混合后置37℃水浴30～90 ...

将RRBC加入正常人血清中，可使B因子活化，激活补体旁路途径致使BRBC溶解。将正常人新鲜血清加热使B因子丧失活性（简称RB），旁路途径不能激活，当加入RRBC时不发生溶血。此时再加入含有B因子的待测血清，旁路途径即被激活，RRBC发生溶血反应。根据溶血程度可测定待测血清中B因子的活性。 1、兔红细胞（rabbitredbloodcell，RRBC）悬液的制备 无菌采兔耳静脉或心脏血， ...