遗传学实验技术

Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 SystemLe Cong and Feng ZhangAbstractThe Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)-Cas9 system is an adaptiveimmune system that exists in a variety of microbes. It could be engineered to function in eukaryotic cel ...

本文摘自丁香园论坛：http://www.dxy.cn/bbs/thread/21866348#21866348问题：最近要做CHIP，有一点疑惑：如果超声过程正好把目的基因断开，PCR时应该就检测不到目的基因了啊！有这样的情况吗？解答：1. 超声要摸条件，使DNA 片段大都控制在300-500bp（其实200-800bp也可以的），太小了基本都打断了，没法PCR。2. 设计PCR引物时，产物的长度不要太长100多就可以，产物太长不容易 ...

问题：各位大虾，大家有没有做这个的啊？我是个新手，想向各位请教一下超声波破碎的条件摸索，从哪几个方面入手，因为它要求片断要破碎到200-1000bp，我怎么破都在200-1500左右，请不吝赐教！回答：1、固定超声的功率，调个中等的，然后摸时间，这个比较简单可以从1min开始摸起，然后步长1min，步长指的是：比如从1分钟开始，步长为0.5分钟，那么就会有如下的组，1 1.5 2 2.5 3....分钟

小弟是新手，刚开始做实验，向诸位请教一个问题。我要做一个蛋白的 IP,520个AA，58/55kDa，查文献都是用标签FLAG的抗体做的，但现在没有这个标签的真核表达载体，想直接转染后用目的蛋白的抗体做，不知 道可不可以？还有就是，什么时候用标签，什么时候可以不用？标签的选择有没有要求？请大家不吝指教，*！ps：小弟新虫，金币不多，大家见谅啊！问题：看的文献上都是用含标签的目的蛋白基因的载体转染细胞，然后做IP，我想，是不是目的 ...

ChIP是一种强大的确定蛋白或者组蛋白修饰在基因组上定位的实验方法。染色质被分离出来后采用抗体与抗原的结合来判定目的蛋白是否结合在特定的DNA序列上或者判定目的蛋白结合位点在全基因组范围的分布（微阵列或DNA序列）。这种方法具有空间性与时效性。该实验设计为如何在细胞中进行ChIP实验提供了详细的步骤。1. 交联和细胞收获甲醛可以将蛋白质交联到DNA上。交联结果的好坏决定于交联时间的把握。我们建议样品交联的时间 ...

染色质由真核基因组包装而成，它参与了转录、复制、重组、修复等许多以DNA一蛋白质相互作用为基础的生化过程。研究者感兴趣的是这些过程涉及到哪些特异的基因或DNA序列,有哪些蛋白质参与。尽管有许多人对染色质进行分类,就像Holde将其分为转录活性或非活性位点,但染色质构本身是动态的,并且DNA与非组蛋白相互作用常是瞬时的。因此极有必要发展一种方法,能够研究生理状态下DNA与蛋白质的结合,避免DNA结合蛋白在染色质 ...

最近有不少战友在做ChIP实验，希望我的一点经验对大家有帮助（本贴不谈实验步骤，最后我会附件一份说明书，有详细步骤，另外建议像我一样的新手用试剂盒，避免不必要的麻烦）一、原理转录从基因的启动子区开始，由一系列的转录因子结合到基因的启动子区，通用转录因子结合在基本启动子区起始转录，而这个过程对基因的转录是必需的，但不是充分的，通常需要一些特异的转录因子结合在上游调节序列，使基因特异表达并维持的合适水平，ChIP主 ...

引言本实验所用基因传递系统（基因枪）原理： 低压基因递送系统（GDS-80基因枪 U.S. Patent Number: 6,436,709 B1），根据火箭喷嘴原理和空气动力学原理设计，是用于传递生物微粒进入靶细胞的一种新型系统。如图1中所示，当左侧出现输入气体压力时（如：氦气），两个腔室之间将形成巨大的压力差，一旦该气体穿过装载样品的咽喉处，GDS-80中的气体输出将为生物粒子提供足够的动能量，使它们加速到接近超音速的速度（约300m/s）。 ...

Joy Aho1, Michael O’Connor2, Elizabeth Hughes3, Thom Saunders3, Electra Coucouvanis1, and Jessie Ni1摘要在转基因和敲除研究中，维持多能性对利用小鼠胚胎干(ES)细胞至关重要。已经发现许多因子可以影响ES细胞的多能性,其中之一就表现在白血病抑制因子（LIF）对ES细胞培养的影响。关于抑瘤素M（OSM）能补偿LIF在ES细胞培养中的作用，对此存在不一致的报道。一些研究 ...

第十四章　基因治疗 　　基因治疗（gene therapy）是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中，使外源基因制造的产物能治疗某种疾病。从广义说，基因治疗还可包括从DNA水平采取的治疗某些疾病的措施和新技术。例如，有人用5-氮胞苷（5-azocytidine）治疗镰形细胞贫血和β-地中海贫血，目的是使5-氮胞苷抑制甲基化酶 ...

第十三章　基因诊断 　　长期以来，单基因遗传病的诊断主要靠临床观察和系列化学检查，但生化学检查要求有相应基因表达产物的体液或细胞，并对基因产物或代谢异常机理有所了解，但对绝大多数遗传病而言，目前还远未达到这种认识。 　　理想的诊断方法是对患者基因或DNA本身直接进行分析，因为这种分析摆脱了上述各种限制。机体各种组织的核细胞均有全套基因组DNA，都可以作为分析的材料，而不必考虑表达问题。例如，淋巴细胞、皮肤细胞、绒毛细胞均可用来分析 ...

