抗体抗原实验

病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力，谓之中和试验。本试验主要用于：①从待检血清中检出抗体，或从病料中检出病毒，从而诊断病毒性传染病；②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型；③测定抗病毒血清或抗毒素效价；④新分离病毒的鉴定和分型，中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行，亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑 ...

（一）材料与试剂配制1．动物血清2．硫酸铵饱和溶液硫酸铵 800g~850gH2O 1 000ml加热至绝大部分溶质溶解为止，趁热过滤，置室温过夜，然后以28％NH4OH调pH至7.0（不调pH值也可以）。注：硫酸铵以质量优者为佳，因次品中含有少量重金属对蛋白质巯基有影响。如次品必须除去重金属，可在溶液中通入H2S，静置过夜后滤过，加热蒸发H2S即 ...

胶体金具有很高的动力学稳定性，在稳定因素不受破坏时自身凝聚极慢，可放置数年不发生凝聚。影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温度、非电解质等。金溶胶必须有少量电解质作稳定剂，但浓度不宜过高。高浓度亲水性非电解质能剥去胶粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物质促使溶胶凝聚，但一定量的高分子物质反而可增加溶胶稳定性，如蛋白质、葡萄糖、PEG20000等的加入有良好的稳定效果。当金溶胶吸附蛋白质后，溶胶 ...

病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力，谓之中和试验。本试验主要用于：①从待检血清中检出抗体，或从病料中检出病毒，从而诊断病毒性传染病；②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型；③测定抗病毒血清或抗毒素效价；④新分离病毒的鉴定和分型，中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行，亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑 ...

因为胶体金具有肉眼可观察的红色，所以为不需要任何仪器的试纸膜或试剂盒法的免疫检测提供了可能，利用免疫金试纸膜法检测的模式可以很灵活，根据具体情况可以采用不同的方式：既可以标记抗体，又可以标记抗原；既可以采用标记抗原与待测抗原的竞争方式进行检测，又可以利用标记抗体或标记二抗的夹心法方式进行检测。美国PAN PROBE、INC、生物技术公司生产的产品名称为“快速一步法胶体金尿测试条”的胶体金试纸，有以 ...

氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－），外层离子层H 则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。胶体金颗粒的基础金核并非是理想的圆球核，较小的胶体金颗粒基本是圆球形的，较大的胶体金 ...

胶体金溶液是指分散相粒子直径在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系，颜色呈桔红色到紫红色．胶体金作为标记物用于免疫组织化学始于1971年Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察沙门氏菌此后他们把胶体金与多种蛋白质结合.1974年Romano等将胶体金标记在第二抗体（马抗人IgG）上，建立了间接免疫胶体金染色法。1978年geoghega发现了胶体金标记物在光镜水平的应用。胶体 ...

病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力，谓之中和试验。本试验主要用于：①从待检血清中检出抗体，或从病料中检出病毒，从而诊断病毒性传染病；②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型；③测定抗病毒血清或抗毒素效价；④新分离病毒的鉴定和分型，中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行，亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑 ...

胶体金在电镜水平的应用胶体金应用电镜水平的研究最早，发展最快，应用最广泛。其最大优点是可以通过应用不同大小的颗粒或结合酶标进行双重或多重标记。直径为3～15nm 胶体金均可用作电镜水平的标记物。3～15nm 的胶体金多用于单一抗原颗粒的检测，而直径15nm 多用于检测量较多的感染细胞。胶体金用于电镜水平的研究，主要包括：细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。单层培养中细胞内抗原的检测。组织抗原的 ...

胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金却也并非易事。因此对每次制好的胶体金应加以检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程度及有无凝集颗粒等。肉眼观察是最基本也是最简单和方便的检定方法，但需要一定的经验。良好的胶体金应该是清亮透明的，若制备的胶体金混浊或液体表面有漂浮物，提示此次制备的胶体金有较多的凝集颗粒。在日光下仔细观察比较胶体金的颜色，可以粗略估计制得的金颗粒的大小。当然也可用分光光度计 ...

做凝胶的问题：现在许多国产的新式电泳器材都是不错的，许多新型的电泳器材不再需要琼脂封闭。可是在某些材料上不过关，导致电泳器材用久了之后，还是会漏胶，所以实验室里需要备有琼脂，并要知道一些琼脂的特性： 它在水中需加热至95℃时才开始熔化，熔化后的溶液温度需降到40℃时才开始凝固。琼脂除了温度以外，还要注意浓度的问题：个人以为1%浓度的琼脂用来封口是比较好的。琼脂浓度过高过低都会影响防漏效果。 ...

