抗体抗原实验

多基因疾病易感基因研究的流程 孟德尔遗传病的遗传学研究发现，先前认为单一的疾病其实并不简单，实际上所有疾病都是复杂的。例如，囊性纤维化等位基因(CFTR)纯合的患者在疾病的严重性方面表现出很大的不均一性，尤其是囊肿性纤维化肺病患者的病程进展很难从基因型上进行预测，这是因为CFTR突变，使得患者肺部对细菌感染的敏感性提高了。由于其他基因和环境因素严重影响CFTR基因突变的表现，不难理解为何难以 ...

连锁分析和关联研究的原理 连锁分析和关联研究的原理和假说基本上是相似，两者均以相邻近的DNA变异共分离为基础。连锁分析是通过鉴定经多代传递仍完整的单倍型为基础的，检测在一个家系中等位基因与疾病的传递是否相关。而关联研究则是通过鉴定经许多代数传递后仍保留完好的相邻近DNA变异之间的DNA片段，检测在一个群体中疾病和等位基因的相关性的存在与否。因此，关联研究也可认为是在未观察到的、可能存在的家 ...

定位克隆的核心是连锁分析技术 连锁是一种遗传现象，是指当同一条染色体上的某些位点由于相距很近，在减数分裂过程中这些位点发生交换的概率较小，所以就有较多的机会连锁在一起，从亲代传递到子代。位点间的距离越近，在减数分裂过程中发生交换的可能性越小，位点间重组的概率就越小；相反，两位点越远，则越容易产生重组体。这是利用连锁分析将致病相关基因从染色体中搜寻出来的定位克隆基础，为疾病基因定位提供了有力 ...

遗传统计分析 以等位基因方式表述与疾病易感性相关的多态，很少由单个SNP导致，大多是基因内几个SNP的组合即单倍型所引起。如ALOX5AP的单个SNP与心肌梗死均无相关性，但这些SNP组合形成的其中一个单倍型与冰岛人心肌梗死的高危存在相关，另一单倍型与英国人心肌梗死相关。多巴胺D3受体基因3个SNP单独与精神分裂症并不存在显著的相关性，但它们所形成的单倍型却与精神分裂症显著性相关，提示这些 ...

疾病相关的各种突变类型的频率 对于显性孟德尔遗传病，致病突变只出现于家系患者中，若是隐性遗传，则表现为纯合突变。在目前已鉴定的致病相关基因中，突变类型22．1％为缺失，57．4％为错义／无义突变。对于插入／缺失、无义突变和剪接保守序列中的突变，一旦发现有这些突变的基因，基本上可以确定为致病基因，其相应的功能研究亦相对简单些。而对于调控区中的突变，其对基因的功能影响往往难以预测，即便是有遗传 ...

群体选择和群体分层 特定SNP在各地区和各种族中并非一定都存在，其所占的比例也不尽相同，这使得在不同的研究小组所获得与疾病相关的同一SNP或单倍型的结果往往不具有重复性。不仅不同国家之间存在差异，即使是同一国家的不同民族也存在很大差异。如我国南北方汉族，虽然是同一民族，但两者之间差异也很大。因此没有一个群体是典型、特异或完全隔离的，利用遗传分析技术搜寻多基因疾病易感基因，必须注意群体的选择 ...

候选基因关联研究与定位候选克隆 候选基因关联研究主要是综合流行病学、病因学、组织表达特异性、功能分析及与已知功能基因的同源比较，搜寻可能与其发病有关的候选基因，进而确认基因内或邻近的引起这些基因功能或表达改变的突变，或与引起功能改变的突变形成连锁不平衡的多态进行关联研究。若是在定位区域内选择候选基因，即是位置候选克隆。可以说，候选基因关联研究是研究多基因疾病与遗传因素之间存在的可能致病通路 ...

全基因组扫描 遗传分析仍是当前对致病相关基因识别、鉴定的主要方法，分为连锁分析和关联研究两种。由于人类基因组多态性的研究以及SNP分型技术的发展，目前全基因组连锁分析和关联研究亦变得切实可行。根据研究规模的大小，可以将疾病遗传分析分为以下几类，即定位克隆、连锁不平衡基因定位、全基因组候选基因分析、候选基因关联研究和定位候选基因克隆，其中定位克隆、连锁不平衡基因定位和全基因组候选基因分析均属 ...

模拟人类疾病遗传模式动物的建立 通过建立模拟人类疾病遗传的模式动物，并以此动物模型为对象，定位、分离疾病相关基因，已作为一个行之有效的研究策略被广泛接受。尽管模式动物的性状及其遗传因素与人类相应疾病的一致性程度仍不确定，但模式动物为多基因疾病的遗传学研究提供了极为有利的条件：①繁殖时间短；②环境因素易于控制；③可构建最适合于基因定位分离的群体遗传结构；④可获得大容量的家系或家系群；⑤可活体 ...

遗传分析在疾病相关基因搜寻和克隆中的应用 利用遗传分析定位克隆致病相关基因的成功例子很多，典型的是家族性心房颤动的克隆。心房颤动(atrialfibrillation)简称“房颤”，是一种十分常见的心律失常，心房发生350～600次／分不规则的冲动，引起不协调的心房乱颤，心室仅接受部分通过房室交界区下传的冲动，故心室率为120～180次／分，节律不规则。据统计，60岁以上人群中，房颤发生率 ...