第十二章　遗传咨询 　　遗传咨询（genetic counseling）是通过咨询医生（counselor）与咨询者（counselee）共同商讨咨询者提出的各种遗传学问题和在医生指导帮助下合理解决这些问题的全过程。在这一过程中，需要解答遗传患者或其亲属提出的有关遗传病病因、遗传方式、诊断、预防、治疗、预后等问题，估计亲属或再生育时该病的再发风险（率）（recurrent risk ）或患病风险，提出可以选择的各种处理方案，供咨询者作决策 ...

第十一章　遗传病的防治 　　降低人口数量，提高人口质量是我国的一项基本国策，也是实行计划生育的主要要求。积极采取优生措施，贯彻优生法规，努力防治遗传病，则是达到上述目标必由之路。 第一节　优生学 　　优生学（eugenics）是研究使用遗传学的原理和方法以改善人类遗传素质的科学，而与此有关的优境学（erthenics）则是研究用改善环境因素的方法来提高后代身心健康的科学。现在提倡的围产医学、优育、优教就是优境学的体现。这两门学科服从于同一目 ...

第十章　遗传病的诊断 　　遗传病的诊断（diagnosis of hereditary disease）可分为产前诊断、症状前诊断和现症病人诊断三种类型。遗传病的确诊是开展遗传咨询和防治工作的基础。遗传病诊断方法有普遍性诊断原则，又有遗传学的特殊诊断手段。普遍性诊断原则是与诊断一般疾病相同的方法，即通过对病史、症状、体征、实验室检查和其他诊断技术所获得的资料进行归纳分析，同时排除拟诊疾病，然后确立诊断。但由于遗传病种类繁多，特殊的病因 ...

第九章　肿瘤与遗传 　　在人们生活的环境中存着不少物理的、化学的和生物的致癌因子，它们在一定条件下可以诱发肿瘤。例如，各种电离辐射和紫外线照射可以引起白血病和皮肤癌；多环芳烃化合物如3，4－苯并芘可以引起肺癌，黄曲霉素可以诱发肝癌；亚硝受可以引起各种消化道肿瘤；在生物因子中，已经证明某些病毒可以引起动物肿瘤，并与一些人类肿瘤如鼻咽癌、白血病密切有关。这些因子是通过引起基因异常而致瘤的。 　　但是尽管人们都接触各种致癌因子，却远非人人 ...

第八章　药物遗传学 　　药物遗传学（pharmacogenetics）是生化遗传学的一个分支学科，它研究遗传因素对药物代谢动力学的影响，尤其是在发生异常药物反应中的作用。 　　临床医生在使用某些药物时，必须遵循因人而异的用药原则。因为在群体中，不同个体对某一药物可能产生不同的反应，甚至可能出现严重的不良副作用，这种现象称为个体对药物的特应性（idiosyncracy）。特应性产生的原因相当部分取决于个体的遗传背景。 　　众所周知，药物在体 ...

第七章　基因定位 　　基因组是生物的生殖细胞中所含全部基因的总和。人类基因组具有极其复杂的结构，其编码蛋白质的结构基因大约有100 000个，每个单倍体DNA含有3.2×109 bp，分布在24条常染色体和X，Y性染色体上。此外，还含有大量的非编码的重复DNA序列。基因定位（gene location）是用一定的方法将基因确定到染色体的实际位置。这是现代遗传学的重要研究内容之一。将不同的基因确定于染色体的具体位置之后，即可绘制出基因图（ ...

第六章　群体遗传学 　　群体（popualtion）是指同一物种生活于某一地区并能相互杂交的个体群。人种大约50多亿的成员分为许多不同的亚群体，其中最大的通常称为种族（races）。不同的群体,作为大群体其基因库也是彼此不同的。人类有三个主要人种区分：高加索人．黑人各亚细亚人，但他们又都有许多遗传上不同的亚群，种与亚群体存在主要差异的遗传基础是突变。 　　群体遗传学（population genetics）是研究群体的遗传变化规律的学科 ...

第五章　多基因病 第一节　多基因遗传与数量遗传 　　多基因遗传（polygenic inheritance）是指生物和人类的许多表型性状由不同座位的较多基因协同决定，而非单一基因的作用，因而呈现数量变化的特征，故又称为数量性状遗传。多基因遗传时，每对基因的性状效应是微小的，故称微效基因（minor gene），但不同微效基因又称为累加基因（additive gene）。多基因遗传性状除受微效累加基因作用外，还受环境因素的影响，因而是两因素结合形 ...

第四章　单基因病 第一节　单基因病的遗传方式 　　单基因遗传病简称单基因病（monogenic disease;single gene disorder）是指单一基因突变引起的疾病，符合孟德尔遗传方式，所以称为孟德尔式遗传病。 　　由于人类病症和性状不能如动物或植物那样通过杂交试验研究其遗传规律，因而必须采取适合于人类特点的研究方法。家系调查和系谱分析是判断某种遗传病遗传方式最常用的方法。系谱分析（pedigree analysis）是指将调查某患者 ...