遗传学实验技术

相关专题 引物设计 RT-PCR引物设计的主要的过程包括如下：首先查找目的基因的序列并编辑，其次是利用软件进行引物设计并选择合适的上下游引物序列。详情如下： 在NCBI上搜索到该基因，找到该基因的mrna，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。 打开Primer Premie ...

相关专题 刚做实验的同学，很多时候希望别人帮自己设计好引物，其实这种方式是不可取的，首先是高估了引物设计的难度，其次也自己的实验别人了解的并不多，还有就是引物设计其实是实验者必备的技能。这里讲述下RT-PCR设计的基本原则。 1.上下游引物要保守： 为了能够扩增出所需要的保守片段，必须对保守的100-200片段进行PCR扩增。所以引物的选取 ...

相关专题 近几年来端粒酶由于与长寿、癌症等的研究相关联而备受关注，而端粒酶活性检测具体方法又有那些呢?小编整理了端粒酶活性检测的原理、基本操作技巧、结果判断、扩增片段检测等方面内容，以飨读者。 端粒酶(Telomerase)是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶。人端粒酶RNA组分(hTR)于1995年被克隆，其中含有端粒重复序列的模板( ...

相关专题 Kim应当不会预测到，他在1994年发明的TRAP会那么受欢迎，被一代又一代的研究者奉为端粒酶活性检测首选方法。不过，TRAP法虽然灵敏度高，却同样存在瑕疵。下面为大家介绍的是根据TRAP法适当改良的研究专用试剂盒具体情况和使用方法以及常见问题解答。 本品与通常的端粒酶活性测定法相比较，具有以下特征： ·内标与端粒酶提取液在同一管 ...

相关专题 PCR内参：选还是不选？ Q1：要做real-time pcr，而该种的β-actin未确定，我知道一般用持家基因作内参，但似乎其他基因各有缺点，有的作者用他们做内参时被sci杂志要求用两个内参以证实，我想知道的是除了β-actin，哪个基因是SCI公认的内参基因(不用作两个内参了)? A1：28S和18S rr ...

相关专题 引物设计完成之后，需要用软件进行分析，找到最佳的引物对，采用Blast分析验证引物，可以知道序列的正确性，也能知道引物的特异性状况、引物的具体位置以及PCR产物的大小。 先找到需要设计引物的目标基因的在有引物序列的mrna序列，可以通过全文（如最先发现该基因的文章），全文中有时可以找到大鼠c-jun mRNA序列的ACCESSIO ...

相关专题 载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。这里主要介绍下一个合格质粒的组成要素、载体的一些基本知识以及如何阅读质粒图谱。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因 可以便于加以检 ...

相关专题 &NBSp; 一、真菌DNA的提取(方法一) 1.实验试剂 (1)DNA提取液：0.2M Tris-HCl(pH 7.5)，0.5M NaCl，0.01M EDTA，1%SDS (2)3M NaAc (3)TE：10 mmol/L Tris-HCl pH8.0，1 mmol/L EDTA (4)酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25 ...

相关专题 蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μ ...

相关专题 基因芯片技术的诞生为生物技术工作人员打开了一道科研的便利之门，曾被评为1998年年度十大科技进展之一。本文对基因芯片的实验原理、技术基础、分类、用途、操作主要环节等内容做详细的介绍。 1.基本原理和技术基础 基因芯片以DNA杂交为基本原理，基于A和T、G和C的互补关系。它是在探针的基础上研制出的。所谓探针是一段人工合成或筛选出的已 ...

相关专题 实验室很多同学都要做Real time PCR实验，实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见，不过也有实验室前没有做过的，查找了下资料和大家分享下关于实时荧光Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。 荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物，探针法的出现使得定量PCR技术的特异性比常规PCR技术大大提高 ...

相关专题 慢病毒包装技术专题 一、慢病毒转染贴壁细胞实验方法 1、慢病毒转染前18-24小时，将贴壁细胞以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。 2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基，加入适量病毒悬液。37℃孵育。 3、(对polybrene毒性敏 ...

相关专题 慢病毒包装技术专题 慢病毒(Lentiviruses)属于逆转录病毒科。慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因治疗的转移载体。 HIV (Human immunodeficiency virus) 、EIAV (Equine infect ...

相关专题 慢病毒包装技术专题 现今常用的制备慢病毒载体的方法为使用3或者4质粒系统转染293T细胞。此外，也有使用其它几类慢病毒包装细胞系制备慢病毒载体。 瞬时转染制备慢病毒： 细胞：慢病毒包装常用人胚肾细胞(HEK human embryonic kidney)293T，其含有SV40病毒的大T抗原蛋白编码基因，转染效率极高。但其贴壁性不好 ...

相关专题 慢病毒包装技术专题 慢病毒包装简要步骤： 以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。 1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔混匀，室温孵育5min。 2、取1.5ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250μ ...

相关专题 慢病毒包装技术专题 RNA干扰靶序列设计的方法最初由Elbashir et.al 2001发表。之后由于发现了RISC与siRNA结合的偏好，设计干扰效果优秀的siRNA的成功率大大增加。我们主要采用Pei and Tuschl(N2N8N8N2)发表的设计原则进行设计。对初步筛选出的所有符合条件的序列进行siRNA正义和反义链自由 ...

相关专题 慢病毒包装技术专题 «介绍一下贵公司的慢病毒载体，有何特点? 本公司的慢病毒载体是在第三代慢病毒载体系统的基础上优化而成的，经过优化，我们的载体滴度高，安全性好，转染高效。 «慢病毒如何储存? 客户在收到慢病毒液后，如果在很短的时间内就开展实验的话，可以将病毒置于4℃保存;如果长期保存可将病毒装入冻存管中置于-80℃冰箱(注意：病毒 ...

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相关专题 本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。(本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。) 一、片断平移的克隆(也适用于多片断连接) 简介：将用作载体的质粒A(制作大片断)酶切3 ...

相关专题 FISH的特点：操作烦琐，步骤简单。说它操作烦琐，是因为它的操作步骤烦多，每一步又需要相当长的时间，如果自己标探针的话每批标本大约三天时间(买试剂盒只需一天，但价格昂贵)，你说是不是很烦琐?说它步骤简单也是有道理的。FISH其实并没什么神秘之处，只要操作过程仔细，严格按照操作步骤操作，很容易做成功，比PCR要简单得多，所以说它是步 ...