遗传学实验技术

一、实验目的 掌握植物多倍体人工诱导技术及多倍体鉴定方法。 二、实验原理 用秋水仙素溶液处理植物的种子或幼苗，是常用的人工诱导多倍体的有效方法。秋水仙素是从百合科秋水仙属的一个种，秋水仙(Colchicum autumnale)的种子及器官中提取出来的一种生物碱，其分子式为C22H25NO6，因有剧毒，故使用时要特别注意，切勿使药液进入眼内或口中。秋水仙素诱导作用在于阻止有丝分裂细胞的纺锤丝的形成 ...

1.1 腺病毒载体腺病毒是较早用来转基因的一种载体，它对人体无致病性，生物安全性好；它的宿主范围广，而且可以感染静止细胞（如造血干细胞）。但早期以腺病毒为载体转导造血干细胞的转基因效率很低。腺病毒在进入宿主细胞后，其病毒DNA并不整合到宿主基因组上，是造成转基因效率低的原因之一。有研究发现在造血干细胞表面缺乏腺病毒的特异性受体，所以一度认为造血干细胞不是腺病毒的合适的靶细胞。个别报道通过提高腺病毒 ...

肖英华　李雅轩　郑继刚(首都师范大学生物系北京100037)摘要　基因治疗面临的首要问题是如何选择适当的基因载体将具有治疗价值的基因导入靶细胞并使其有效表达 以达到治疗疾病的目的。目前基因治疗临床试验中采用的载体大多数为病毒载体。本文主要介绍基因治疗中常用的4 种病毒载体的生物学特性 以及各个载体在基因治疗中的优缺点。关键词　基因治疗　病毒载体在基因治疗中 病毒已成为一种有效的载体系统。基因治疗就 ...

一、实验目的 通过实验，掌握空气干燥法制片技术。 二、实验原理 在骨髓细胞中，有丝分裂的指数是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不必像血淋巴细胞那样要经过体外培养。通过骨髓得到染色体是比较简便的，一般也无需无菌操作。在临床上多用于白血病的研究，在实验条件下，这种染色体是机体内真实情况的反映，而且用骨髓制片的方法易于观察毒性物质在体内对细胞和染色体的影响。 直接制片法，是直接从骨髓中取出细胞，经压 ...

摘要： 目前各种应用于基因治疗领域的载体均存在一定的局限性。越来越多的研究者认为，最理想的基因治疗载体应该在染色体的结构基础上构建，使目的基因整合后能够作为独立的功能单位表达，或者成为游离基因而稳定存在。人类人工染色体（human artificial chromosome HAC）的出现，使这种设想成为可能。近年来，研究者们基于两种基本策略相继构建多种HAC，并以之作为载体进行了一系列外源性基因 ...

丁召兴1 　田洪根21. 滨州医学院附属医院 256603 2. 滨州市药品检验所 256618 从逆转录酶和前病毒学说的创立，逆转录病毒逐渐从一种致瘤病毒发展至作为基因转移的载体用于基因治疗的研究 医学科学的进步正在使看似不可能的事情变为现实。然而，目前国内外仍不能找到一种满足临床治疗需要的兼顾安全与高效的载体系统，这也使得基因治疗的进程举步维艰。随着科学的发展，可试用的构想不断产生，相信人类 ...

一、实验目的了解和掌握动物染色体涂片标本的制作过程，为今后开展有关这方面的科研打下基础。二、实验原理　　请参阅实验十《小白鼠染色体的制备与观察》三、实验材料　　青蛙或蟾蜍四、实验器具和药品试剂冰箱、离心机、恒温水浴锅、显微镜、分析天平、药物天平、台称、试管架、离心管、吸管、烧杯、量筒、注射器(1ml、5ml)、5号针头、载玻片、解剖盘、解剖刀、剪刀、镊子、酒精灯、切片盒、切片架、纱布、黑白胶卷。0 ...

摘要 基因转染是基因治疗的关键步骤之一。目前所采用的转染技术主要是病毒载体系统和非病毒载体系统，它们各有优缺点。病毒载体转染效率比较高，但其免疫原性大、靶向性差，并有着潜在的致瘤性。非病毒载体安全性和靶向性较好，但转染效率一直欠佳。因此，寻求一种理想的转染方式，将二者的优势相结合，使目的基因靶向、安全并高效的整合到靶细胞基因组，是基因治疗成功的关键。随着纳米技术和磁性材料在医学上的应用，一种新型的 ...