上样缓冲液的问题： 上样缓冲液配多少浓度双较合适，这个问题是很重要的。因为这里涉及到上样量的问题。如果上样孔只能上样30ul。而样本中蛋白较少，要上样25ul才有可能做出蛋白条带。这个时候就要用到高倍上样缓冲液。以下是6倍缓冲液的配方： undefinedSDS凝胶上样缓冲液： 300mM/L tris-HCl(pH6.8)600mM/L DTT12%SDS0.6%溴酚蓝60% 甘油 此外，提高上样量还有一个办 ...

　　在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素（红细胞相应抗体）为指示系统的抗原抗体反应。此反应包括两个系统，5种成分。一是被检系统，即已知的抗体（或抗原）和被检的抗原（或抗体）；另一个是指示系统，包括绵羊红细胞和溶血素，以及补体成分。补体用豚鼠新鲜血清。实验方法是先将被检系统的抗原、抗体及补体放入试管中，作用一定时间后，再加入指示系统，继续作用一定时间后，观察结果。 ...

胶体金颗粒呈桔红色到紫红色，有利于肉眼观察，将其应用于光学显微镜下检查细胞表面抗原．具有操作步骤少，染色深浅易控制，制片稳定，呈色鲜明，结果保存时间长，试剂无毒害以及能够用于暗视野显微镜等优点．但是直接应用肢体金标记应用于光镜研究受到了灵敏度的限制，因而很少被使用．为了提高灵敏度可以用银离子增强的方法，称为免疫金银染色法(IGSS)．IGSS方法的核心就是在免疫金标记基础上增加了一个染色标记物放大 ...

免疫金电镜技术现已在免疫化学和组织化学研究中得到了广泛应用、其所以能成为电镜下较为理想的免疫标记物主要有如下优势：（1）胶体金颗粒在电镜下具有很高的电子密度，大小颗粒清晰可辨，且不影响对原有超微结构的观察．(2)通过计量被检部分金颗粒，可以对被检抗原或抗体进行免疫定量研究.(3)采用不同直径的金标抗体进行免疫双重或多重标记染色，能在一张电镜图片上同时显示两种或多种被检测物质的组织或细胞的超微结构． ...

用流式细胞计分选特定的染色体，基本过程与细胞分选相似。不同的是，要用带有荧光标记的DNA探针同特异染色体结合，使待分选的染色体带上标记。在染色体分选中，使用的探针是同所感兴趣染色体互补的寡聚核苷酸，这种探针也可同荧光染料偶联。将结合有荧光染料的探针同染色体一起温育，使探针同特异染色体杂交，形成稳定的杂交体，这样染色体就被带上了荧光标记，稀释后送入流式细胞计的流室，然后与细胞分选过程一样将特异的染色 ...

将抗体进行特殊标记后用电子显微镜观察免疫反应的结果。根据标记方法的不同， 分为免疫铁蛋白技术、免疫酶标技术和免疫胶体金技术。如免疫铁蛋白技术是将含铁蛋白通过一种低分子量的双功能试剂与抗体结合，成为一种双分子复合物，它既保留抗体的免疫活性，又具有电镜下可见的高电子密度铁离子核心，因此用铁蛋白标记的抗体可通过电镜免疫化学的方法在电镜下定位细胞中的抗原。由于某些固定技术(如锇酸固定)对抗体抗原的结合有干 ...

将显微镜技术与分光光度计结合起来的技术。它以物质分子的光吸收、荧光发射和光反射特性作为测定基础， 可用来分析生物样品细微结构中的化学成分，同时进行定位、定性和定量。

利用显微分光光度计对细胞内原有能发光的物质或对细胞内各种化学成分用不同的荧光经荧光探针标记后进行定位、定性和定量地测定，称为显微荧光光度术， 也称细胞荧光光度术(cytofluorometry)。它是一种微观而灵敏的方法，对于研究细胞的结构、功能及其变化具有重要意义。

匀浆缓冲液的问题: 蛋白质的匀浆缓冲液的一般配方都是大同小异，里面有那么多试剂，我对其中一些试剂的功能做了查寻： PMSF：蛋白酶抑制剂EDTA：金属离子螯合剂DTT：保证蛋白SH基团不被氧化矾酸钠：酪氨酸磷酸酶抑制剂 所以匀浆缓冲液的蛋白酶抑制剂保护剂对于保护蛋白质量是非常重要的。 蛋白匀浆以后是否还会降解？一般认为蛋白质匀浆以后，由于蛋白质变性，所以不会容易降解。而且不会受反复冻融的影响。但 ...