荧光原位杂交(FISH) 许多疾病相关基因的突变涉及染色体的畸变，如脆性X病、杜氏肌营养不良以及绝大多数的恶性肿瘤。这些畸变可以用细胞遗传学的方法检测出来。肿瘤细胞一般多有非随机的染色体片段丢失或扩增，而更多的疾病则只是发生一些细胞遗传学上不可见的变异，如点突变、微小插入或缺失等。在许多情况下，这种变异会导致病理性表型的出现。这种情况一般是染色体的畸变破坏了畸变染色体片段内或及其邻近基因的 ...

比较基因组杂交(CGH) 比较基因组杂交主要应用于肿瘤染色体变异等研究。这里主要介绍采用基因芯片的CGH，其原理是：先分别将肿瘤与正常细胞的基因组DNA打碎，再利用双色荧光杂交的策略，对肿瘤细胞基因组DNA片段进行红色荧光(Cy5荧光素)标记，而对照的正常基因组DNA片段用绿色荧光(Cy3荧光素)标记，再将这些标记后的片段作为探针，与高密度的涵盖整个人类基因组的DNA芯片杂交。通过这两组探 ...

直接基因分析 鉴定疾病相关稀有等位基因的方法需要对患病个体进行突变扫描或直接DNA测序，这种方法叫做直接基因分析。该方法可能在患病者中发现只有l％甚至更稀有的等位基因。直接基因分析事实上亦是候选基因法，与常规候选基因法不同的是直接在患者样本中对候选基因进行测序。例如，对肥胖人群的瘦素／肥胖基因直接测序发现了一些新的突变，这些突变在患病的人群中是很稀少的，而在一般人群中更少见，通过连锁分析的 ...

杂合性缺失 染色体缺失见于一些遗传病和肿瘤疾病。对于有明显染色体缺失的疾病如迪格奥尔格综合征DiGeorge syndrome)、猫叫综合征等，可以在细胞遗传学上检测到明显的染色体缺失。通过对该区域的高分辨率DNA多态性标记在大量样本上进行分析，往往可以找到患者共同缺失的最窄的片段，进一步分析时就可以直接从这一区域人手。长期的细胞遗传学研究证实，几乎所有的肿瘤细胞都存在染色体片段的非随机性 ...

真核基因表达以正性调控为主 真核RNA聚合酶对启动子的亲和力很低，基本上不依靠自身来起始转录，需要依赖多种激活蛋白的协同作用。真核基因调控中虽然也发现有负性调控元件，但其存在并不普遍。真核基因转录表达的调控蛋白也有起阻遏和激活作用或兼有两种作用，但总的是以激活蛋白的作用为主。即多数真核基因在没有调控蛋白作用时是不转录的，需要表达时就要有激活的蛋白质来促进转录。换言之，真核基因表达以正性调控 ...

真核基因的转录与染色质的结构变化相关 真核基因组DNA绝大部分都在细胞核内与组蛋白等结合成染色质，染色质的结构、染色质中DNA和组蛋白的结构状态都影响转录。 1．染色质结构影响基因转录 细胞分裂时染色体的大部分到间期时松开分散在核内，称为常染色质(euchromatin)，松散的染色质中的基因可以转录。染色体中的某些区段到分裂期后不像其他部分解旋松开，仍保持紧凑折叠的结构，在 ...

基因表达的多级调控 1．基因结构的活化 DNA暴露碱基后RNA聚合酶才能有效结合。活化状态的基因表现为：①对核酸酶敏感；②结合有非组蛋白及修饰的组蛋白；③低甲基化。 2．转录起始 转录起始是最有效的调节环节，通过DNA元件与调控蛋白相互作用来调控基因表达。 3．转录后加工及转运 转录后加工及转运包括RNA编辑、剪接和转运。 4．翻译及翻译后加工 ...

基因表达的概念及特点 真核基因组比原核基因组复杂得多，至今人类对真核基因组的认识还很有限。要搞清楚人的全部基因的功能及其相互关系，特别是要明了基因表达调控的全部规律，还需要经历很长期艰巨的研究过程。 (一)基因表达的概念 基因表达就是基因转录及翻译的过程。在一定调节机制控制下，大多数基因经历基因激活、转录及翻译等过程，产生具有特异生物学功能的蛋白质分子。但并非所有基因表达过程 ...

真核细胞的转录调控 人类的生老病死、喜怒哀乐，甚至生态环境和生物进化等都与基因密切相关。所以，著名的诺贝尔生理学与医学奖获得者杜伯克曾说：“人类的DNA序列是人类的真谛，这个世界上发生的一切事情都与这一序列息息相关，包括癌症在内的人类疾病的发生都与基因直接或间接有关……”。基因的表达与调控是当今生命科学研究中最重要的前沿领域之一，它对于深入探讨重要生命现象的内在本质、阐述细胞行为和疾病发生 ...

真核基因转录调控 真核细胞的3种RNA聚合酶(1、Ⅱ和Ⅲ)中，只有RNA聚合酶Ⅱ能转录生成mRNA，以下主要讨论RNA聚合酶Ⅱ的转录调控。(一)顺式作用元件 顺式作用元件是指可影响自身基因表达活性的DNA序列，为特异转录因子的结合位点，J顷式作用元件通常是非编码序列。顺式作用元件并非都位于转录起点上游(5’端)。根据顺式作用元件在基因中的位置、转录激活作用的性质及发挥作用的方式，可 ...