抗体抗原实验

染色质免疫沉淀芯片(Chip-Chip) NimbleGen是目前能提供定制ChIP―Chip服务的第一家公司。该技术能够快速在目标基因组的染色体中确定特异DNA结合蛋白的准确结合位点，ChIP芯片也可以在一个基因组的任何感兴趣的区域内寻找染色体的结构改变。 1．ChIP―Chip的用途 (1)在基因组范围内确定基因转录因子的DNA结合位点和其他DNA结合蛋白或蛋白复合体的DN ...

ArrayStar转录因子活性ELISA检测法 ArrayStarTM转录因子活性ELISA试剂盒可以快速、灵敏地检测细胞核提取物中转录因子的DNA结合活性。试剂盒采用96微孔板，标记探针是生物素标记的双链寡核甘酸片段，含有转录因子的特异性DNA结合序列。当标记探针与细胞核抽提物一起孵育时，核抽提物中活性形式的转录因子与探针特异性结合，形成转录因子／探针复合物。随后，转录因子／探针复合物与 ...

ChIP―GLAS启动子芯片 基因表达的研究或称mRNA水平分析，是要确定在任何细胞或组织中，一个或多个基因的开启或关闭(基因转录调节)程度，也是对基因在不同条件下和应对各种刺激下如何发挥作用的一种综合分析。DNA微阵列是系统性测定基因表达的关键技术。然而，当今科学家面临的主要困惑是，传统的DNA微阵列技术主要是检测基因转录产物mRNA，这样目前的DNA微阵列只能研究人基因组总DNA的1. ...

脂肪细胞发育分化的转录调控研究 脂肪细胞在分化过程中获得形态学表型(例如脂肪细胞内脂滴的聚集)的同时，在分子水平上也发生了各种基因的表达变化。根据对分化前、分化中和分化后的细胞抽提液的双向电泳分析结果，发现在开始分化的5h内，至少有100种以上的蛋白质表达情况发生了变化，其中就包含了重要的转录激活因子。在分化过程中有利于脂肪细胞分化或脂肪细胞所特有的蛋白质组分会随分化过程增加，抑制脂肪细胞 ...

组蛋白修饰 组蛋白的某些赖氨酸能够发生单、双、三甲基化，精氨酸可发生单或双甲基化，其他修饰方式还有乙酰化、磷酸化、泛素化以及ADP化。它们的联合组成了组蛋白密码，并通过与其他蛋白的作用调控染色质组装和基因的表达。组蛋白修饰方式示意图注：P为磷酸化；A为乙酰化；M为甲基化 1．甲基化 组蛋白甲基化是由组蛋白甲基化转移酶(histonemethyl transferase，HMT ...

表现遗传学中DNA的修饰――DNA甲基化 DNA甲基化是哺乳动物DNA最常见的复制后调节方式之一，是正常发育、分化所必需的，具有重要的生物学意义。 在DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferase，DNMT)的作用下，以S―腺苷甲硫氨酸(SAM)为甲基供体，可以将甲基基团转移到基因组DNA胞嘧啶第5位碳原子(C5)上。在哺乳动物中，C5的甲基化主要发生在CpG二核苷酸上 ...

组蛋白修饰和DNA甲基化之间的关系 在引起基因沉默的过程中，沉默信号(DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重新装配)是如何进行的?谁先谁后?这是一个“鸡和蛋”的问题，目前仍处于研究阶段，还没有定论。研究发现DNA甲基化和组蛋白乙酰化是一个相互促进、加强的过程，如许多HDAC可以和DNMTl、3a、3b相互作用；而甲基化CpG结合蛋白―2(methylcytosinebindingprotein ...

具有HAT活性的转录共激活因子 位于组蛋白附近具有HAT活性的激活因子可降低染色体结构的稳定性。酵母和四膜虫HAT的实验证明，组蛋白乙酰化在转录激活过程中起作用。酵母HATs(SAGA、NuA4、NuA3、Ada)和四膜虫NuA4可促进体外核小体转录。HAT的刺激转录作用只有在乙酰辅酶A存在时才可观察到。HAT通过几种机制刺激基因转录，由结合启动子的激活因子募集的HAT可导致局部组蛋白的乙 ...

P16 p16于1976年初被发现，定位于9p21，全长8．5kb，有3个外显子和两个内含子，其基因产物为P16蛋白，相对分子质量为15 840，为148个氨基酸组成的单链多肽蛋白。p16是人类肿瘤中最常见的抑癌基因，是细胞周期蛋白激酶抑制剂。它通过结合并抑制细胞周期依赖的蛋白激酶CDK4和CDK6，导致Rb的磷酸化抑制来调控细胞通过G1期。在人乳腺上皮细胞(HMEC)中，p16基因CpG ...

RB蛋白相互作用相关因子(RIZl) RIZI是抑癌基因的一种，也是组蛋白甲基转移酶超家族成员。人类多种恶性肿瘤常有RIZI失活，其失活方式有mRNA表达缺失、移码突变、染色体缺失和错意突变。此外，RIZImRNA表达缺失亦与其启动子CpG岛甲基化有关。在44％的乳腺癌标本中发现，RIZImRNA的表达缺失或下降与RIZI启动子CpG岛甲基化有很大关系。在癌细胞中，甲基化酶抑制剂5―氮杂― ...

