遗传学实验技术

钱其军1，3 刘新垣2，3 吴孟超11第二军医大学东方肝胆外科医院 2中科院上海生化及细胞所 3浙江理工大学生命科学院一、前言在人类疾病中，恶性肿瘤是威胁人们的常见病，也是人类生命的主要“杀手”之一，因此癌症的治疗始终是人类十分重视的大课题。传统的放、化疗存在抗肿瘤能力低、杀伤指数过小、副作用大等一系列缺点。为了增加疗效减少毒性，人们提出“介入”治疗和定向放疗的方法，希望能以此达到特异性杀灭癌组织 ...

实验目的：掌握染色体组型分析的各种数据指标学习染色体组型分析的基本方法实验原理定义：染色体组型又称核型，是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群（亚种、种、属等）的体细胞内的整套染色体，按它们相对恒定的特征排列起来的图像。核型模式图是指将一个染色体组的全部染色体逐个按其特征绘制下来，再按长短、形态等特征排列起来的图像。发展历史1920年提出三项技术促进：低渗处理 ...

All living organisms have thousands to tens of thousands of unique genes encoded in their genome of which only a small fraction perhaps 15% are expressed in any individual cell. Therefore it is the te ...

发展历史荧光原位杂交技术(fluorescence in situ HybridizationFISH)问世于70年代后期其曾多用于染色 体异常的研究近年来随着FISH所应用的探针种类的不断增多特别是全COSMID探针及染色体原位抑制杂交技 术的出现使FISH技术不仅在细胞遗传学方面而且还广泛应用于肿瘤学研究如诊断、基因定位等放射性同位素原位杂交技术原有的放射性同位素原位杂交技术存在着较多缺点，诸 ...

摘要:腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒，目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分，然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV，(2)rA ...

目录 一、 生命科学中的“钓鱼”（ FISH ）技术二、 显微镜基础知识及显微照相技术三、 Qbiogene 荧光原位杂交的新型探针研究用探针a 、人卫星 DNA 直接染色探针b 、人染色体着色探针c 、人端粒特异特 DNA 探针d 、小鼠染色体探针e 、微切除探针f 、特异性位点探针临床用探针a 、产前诊断b 、肿瘤，血液病及其他疾病四、 荧光标记试剂及试剂盒a 、标记试剂b 、检测试剂c 、荧 ...

基因组序列的迅速获得推动了一门新兴学科——功能基因组学的发展，这一学科重点关注基因功能的变化。扩增性片段长度多态性（Amplified restriction fragment length polymorphism，AFLP）分析以及反向遗传学都是功能基因组学的重要组成部分。传统的反向遗传学，例如用转座子（transposon）敲除特定基因，虽然可以准确测定表型，但需要进行耗时的转基因或复杂的组 ...

DNA分子标记在植物生物技术中的应用遗传标记概述DNA分子标记概述DNA分子标记的主要类型DNA分子标记在植物生物技术中的应用PCR技术及在植物分子生物学中的应用利用RAPD分子标记对三组三系杂交水稻及亲本的遗传分析和鉴定遗传标记概述遗传标记是指可以明确反映遗传多态性的生物特征。在经典遗传学中，遗传多态性是指等位基因的变异。在现代遗传学中，遗传多态性是指基因组中任何座位上的相对差异。遗传标记的发展 ...

由于常规的连锁分析（linkage analysis）是利用单分离群体，只用两个亲本，所以在一次研究中只能检测两个或四个等位基因。而且选择要在性状上尽可能差别明显的亲本，以提高检测到主效基因位点分离的机率。这种方法不能检查整个种质群体中的全部遗传变异，不能在一次测验中研究多个不同的性状。联合作图（association mapping）也称连锁不平衡作图（linkage disequilibriu ...

目的序列与载体DNA正确连接的效率、重组导入细胞的效率都不是百分之百的，因而最后生长繁殖出来的细胞并不同都带有目的序列。一般一个载体只携带某一段外源DNA，一个细胞只接受一个重组DNA分子。最后培养出来的细胞群中只有一部分、甚至只有很小一部分是含有目的序列的重组体（recombinant）。将目的重组体筛选出来就等于获得了目的序列的克隆，所以筛选(dcreening)是基因克隆的重要步骤。在构建载 ...

