经典遗传学实验

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相关专题 一、慢病毒转染贴壁细胞实验方法 1、慢病毒转染前18-24小时，将贴壁细胞以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。 2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基，加入适量病毒悬液。37℃孵育。 3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤 ...

相关专题 本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。(本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。) 一、片断平移的克隆(也适用于多片断连接) 简介：将用作载体的质粒A(制作大片断)酶切3 ...

相关专题 FISH的特点：操作烦琐，步骤简单。说它操作烦琐，是因为它的操作步骤烦多，每一步又需要相当长的时间，如果自己标探针的话每批标本大约三天时间(买试剂盒只需一天，但价格昂贵)，你说是不是很烦琐?说它步骤简单也是有道理的。FISH其实并没什么神秘之处，只要操作过程仔细，严格按照操作步骤操作，很容易做成功，比PCR要简单得多，所以说它是步 ...

相关专题 1 甲基化敏感性限制性内切酶(methylation-sensitive restriction Endonuclease，MS-RE)-PCR/Southern法 这种方法利用甲基化敏感性限制性内切酶对甲基化区的不切割的特性，将DNA消化为不同大小的片段后再进行分析。常使用的甲基化敏感的限制性内切酶有HpaⅡ-MspⅠ(识别序列 ...

相关专题 DNA甲基化是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式。近年来，大量研究表明DNA甲基化修饰对于维持正常细胞功能、传递基因组遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生，起着至关重要的作用。甲基化研究成为表观遗传学的热点，相应的技术也是层出不穷，根据实验目的的不同，这些技术大体能够分成两类：全基因组(高通量)甲基化研究技术以及特异性甲基化位点 ...

相关专题 近年来涌现出不少DNA甲基化的检测技术，少说也有十几种。大致可以分为两类：特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析，后者也称为甲基化图谱分析(methylation profiling)。下面大家介绍一些常用的方法。 特异位点的甲基化检测 甲基化特异性PCR(MS-PCR) 这种方法经济实用，无需特殊仪器，因此是目前应用最为广泛 ...

相关专题 G418 ：白色粉末，融点138～144℃，溶于水、甲醇。 CAS No.：108321-42-2 分子式 ：C20H40N4O10 •2H2SO4 分子量 ：692.71 比旋：+104o～+121o 水分：≤10% 吸光值：≤0.015 (280nm，1mg/ml)， ≤0.1 (570nm， 10 ...

相关专题 Q1：G418怎么配制? A1：我觉得不能用水配，因为这样PH会变化很大，至少要用PBS。我是配在HEPES溶液中的，具体方法如下：1g包装的G418瓶子中，加入10ml HEPES溶液，浓度为100 mg/ml完全溶解后，0.22 um过滤，-20度保存。HEPES缓冲液配方如下：90 ml 水中，0.8 g NaCl 0.03 ...

相关专题 1.G418的配制： 方案一： 300mgG418加入3ml PBS溶液，浓度为100mg/ml，完全溶解后，0.22um 过滤，-20℃保存。 方案二：(1)配制1M HEPES：23.8g HEPES(缓冲能力更强)粉末溶于100ml ddH2O，10N NaOH(加量较多)调节pH至7.3，过滤除菌(较难过滤)，4℃保存，终 ...

相关专题 一步步教你设计简并引物PCR实验室产品选择指南 一、从别无选择的蛋白序列设计简并引物，如： M(A/T)ASV(E/D)NR(Q/H/Y)F 你只需要用FastPCR的DNA、Protein互转功能即可。 1、分析可能的组合，如下(fasTA format)： 1 MAASVENRQF 2 MTASVDNRHF 3 MTASVDNR ...

相关专题 一步步教你设计简并引物 简并引物设计都要注意些什么呢？用Primer5.0怎样设计兼并引物呢？下面是网上找到的详细的简并引物设计原则和Primer5.0 设计简并引物的方法可以参考下： 理论上说：由氨基酸回导核酸序列，同时考虑到细菌使用密码子的偏爱性，以减少兼并度，但是这样得到的兼并引物的兼并密码子比较多，我建议你可以先从网上找到已 ...

相关专题 最近想用“简并引物”设计点实验做做，上网找了点东东，还是发现了不少东西。特总结如下：主要包括简并引物设计常用的几个方面及简并因为设计时的注意事项。 简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。密码子具有简并性，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对简并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序 ...

相关专题 一步步教你设计简并引物 GeneFisher提供一个在线的简并引物设计工具，基础是同源基因。目前的版本是2.0，加入了AJAX技术。主页：http://bibiserv.techfak.uni-bielefeld.de/genefisher2/ geneFisher2 - Submission 点击 Genefisher2 Subm ...

相关专题 酵母感受态细胞制备可以：(1)用于建立酵母转化体系;(2)用于酵母表达系统构建;(3)用于酵母其他分子生物学研究。 一、试剂与耗材 1. 试剂 细菌用-酵母提取物(Fisher)、 细菌用-蛋白胨(Fisher)、葡萄糖(Fisher)、细菌用-琼脂粉、去离子水、甘油(Sigma)、二甲基亚砜(Sigma)、聚乙二醇3350(Si ...

相关专题 1、毕氏酵母氯化锂转化法 (1)试剂 1M LiCl(用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释) 50% PEG3350(Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装) 2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl pH8.0 1.0mM ...

相关专题 LB培养基的配方及实验指南 lb培养基是每个实验室最常用的物品，用于大肠杆菌的培养，在分子克隆实验室更是必备品。LB培养基或平板可能是你进入实验室最早接触的东东，但下面有几个关于LB培养基的有趣事情，您知不知道? 1、1950年Giuseppe Bertani在研究细菌溶源性过程中，为优化志贺氏菌属的噬斑性状首次制备了LB培养基。很 ...

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相关专题 问：我欲提酵母质粒。我在为酵母细胞破碎犯愁，有人说超声波就可以。但大多人说对于酵母不行，高手们请指教了!谢了! 答：军科院的方法： 1、用酵母细胞裂解液重悬酵母菌 2、加酚-氯仿 3、加玻璃珠 4、振荡半小时 5、乙醇沉淀 6、电转大肠杆菌 Detailed: Plasmid Isolation from Yeast Reagen ...