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经典遗传学实验

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什么是保护碱基、添加保护碱基的目的与原则是什么?

相关专题 限制性核酸内切酶产品选择专题 首先要明确什么是保护碱基 限制性内切酶识别特定的DNA序列,除此之外,酶蛋白还要占据识别位点两边的若干个碱基,这些碱基对内切酶稳定的结合到DNA双链并发挥切割DNA作用是有很大影响的,被称为保护碱基。 添加保护碱基的目的 在分子克隆实验中,有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点,用于后续 ...

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DNA的限制性内切酶酶切反应技术

相关专题 限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)是指识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。本实验是掌握DNA的限制性内切酶的酶切技术。 DNA的限制性内切酶酶切反应技术 1.限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA 序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA。 它可分为三类: ...

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PCR基因扩增技术

相关专题 基因扩增技术(PCR)聚合酶链反应(polymerase chain reaction简称PCR)又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,典型的RCP反应体系由如下组分组成:DNA模板、反应缓冲、dNTP、MgCl2、两个合成的DNA引物、耐热Taq聚合酶。 PCR仪 多聚酶链式反应(polymerase ...

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质粒DNA的提取与鉴定

相关专题 本实验采取碱裂解法的方法来提取质粒,之后经琼脂糖凝胶电泳来检测DNA。 质粒DNA的提取与鉴定 (一)碱裂解法提取质粒 碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内线性的DNA双螺旋结构解开而被变性尽管在这样的条件下共价闭环质粒DNA的 ...

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我国克隆研究现状:停滞不前该如何寻求发展?

相关专题 今年6月22日,对我国体细胞克隆技术发展产生重大影响的世界首批成年体细胞克隆山羊“阳阳”(深色),在西北农林科技大学种羊场度过了13岁生日。 2000年,克隆山羊“阳阳”诞生。当时,克隆技术在中国受到热捧,相关研究如火如荼。而如今,克隆技术正在中国陷入沉寂。 在不久前上映的美国大片《遗落战境》中,由汤姆·克鲁斯饰演的克隆人在发现 ...

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PCR-酶联免疫法检测端粒酶活性攻略

相关专题 1994年,Kim发明的TRAP由于具有灵敏度高等优点曾被广泛应用于端粒酶的活性检测中,不过安全性不够,现在的端粒酶活性检测实验都在其基础上进行了改良,更显高效和人性化。以下是具体的实验方法: 端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列 ...

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基因芯片实验中的细胞和组织制备规程

相关专题 一个完整的基因芯片实验包括以下几个步骤:研究课题的提出、芯片设计、样品制备、杂交反应、数据分析和处理。本文主要介绍其中的样品制备(细胞标本采集和组织标本采集)的建议做法。 细胞标本采集操作建议规程 1. 所有样品均应有样品标签(注明样品编号),同时有一张样品登记表,写明样品名称、种类、编号、取样日期、样品处理情况等。 2. 一张芯 ...

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FISH(荧光原位杂交)技术解析

相关专题 原位杂交 1974年Evans首次将染色体显带技术和染色体原位杂交联合应用,提高了定位的准确性。20世纪70年代后期人们开始探讨荧光标记的原位杂交,即FISH技术。1981年Harper成功地将单拷贝的DNA序列定位到G显带标本上,标志着染色体定位技术取得了重要进展。20世纪90年代,随着人类基因组计划的进行,由于绘制高分辨人类基因 ...

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NCBI GenBank数据库的起源、功能和常遇问题及解答

相关专题 GenBank数据库功能为:一、提交获取的基因序列;二、查找已知基因的序列生物学特性信息,例如编码区,科学命名等。那么Genebank ID 和Gene cluster ID又是什么呢? GenBank数据库起源 GenBank数据库是1982年由美国国立生物技术信息中心(NCBI)建立并维护的综合性序列数据库。大约每2个月会更新 ...