一 背景基因治疗通常是指把遗传物质（DNA或RNA）引入到患者的细胞中，以达到治疗疾病的目的。它是伴随着基因工程技术和分子生物学的发展而逐渐形成的一种新型“分子治疗”手段。1990年9月，美国科学家Anderson博士等人进行了首例基因治疗的临床试验。到目前为止），全世界范围内已经批准进行了400多个临床试验方案。1991年，复旦大学的薛京伦教授研究小组进行了我国第一例基因治疗临床试验，说明我国在 ...

Half day Seminar17th December 2002School of Metallurgy and MaterialsThe University of Birmingham This half day meeting was the third held by the MedMag Network which continued the series of more focu ...

1.0 Purpose1.1 This protocol may be used for the linearization and purification of the shuttle plasmid.2.0 Materials2.1 Equipment DNA Gel Electrophoresis Apparatus Heating block set at 65 ºC ...

病毒基因载体作为一种高效的基因转移工具，在生物医学研究中的应用与日俱增。在基因功能研究方面，病毒载体在新基因功能确证、RNA干扰等领域得到了越来越多研究者的关注，大有取代其他各种基因转移方案之势；在基因治疗方面，病毒载体更是以其给药方便、长期高效表达的显著优点成为基因治疗方案的首选工具。在常用的病毒基因载体中，腺相关病毒载体（Adeno-associated Virus AAV）因其可以长期稳定表 ...

　　引言：小干扰RNAs(small interfering RNAs，siRNAs)是RNA干扰(RNA interference，RNAi)过程中的效应分子.Fire et al在1998年向秀丽隐杆线虫中注射双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)分子后降解了细胞质中含有同源序列的靶mRNA.随后的研究表明，RNAi现象广泛存在于真菌、拟南芥、斑马鱼、果蝇、小鼠及大鼠 ...

一种快速高效分离和纯化重组腺病毒伴随病毒载体的方法吴小兵 董小岩 伍志坚 屈建国 侯云德(中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室; 形态室 北京100052.* Email: wuxb@public.east.cn.net)摘要 利用2 型腺病毒伴随病毒(adeno-associated virus type 2 AAV-2)能够抵抗氯仿的特性 采用“氯仿处理-PEG/NaCl ...

1.0 Purpose1.1 Provide instructions on infecting cell lines with adenovirus vectors.2.0 Materials2.1 EquipmentTissue Culture Hood37°C Incubator w/ 5% CO22.2 Supplies1 6-well Tissue Culture PlateSuffic ...

1 转染前一天将293T细胞铺于10cm板，当细胞密度达到80％左右即可进行PEI转染。2将下列DNA加入一个已装有480ul undefined HBS( PH 7.4)灭菌管混匀三质粒系统：12ug vector6ug VSVG9ug PHR四质粒系统：12ug vector6ug VSVG6ug RSV-REV6ug pMDL3. 将1undefined PEI 剧烈振荡后加入到360ul undefined HBS( PH 7.4 ...

PurposeThis protocol may be used for the Transduction of adherent cell lines with recombinant Retro-viral vectors (Lenti- and MMLV-~undefined.*Please note that this process is variable and expression efficien ...

吴小兵博士中国CDC病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室（副研究员）本元正阳基因技术股份有限公司/863计划生物领域病毒基因载体研发基地（技术总监）(2004年4月）一、基因治疗回顾早在１９６８年，美国科学家迈克尔·布莱泽在的文章，首次在医学界提出了基因疗法的概念。但直到１９９０年，人类才首次进行了相关临床试验。美国FrenchAnderson于1990年9月进行了逆转录病毒载体介导的腺苷脱 ...

当前，人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移，一个以基因组功能研究为主要内容的所谓“后基因组时代”(post-genomics)，也即功能基因组(functional genomics)时代，即将到来。如何获取基因的功能信息，即与人类重大疾病和重要生理功能相关的基因信息，就摆在了我们面前。定位候选克隆策略(positional candidate cloning)是传统定位克隆(posi ...

Bisulfite-PCR followed by restriction is a rapid and semi-quantitative method of analyzing DNA methylation. The PCR products are also suitable for either direct sequencing or cloning and sequencing. T ...