经典遗传学实验

相关专题 PCR退火温度应如何设置？ 引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度： Tm值(解链温度)=4(G+C)+2(A+T) 复性温度=Tm值-(5～10℃) 在Tm值允许范围内， 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合， 提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。 ...

相关专题 PCR退火温度应如何设置？PCR实验室产品选择指南 将退火时间从 20 秒改为两分钟并未改变扩增效率，但退火温度却是最重要的参数之一。尽管许多基因能在退火温度为 56 ℃ –60 ℃被特异的扩增，我们的经验表明 将退火温度降低 4 ℃ –6 ℃对于在多重 PCR 中扩增出同样的基因是必需的。单独扩增时退火温度为 60 ℃的基因在多重 ...

相关专题 PCR退火温度应如何设置？ 温度梯度PCR是指在退火温度不太明确时，为了找到最优退火温度，在一台PCR仪上同时做多管PCR，每一管放在仪器内不同列(有的是不同行)上，分别进行PCR(如50℃~60℃可以分6管，分别为50，52，54，56，58，60度)，最后看看哪个温度的效果最好。总之是用来进行退火温度优化的。 ...

相关专题 PCR退火温度应如何设置？ 降落PCR是在同一个PCR管内进行PCR，只是每个循环的温度不同(如每个循环降1度)。一般兼并引物用这种方法多些。 设计多循环反应的程序，以使相连循环的退火温度越来越低。由于开始时的退火温度选择为高于估计的Tm值，随着循环的进行，退火温度逐渐降到Tm值，并最终低于这个水平，用于确保第一个引物—模板杂交事件 ...

相关专题 PCR退火温度应如何设置？ 问题：请问一下 A 引物序列越长 退火温度越低 B 引物序列越短 退火温度越低 C 引物中C G 含量越高 退火温度越高 D 引物中A T 含量越低 退火温度越低 选择是A 退火就是复性 我想请问一下退火温度和引物序列为什么会有关系?也就是说退火到底是做什么，为什么序列会影响温度? 答案： 退火指的是是在 ...

相关专题 PCR退火温度应如何设置？ 在模板变性后温度快速冷却至40℃～60℃(某个退火温度)的时候，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞，这就使PCR后期的过程成为可能。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸，G+C ...

相关专题 PCR退火温度应如何设置？ DNA的双链主要是靠氢键联系在一起。 退火温度越高，断开氢键的热能越大，引物与模板越不易结合，反之，退火温度越低，越容易形成氢键，进行退火。 所以当温度高时，只有碱基匹配程度高的，也就是模板与引物形成配对数越多的引物，才能结合到模板上，这样扩增出来的条带最少，甚至只有一条，也就是引物和目的序列的完美匹配， ...

相关专题 PCR退火温度应如何设置？ 这个要看你的ISSR的引物了，一般引物报告单上都会注明最佳的退火温度。但我一般都是在最佳温度的上下10度做梯度来确定的。 ...

相关专题 PCR退火温度应如何设置？ GC含量高，说明解链温度高，目的条带在较高温度才会解链，而在未达到解链温度时，引物会以未完全解链的DNA为模板，进行PCR非特异性扩增，所以易出现非特异性条带。降低退火温度，DNA复性减缓，增加非特异性互补机会，使非特异性条带增多。 ...

相关专题 PCR退火温度应如何设置？ 问题：引物单上数据如下 上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%) Tm(1M Na+)：68.2 Tm(50mM Na+)：46.6 下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%) Tm(1M Na+)：66.2 Tm(50mM Na+)：44.6 顺便问下大家，Tm ...

相关专题 电穿孔是一种将外源的大分子物质导入动物或植物细胞内的一种方法。其原理是根据细胞在受到某种强度的电脉冲时，细胞膜表面会产生一些小孔，大分子物质即可通过这个小孔进入到细胞内。在进行电穿孔实验室时，电穿孔应用的缓冲液是实验成功与否的重要因素之一。 专利类型：发明 专利号：02808704 专利申请日：2002/04/23 公开(公告) ...

相关专题 RNA干扰载体主要用来研究基因表达调控，RNA干扰技术已已被广泛用于基因结构功能研究和传染性疾病及基因治疗领域，进行RNA干扰实验首先是构建RNA干扰载体，本文以pRI系列载体为例论述了干扰载体的构建的实验流程。 产品技术背景 pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1 ...

相关专题 它们都是BSA BSA( 分离体分组混合分析法或混合分组分析法，又称 集团分离分析法，Bulked Segregation Analysis)分析法首次由Michlmore等…提出并成功地在莴苣中筛选出与目的基因相连锁的标记。该方法首先从一对具有目标基因的表型差异的亲本所产生的任何一种分离群体中，根据目标基因的表型分别选取一定数量的 ...

相关专题 聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学常用技术，是体外扩增DNA的方法，设计生物学的各个领域，基本是进了实验室都必须掌握的技术。对于刚入生物门的我们简单了解其步骤、反应体系很有必要。 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction PCR)步骤 三步： 1 变性：模板DNA加热变性 2 退火 引物与它的靶序列发 ...

相关专题 探针的原理及其应用 一质粒制备 1质粒的转化和扩增 1.1制备XL1-Blue感受态细菌 1.取400uLXL1-Blue菌种加入到含200mlLB培养基的锥形瓶中，37℃、100rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1mol/LCaCl_2重悬细菌，冰浴30min，离心，弃上清，倒置，再加4ml(含15%甘油)冰冷的CaCl2重 ...

相关专题 大三的时候，跟着老师做课题，刚进入实验室，师兄就丢了一大堆空的枪头盒，让装枪头，愣是包办了整个实验室给半年的枪头。在这里总结了大家枪头灭菌的方法，其实很简单。 枪头如何灭菌? 将放入枪头盒中湿热灭菌。121度，15-20分。为了避免水蒸气困扰，可以在枪头盒外包上报纸，或者灭菌后置于温箱中干燥。 高压蒸汽灭菌时为什么枪头盒要用报纸包 ...

相关专题 逆转录PCR（RT-PCR）的原理 逆转录PCR (RT-PCR)具有较高的灵敏性、操作简单等优点，常用于基因定量分析、生物学检测等，此外常用逆转录PCR克隆目的基因。 本文主要讲述了逆转录PCR的原理、重要参数以及操作注意事项。 cDNA的合成是RT-PCR的重要环节。以mRNA为模板，在逆转录酶的催化下，随机引物、oligo ...

相关专题 NCBI BLAST比对结果报告分析:BLAST是NCBI开发的一款序列相似搜索程，常用在线的BLAST比对工具进行序列比对分析和引物设计。 写在解读报告之前的，首先就使用Blast最终的目的是什么达成一致，Blast是通过两两比对，找到数据库中与输入序列最相似的序列，或者说是最相似的序列片段。那么我们看比对结果就是看Blast从 ...

相关专题 转膜是把DNA 从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定，是进行各种后续研究(如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。 实验目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤 实验原理： 1.转膜的方式： 向上的毛细管转移 向下的毛细管转移 同时向两张膜转移 电转移 真空 ...

相关专题 GeneSpring是一款广受好评的基因组学工作人员必知软件，使用者可在短时间内分析运算出目的基因的序列，称得上系统生物学分析软件中的佼佼者，受到相关科研工作者的欢迎和肯定。本文对GeneSpring GX的优势做详细分析。GeneSpring生物数据分析软件 GeneSpring GX是一套特别针对生物学家需求所精心设计的生物芯 ...