乳腺生长抑制因子(mammaryderivedgrowthinhibitor，MDGl) MDGI是一种脂肪酸结合蛋白，它特异地抑制乳腺上皮细胞的增殖，并使其向乳腺小泡的方向分化而促使乳汁分泌。尽管在乳腺肿瘤组织中并没有检测到MDGI的表达，但同源缺失及点突变却不是MDGI失活的重要机制。DNAEP迹法分析乳腺原发肿瘤表明，近一半样品的MDGI表达缺失与其基因的甲基化程度增加有关。 ...

DNA甲基化在肿瘤发生中的作用 越来越多的研究表明，在肿瘤形成过程中包含两大类机制。一个是通过DNA核苷酸序列改变而形成突变，即遗传学机制。肿瘤作为一种遗传学疾病在分子生物学领域已经得到证实。另外一个就是表观遗传学(epigenetics)机制，即不依赖DNA序列改变导致基因表达水平的变化，它在肿瘤形成过程中的作用越来越受到重视。遗传学与表观遗传学两种机制相互交叉存在，共同促进了肿瘤的形成 ...

14―3―3σ 14―3―3σ定位于lp35。14―3―3σ基因的功能主要是使DNA损伤后细胞周期停止于G2期。正常情况下，DNA损伤诱导14―3―3σ基因表达，并使细胞停止于G2期。但在原发性膀胱癌、结肠癌、乳腺癌中14―3―3σ基因的表达下调。对这种表达下调的分子机制研究表明，其原因主要是14―3―3σ基因第一外显子区的高甲基化，而不是杂和型缺失、基因突变等。用亚硫酸钠处理基因组测序， ...

微小RNA与表现遗传 微小RNA(microRNA，miRNA)是生物体内一类非编码的RNA分子，其长度大约为22个碱基，调控基因的表达。1993年，Ambros在线虫中发现第一个miRNA分子lin―4以后，一直没有任何进展，直到2000年，Ruvkun发现子第二个miRNA分子1et―7，才引起了轰动。现在，miRNA已经成为国际学术界炙手可热的研究对象。研究发现，miRNA与发育、造 ...

孕激素受体(PR) PR基因定位于染色体1lql3，其基因第一个外显子区有一CpG岛。PR基因编码两个异构体：hPRA和hPRB，它们的N端序列与生物活性不同。与配体结合的雌激素受体是hPRB转录必需因子，hPRB表达说明功能性ER存在。用DNA印迹法分析表明，约40％的PR阴性乳腺癌组织和PR阳性的肿瘤细胞系都发现PR基因甲基化。在雌激素存在的条件下，用5―氮杂―2―脱氧胞苷处理PR阴； ...

雌激素受体a(ERa) 甾体类激素特别是雌激素，长期以来都被认为与乳腺肿瘤发生有关。雌激素及其儿茶酚类代谢产物在乳腺癌启动和演进过程中的作用，是人们长期的研究热点。17p雌二醇可通过有功能的ER刺激乳腺癌生长，这是乳腺癌内分泌治疗的理论依据。乳腺癌细胞表面的雌激素受体是激素疗法起作用的重要标志。近1／3的乳腺癌在确诊时为ER阴性，还有一部分乳腺癌在演进过程中逐渐变为ER阴性。迄今为止，未发 ...

DNA甲基化与组蛋白乙酰化的协同在肿啼发生中的作用 DNA甲基化与组蛋白去乙酰化在肿瘤抑制基因的沉默方面具有协同效应。DNA甲基化引起基因转录抑制的可能机制主要有：①DNA甲基化直接干扰特异性转录因子与各基因启动子中识别位置的结合。②甲基化胞嘧啶结合蛋白(MeCPl、MeCP2和MBD)与启动子区甲基化CpG岛结合，然后募集蛋白形成转录抑制复合物，从而阻止转录因子与启动子区靶序列的结合，影 ...

与基因稳定性有关的基因 与基因稳定性有关的基因主要是乳腺癌易感基因―1(BRCA―1)，它位于17q21，是熟知的乳腺癌易感基因。用反义核酸技术抑制BRCAl的表达，可增加正常及恶性乳腺细胞的增殖，而野生型BRCAl的过度表达可抑制MCF―7等乳腺癌细胞在小鼠体内的成瘤能力。在近一半的遗传性乳腺肿瘤中发现BRCAl的遗传性突变。与其他抑癌基因不同的是，尽管在乳腺癌及卵巢癌中BRCAl基因发 ...

寡核苷酸微阵列法 该方法以已知CpG岛的序列分别设计能够与甲基化和非甲基化CpG岛片段杂交的寡核苷酸探针微阵列，用于同时分析众多已知CpG位点的甲基化状态。样品基本处理步骤如下：DNA经MssI(酶切位点是GTTT)消化后用亚硫酸氢钠处理，再在酶切位点的粘性末端加上接头，用通用引物进行PCR扩增、荧光素标记、微阵列杂交及扫描。该方法的优点是能直接得到目标CpG岛的甲基化信息。缺点是有这种合 ...

与肿瘤侵袭转移有关的基因 侵袭性是恶性肿瘤的重要特征。肿瘤的侵袭、转移包括细胞黏附能力下降、穿破基底膜进入血液循环、逃避免疫监视及在远隔部位生长。目前，已发现3种参与乳腺癌侵袭转移的基因发生异常甲基化。 1．钙粘连蛋白(cadherin)钙粘连蛋白在抑制肿瘤侵袭、转移中起重要作用。E―钙粘连蛋白定位于16q22，编码细胞表面的黏附分子。E―钙粘连蛋白的表达下降在分化差、分级高的肿瘤 ...