抗体抗原实验

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 廖爱华　VERA Rebmann ①　HANS Grosse2Wilde ①　(华中科技大学同济医学院生殖医学中心武汉430030) 　目的:建立一种新的检测人类HLA2 Ⅰ类抗体方法———酶联免疫斑点法( ELISpot) 。方法:以鼠B 细胞系HB95 为模型建立一系列特异性ELISpot 检 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT 时候在培养皿底部有条纹和不规则的斑点出现。这是什么原因导致的? 在分析过程中，T细胞的移动活跃。特别的，在活体或者培养皿中，预先激活的T 细胞的迁移很快，常常留下细胞因子的痕迹。同时，如果板被震动(例如孵箱门的开关的撞击)或者在捕获中被移动了，则细胞会卷起，留下条纹或者不规则形状的 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT 技术操作中应注意的问题: (1) 关于固相支持物(微量板) 的选择 目前有 96 孔聚乙烯板和硝酸纤维素膜微量板(NC) 两种 均为通过非共价键吸附抗原或抗体。在实验中 用NC做支持物时 背景颜色较深 不利于 对比 但用聚乙烯做支持物时 偶有斑点大小不 均或融合现象 这时使用琼脂糖固 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 目前有什么类型的ELISPOT板?对使用各种类型的板有什么建议? ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech， Millipore， Nunc， BD， Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明(白色)，PVDF膜等多种类型的板。 国外主要生产商所生产的各类型elispot ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 1、目前有什么类型的ELISPOT板? ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech， Millipore， Nunc， BD， Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明(白色)，PVDF膜等多种类型的板。 2、达科为公司对使用各种类型的板有什么建议? 国外主要生产商所生产的 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT的历史可以追溯到1963年Jerne等人创立的溶血空斑技术(hemo-lytic plaque forming cell assay ，HPF)，这项技术可用于检测并计数单个抗体形成细胞。随着单克隆抗体技术的成熟，1983年，Czerkinsky等采用此法检测脾细胞中分泌特异性抗体的细 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 透明板在操作的时候比PVDF板稍微容易点，PVDF板在使用时要进行预处理板，操作时还要小心不要把那层膜捅破了。 透明板就是显示的斑点都是黑色的，不能进行几种因子的同时测定，而PVDF板就可以用斑点颜色的变化一次来测定几种细胞因子。 总结：都有优缺点，个人认为，测一种细胞因子的话还是透明板比较好。 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 1、什么是ELISPOT检测? 酶联免疫斑点( enzyme-linked immunosorbent spot， ELISPOT) 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。 淋巴细胞在体内被抗原激活后，或者在体外培养中被培养液中含有的特异性抗原或刺 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 在免疫学领域中，对于疾病以及疫苗研究不仅仅局限于体液免疫应答(B细胞免疫)，细胞介导的免疫应答(cell mediated immune response，CMI)也是人们所关注的，而T细胞在CMI中起关键作用。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法(ELISA)检测体液中游离的细胞因子(CK ...

相关专题 ELISA免疫实验技术免疫试剂实验方法小结 ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础，ELISA试剂以及各种溶液如何配置?最近刚做了下ELISA实验，把各种ELISA配置方法汇总如下：(1)　ELISA实验包被缓冲液(2)　ELISA实验洗涤缓冲液(2)　ELISA实验洗涤缓冲液(3)　ELISA实验稀释液;(4)ELISA实 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 1、提取外周血淋巴细胞时，有那些注意事项? 如果取外周血淋巴细胞(PBMC) 进行ELISPOT检测，最好采用新鲜血液。在保证无菌操作的前提下，首先应保证取血时抗凝剂应及时充分的与血液混匀，避免血凝块的出现。抗凝血最好及时提取PBMC，避免放置时间过长，室温下避免过夜。应选用分离效果好的淋巴细胞分离 ...

相关专题 第一抗体的染色： 1、 将切片浸在3%H2O2甲醇溶液(新鲜配制)中10分钟，PBS冲洗2分钟×3次 2、 加100ul(2滴)血清封闭溶液(试剂1)到切片上，室温孵育10分钟，倒掉(不能冲洗) 3、 加入一抗(按照说明推荐浓度和孵育条件) 4、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)，冲洗2分钟×3次 5、 加入100 ...

相关专题 一、基本原理 免胶体金检测技术是用金属离子和金属蛋白复合物应用免疫组化原理检测组织内抗原抗体的技术，常用胶体金(铁、汞等)重金属离子。由于胶体金容易制成各种大小的颗粒且有很高的电子密度及分辨率，又不影响抗体的活性，因此既可用于免疫组化又适于免疫电镜技术。 二、操作步骤 1、脱蜡至0.05mol/L TBS PH7.4缓冲液。 2、 ...

相关专题 1、洗载玻片 将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中，目的是为了是载玻片上的硅胶等除去，同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整，便于组织吸附，然后置于清水中清洗，除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右)，再将载玻片浸泡于酒精之中， 然后放到架子上，置于37 oC温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys ...

相关专题 1、 一抗从4度拿出后，为什么要进行37度复温? (1)一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片; (2)另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要，但对表达较弱的抗原可能有用，4度和37度时分子运动方式不同，前者分子碰撞机率和运动速度小于后者，后者结合更快，但敏感性也提高了并易造成非特异染色。 (3)其实，我更赞同后一种说法， ...

相关专题 制备好免疫胶体金后，还需要将其稀释到一定浓度，并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说，特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如 ...

相关专题 良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色 ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验抗原实验技术及研究进展 福尔马林固定时，组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成了醛键，使得不少抗原决定簇被封闭。同时，由于甲醛的聚合作用，使蛋白质分子间相互交联形成大分子网络，也导致了抗原决定簇被掩盖，这就使得相当部分的抗原不能与抗体很好是进行反应。因此，抗原修复也是影响免疫组化染色结果的基本因素。抗原 ...

相关专题 ELISA免疫实验技术 免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。常用的标记物包括荧光素、酶和放射性核素等，用这3种标记物进行标记的免疫检测技术被称为3大免疫标记技术。目前，使用的免疫标记物还有化学发光物质、铁蛋白和胶体金等。 ...