遗传学实验技术

相关专题 分子生物学技术已经成为生命科学领域研究有力工具，但是很多实验的重复性和复杂性常会耗费很多时间，严重影响了实验的进度。所以现在很多课题组将实验中某些费事的实验环节外包给生物学技术服务商。 1.哈尔滨海基生物科技有限公司 现代分子生物学技术已经成为科学研究领域有力的工具。但是，繁杂和重复性的工作花费了科研人员太多不必要的宝贵时间。将 ...

相关专题 在本章节我们解释了转染体系的关键组分对细胞转染实验的效率有何影响，并且合理的给予您一些关于如何使它们更有利于您研究方面的提示。 【组织培养试剂】 一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括 ...

相关专题 实验原理: Southern印迹是将DNA片断从电泳凝胶上直接转移至膜支持物(如硝酸纤维素膜、尼龙膜)上，使DNA片断固定的技术。先将DNA经限制性内切酶消化成一系列片段，进行琼脂糖凝胶电泳，各片段因分子量不同而彼此分开，然后经碱处理凝胶，使DNA的片段被变性、中和并通过毛细作用在高盐缓冲液中在原位将单链核酸转印到硝酸纤维膜上，烘 ...

相关专题 DNA 片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造 一、质粒 常用的有pBR322，pUC系列质粒等。 (一)pBR322质粒是4362bp的环状双链DNA 载体，有2个抗药性基因(四环素和氨苄青霉素)，一个复制起始点和多个用于克隆 的限制酶切点。当缺失抗药性基因的大肠杆菌被pBR322成功 ...

相关专题 在生命科学领域，没有一本书比它更红，几乎每个实验室都有，几乎每个人都翻过。它就是《分子克隆实验指南》。30年前，这本书诞生于冷泉港实验室出版社，它的前身是1980年冷泉港真核基因分子克隆讲习班实验方案的汇编。7年后，该书又出了第二版。当时的人们也许未曾料到，这部著作在20年的时间里竟成为指导生命科学前沿科研工作的一部“圣经”。 1 ...

相关专题 　　DNA重组技术包括载体及外源DNA片段的酶切消化、目的片段的获得及纯化、目的片段与克隆载体的体外连接、重组子的筛选和鉴定等内容。DNA片段的克隆技术是分子操作的核心部分。 　　实验目的：学习DNA的酶切、纯化及外源片段与载体的连接，将BAC克隆所携带的外源DNA酶切片段亚克隆到pUC18载体上。 　　实验材料：外源片段来自一个 ...

相关专题 &NBSp; 1取5ml噬菌体溶液放入无菌干净的小烧杯中，缓缓加入固体NaCl，使其终浓度为1M(0.292g)充分溶解后冰浴1小时。 24℃下11000rpm离心10min，取上清液于另一个干净烧杯中，将PEG6000加入烧杯中使其终浓度为10%W/V约0.5克)，磁力棒缓慢搅拌，冰水浴1.5小时，于4℃，15000rpm离心1 ...

相关专题 1.Vectorpedia： 输入质粒骨架，直接查询，非常方便; http://www.addgene.org/pgvec1?f=v&cmd=listvecinfo 2. google 检索式子：质粒名 + map 质粒名 +sequence +filetype:txt or filetype:pdf 或者：进入google，点击 ...

相关专题 1.溶液I―溶菌液: 溶菌酶:它是糖苷水解酶能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-14糖苷键因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时溶菌酶作用受到抑制。 葡萄糖:增加溶液的粘度维持渗透压防止DNA 受机械剪切力作用而降解。 EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子抑制脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用(DN ...

相关专题 第一天： 1. 将适合菌株(如XL1-Blue DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升)，保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用 第二天： 4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml L ...

相关专题 载体及目的DNA 片断经酶切后，如果无多余的片断(如载体单切)可以直接酚/氯仿抽提后乙醇沉淀回收直接连接用。但多数还有多余片断(如载体双酶切后有插入片断但要回收空载体，多个目的DNA片断选择其一克隆)，必须电泳分离后回收目的片断。回收的方法既有传统的方法，这些方法基于降低凝胶的熔点以释放DNA，然后通过酚/氯仿抽提后乙醇沉淀回收， ...

相关专题 根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS)，它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不 ...

相关专题 微卫星(microsatellite)：一般指基因组中由短的重复单元(一般为1～6个碱基)组成的DNA串联重复序列。 微卫星Microsatellite DNA是20世纪80年代后期Marshfield医学研究基金会(Marshfield Medical Research Foundation)的James和俄勒冈健康科学大学(O ...

相关专题 一、原理 细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。 测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。 Br ...

相关专题 【目的和要求】 1.学会CTAB法提取细菌总DNA。 2.掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳法。 【实验原理】 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱氧核糖核蛋白复合物后，必须将其中蛋白质去除。CTAB(溴代十六烷基三甲胺)是一种去污剂，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中可溶并且稳定存在，若降低盐浓度，CTAB与核 ...

相关专题 本法的产量要低得多，但却比本章所述的其他方法更温和，是提取大质粒(大于15kb)的首选方法。 试验步骤: 1、将500ml细菌沉淀物洗过后重悬于10ml用冰预冷的10%蔗糖、50mmol/L Tris.Cl(pH8.0)溶液中，将悬液移至30ml的带盖螺口塑料试管中。 2、加入2ml新配制的溶菌酶溶液。当溶液的pH值小于8.0时， ...

相关专题 在玩具赛车轨道游戏里，出老千的玩家会扳动开关，让他们对手的车辆进入一个循环轨道，从而赢取比赛。细胞也会这一招——改变“轨道”布局，影响细胞功能，来自欧洲分子生物学实验室(EMBL)和牛津大学的科学家们发现通过形成或撤销基因环结构(gene loops)，细胞能调控转录机器，控制它是沿着遗传物质的一个方向还是两个方向前进。 “我们发 ...

相关专题 引物设计是分子生物学常用技术，引物质量有可以影响实验质量，利用优化的引物会使实验取得良好的实验结果，否则会加大后续的工作量，实验可能一无所获。需要坚持什么样的原则才能设计出完美的上下游引物呢？ 一、引物设计step by step 1、在NCBI上搜索到目的基因，找到该基因的mrna，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的o ...

相关专题 上游引物也称作正义链(sense primer)，下游引物也称作反义链(antisense primer )，DNA 分子是双链，5‘——3’的链称作正链，上游引物合成的链和正链序列相同，3‘——5’方向的链称作副链，上游引物合成的链和负链互补。 引物(Primer)在聚合作用的起始时，可以刺激合成另一种大分子，并与反应物以共价键 ...

相关专题 万能缓冲液PBS 我实验时经常用到PBS缓冲液，但是很多文献里面也用到了Hanks缓冲液，不知道这两种缓冲液在细胞培养方面有什么区别吗?也就是说它分别适合于哪些情况? PBS：磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等渗盐溶液。PBS溶液又称磷酸盐缓冲溶液，一般选择K2HPO4和KH2PO4配制，因为钠盐溶解的较慢。根据不同pH的溶液， ...