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        免疫中和反应技术(Neutralization test technique):空斑减少法

        互联网

        6747

        病毒或毒素与相应的抗体结合后,失去对易感动物的致病力,谓之中和试验。本试验主要用于: 从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病; 用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型; 测定抗病毒血清或抗毒素效价; 新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。

        在细胞培养上进行病毒中和试验,近年来多采用空斑减少法。先将病毒稀释成适当浓度,使每 0.2ml 80 个~ 100 PFU (空斑形成单位),与不同稀释度的待检血清等量混合,置 37 作用 1h 2h ,分别测定 PFU ,使空斑减少 50 %血清稀释度即为该血清的中和价。

        表 空斑减少法中和试验示例

         

        血清稀

        释倍数 [1]

         

         

         

         

         

        1:16

        (4-2 )

        1:64

        (4-3 )

        1:256

        (4-4 )

        1:1024

        (4-5 )

        1:409

        (4-6 )

        不加

        血清

        对照

        中和抗

        体价 [2]

         

         

        待检血清 A

        空斑数

        3

        13

        38

        51

        53

        55

        4-3.6 =1:140

        空斑减少率

        95

        76

        31

        7

        0

        待检血清 B

        空斑数

        8

        25

        51

        56

        55

        4-4.1 =1:290

        空斑减率数

        85

        54

        7

        0

        待检血清 C

        空斑数

        6

        22

        44

        55

        4-5.2 =1:1300

        空斑减少率

        89

        59

        19

        注: [1] 血清用 4 倍递增稀释;

         

        [2] 空斑减少 50 %的血清稀释度,其计算法同 LD50 的计算。

         

         

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