目的基因序列与载体连接后，要导入细胞中才能繁殖扩增，再经过筛选，才能获得重组DNA分子克隆，不同的载体在不同的宿主细胞中繁殖，导入细胞的方法也不相同。一、转化　　由于外源DNA的进入而使细胞遗传性改变称为转化，早在1943年，Avery等就发现有毒肺炎双球菌的DNA与无毒肺炎双球菌共培养后产生有毒性的肺炎双球菌后代的转化现象。但DNA进入细胞的效率很低，在分子生物学和基因工程工作中可采取一些方法处 ...

李振宇综述　徐开林　潘秀英审阅徐州医学院附属医院血液科(徐州 221002)　　摘要　慢病毒载体目前是基因治疗中研究较多的载体 与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较 它有感染非分裂期细胞及容纳外源性目的基因片段大等优点。对其结构的优化主要集中在提高生物安全性、提高转基因表达、转基因表达的调控及载体靶向性等方面。本文介绍了慢病毒载体构建及结构优化方面的研究进展作一综述。关键词　慢病毒载体; 载 ...

【摘要】　慢病毒(lentivirus) 具有可以感染低分裂细胞的独特优势且基因转移效率高操作相对简便在多种疾病的基因治疗、转基因动物的制备等方面成为引人瞩目的病毒载体。本文就慢病毒载体(lentiviral vector LV) 的特点、构建、应用尤其是慢病毒载体对于肝细胞的基因转移进行综述。【关键词】　慢病毒载体;肝细胞　疾病的基因治疗目前已引起越来越多的重视。在基因治疗中一个重要的方面即是基 ...

实验八 染色体G带技术 【实验目的】 　　学习和掌握胰蛋白酶法的染色体 G 带显带技术。 【实验原理】 　　染色体由 DNA 、组蛋白、非组蛋白等组成。在 DNA 链上有 A-T 丰富区及 G-C 丰富区，用 Giemsa 染 ...

人的外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备 【实验目的】 　 掌握人体外周血离体培养制备染色体标本的方法。 【实验原理】 　　 人外周血中的小淋巴细胞几乎都在G1期或G0期，一般情况下是不分裂的。当在离 ...

实验五 果蝇遗传性状系列杂交实验 【系列杂交实验内容】 　　1.果蝇的单因子实验杂交组合 18#♀ x 2 #♂ (正交） 2#♀ x 18#♂(反交)。 　　2.果蝇二对因子自由组合实验的杂交组合 e♀ x 2#♂ (正交) 2#♀ ...

实验三 果蝇唾腺染色体 【实验目的】 　　1．练习取出果蝇幼虫的唾腺和制作唾腺染色体标本的方法与技术。 　　2．观察和识别多线染色体的特征： 　　　　a．巨大，多线； 　　　　b．染色体配对，染色体只有体细胞的半数(n)； ...

一、实验目的1．掌握利用系谱与DNA检测所得到的信息相结合用于产前基因诊断的方法；2．了解DNA分析技术在遗传病产前基因诊断中的应。二、实验原理（一）PCR-RFLP分析技术PCR-RFLP分析技术是在PCR技术基础上，根据限制性内切酶识别位点改变而导致的酶切位点增加或消失的特点，对DNA进行鉴定；利用PCR特异扩增的 DNA片断中包含某个碱基突变，经特定限制酶切割后 通过凝胶电泳分离酶切产物大 ...

一、实验目的1、了解植物细胞周期中染色体的动态变化。2、学习植物染色体常规压片技术。二、实验原理植物染色体的常规压片技术是观察染色体常用的方法。该技术以生长、分裂比较旺盛的植物根尖细胞为材料，经预处理、固定、解离、染色、压片等程序，就可以观察到较多的处于有丝分裂中期的细胞和染色体。三、实验材料洋葱鳞茎或蚕豆种子。四、实验器具及药品恒温培养箱，恒温水浴锅，显微镜，解剖器，载玻片及盖玻片，白瓷 ...

一、实验目的1、了解动植物生殖细胞的形成过程。2、掌握减数分裂过程中染色体的行为和特征。3、学习生殖细胞的取材和染色体制片二、实验原理　　是生物在性细胞成熟时配子形成过程中发生的一种特殊的分裂。它包括两次连续的分裂，在减数分裂的整个过程中，同源染色体之间发生联会、交换、分离，非同源染色体之间进行自由组合。最终分裂为染色体数目减半的的四个子细胞。从而发育为雌性或雄性配子（n），雌雄配子通过受精 ...