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Dicer酶结构及作用原理

相关专题 1、Dicer酶 在RNA干扰研究中会用到Dicer酶,Dicer酶是RNaseIII型家族中的蛋白酶,可特异识别dsRNA,它可以切割以各种方式进入到细胞内的dsRNA,将其切割成19-21bp大小的短RNAs。 Dicer是来自果蝇RNA干扰必须的RNaseIII型蛋白。Dicer酶是RNase III家族中特异识别双链R ...

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华大基因数据库和软件共享

相关专题 华大基因——全球最大的基因工厂 简介 BGI有一支专业的团队致力于数据库建设和基于Web应用开发。为了使华大基因提供的数据更好地被理解和使用,我们设立了项目介绍、基因组浏览、数据下载和相关问题等网站内容。我们也提供典型的基因组分析服务和相关工具的下载服务. 数据库列表 ...

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Oligo芯片、cDNA芯片以及原位合成芯片的区别

相关专题 Microarray主要是运用分子杂交原理,通过检测杂交信号的强弱,经过数据处理转化成基因的分度,从而研究基因表达水品的差异。Microarray分为两种即cDNA微阵列(cDNA芯片)和寡聚核苷酸微阵列(Oligo芯片)。 目前在中国市场上的基因芯片主要有三种。cDNA芯片,Oligo芯片,和原位合成芯片。 cDNA芯片的原理是 ...

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oligo知识大总结

相关专题 最长听说的是Oligo(dT),主要是由T(胸腺嘧啶)构成的核苷酸链,其次Oligo引物设计软件,由于其操作的简便性和引物分析设计的功能强大而风靡全球Oligo芯片是微阵列的一种,又称寡核苷酸微阵列。 Oligo(dT) 定义 多聚胸腺嘧啶、T重复寡核苷酸,就是只有胸腺嘧啶组成的核苷酸链。 应用 1.oligo(dT) captu ...

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PCR反应所需细菌DNA 模板的制备

相关专题 从分析的标本中纯化核酸,即制备PCR反应的模板,是使PCR获得成功的重要的第一步。由于PCR的用途各异,用于抽提核酸的起始材料种类可能差异很大(包括新鲜的、储存的和古代的)。每种特殊样品类型有各自的限制和抽提核酸的不同要求,但它们都有一个共同的标准,扩增的灵敏性要求特别注意不同材料、PCR产物、质粒或对照之间可能存在的交叉污染。由 ...

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纯水和超纯水的区别及纯水仪的工作原理

相关专题 纯水和超纯水是分子和细胞实验中常用的实验试剂,不同的实验需要的水的级别是不一样的,常常遇见刚进实验室的同学常有个疑问:纯水和超纯水是一样的么?下文主要讲述了纯水和超纯水区别以及纯水仪和超纯水仪的工作原理。 纯水和超纯水区别 在正确选择实验室超纯水机之前,我们必须很好地了解如下几个概念:什么是纯水?什么是超纯水?二者有何区别? 纯水 ...

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引物的熔解温度与退火温度

相关专题 primer的一个重要参数是熔解温度(Tm)。这是当50%的primer和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的。在理想状态下,退火温度足够低,以保证primer同目的序列有效退火, 同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比primer的 Tm低5℃。 ...

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变性、退火温度对PCR热循环的影响

相关专题 PCR退火温度应如何设置? 在PCR自动热循环中,最关键的因素是变性与退火的温度。如操作范例所示,其变性、退火、延伸的条件是:94℃60s 37℃60s 72℃120s,共25~30个循环,扩增片段500bp。在这里,每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算。在自动热循环仪内由混合液原温度变至所要求温度的时间需要30~6 ...

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什么是退火温度

相关专题 退火温度为引物和模板结合时候的温度参数,当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.它是影响PCR特异性的较重要因素。在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火, 同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。 在模板变性后温度快速冷却至40℃~ ...

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引物退火温度设计技巧

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