微生物学技术

组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点：　　（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。　　（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。　　（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。　　（4）从组织中难于提纯抗原性物质，所以制备的免疫血清 ...

1．培养细胞到对数生长期（约107细胞/ml）。2．直接取0.1ml甲醛加到含有1ml培养物的离心管中固定细胞（甲醛浓度为3.7％；标准母液是37％）。3．在甲醛中培养细胞30分钟或稍长时间。4．用PBS洗两次，离心5分钟收集细胞。5．用50μl的PBS悬浮细胞，加5个单位的罗丹明或荧光素连接的鬼笔环肽。6．用PBS洗3次，重新悬浮在小体积的封固剂中。7．用罗丹明或荧光素滤片观察。 ...

　　（一）直接法　　1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。　　2．洗片 　倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次，搅拌，每次5min，再用蒸馏水洗1min，除去盐结晶。　　3．用50%缓冲（0.5mol/ ...

消除荧光抗体非特异性染色的方法应根据产生的原因采取适当的方法，常用的方法有以下几种：　　（1）动物脏器粉末吸收法　　常用肝粉（猪、大白鼠或小白鼠），其次是骨髓粉、鼠脑粉和鸡胚粉等。每毫升荧光抗体中加入肝粉50～100mg在离心管中充分混匀，在室温中振动2h，4℃中过夜，再搅拌10min，高速离心（3000～15000r/min）30min，1～2次后，即可使用其上清液。吸收一般应在临用前进行，吸收 ...

　 时间分辨荧光分析法（Time resolved fluoroisnmunoassayTRFIA）是近十年发展起来的一测微量分析方法，是目前最灵敏的微量分析技术其灵敏度高达10-19，较放射免疫分析（RIA）高出3个数量级。　　时间分辨荧光分析法（TRFIA）实际上是在荧光分析（FIA）的基础上发展起来的，它是一种特殊的荧光分析。荧光分析的利用了荧光的波长与其激发波长的巨大差异克服了普通紫外－ ...

1）核DNA和线粒体DNA1．当细胞培养到约107细胞/ml时，离心（5秒）收集细胞，再悬浮在70％乙醇中。2．固定5分钟或5分钟以上，用水洗2次。3．将细胞悬浮在含有50ng/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚的封固剂中。1mg/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚母液可在－20℃下贮存。4．用紫外滤片观察。 2）线粒体1．在生长培养基中培养细胞达到约107细胞/ml时，加入100ng/ml 3，3’ ...

石蜡组织切片的HE染色1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。3．苏木素染色5min，自来水冲洗。4．盐酸乙醇分化30s（提插数下）。5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。6．置伊红液 ...

1.菌种制备：生产用的菌株、酵母菌：通化葡萄酒酵母；乳酸菌：1.151乳酸菌。酵母菌培养温度28～30℃，培养时间20～24小时；乳酸菌培养温度28～30℃。培养时间39～48小时；混生菌：接种酵母菌约10%，乳酸菌约5%，常温培养20～24小时。2.发酵：(1)发酵液配料比为蔗糖4%，蜂蜜2%，糖精0.004%，焦糖1%，麸皮1%，酒花0.1%，柠檬酸0.0801%。(2)混合糖液的制备：将蔗糖 ...

　　1.菌落观察　　①取啤酒酵母、假酵母菌以三点点植法接种于麦芽汁平板培养基上，置于28～30℃下培养3天，形成菌落。　　②观察菌落表面、高度、边缘、质地和颜色等方面的特点。　　2.观察出芽生殖　　①在载玻片上滴1滴蒸馏水，挑取少量啤酒酵母放入蒸馏水中，盖好盖玻片，制成临时装片（注意不要产生气泡）。　　②观察菌体细胞的大小与出芽方式。　　3.观察子囊孢子　　①将面包酵母接种于麦芽汁液体培养基中，于 ...

疟原虫是疟疾的病原体。荧光寄生虫让研究人员得以实时观察疟原虫感染肝脏的过程。 即使科学家已经较为清楚地认识了疟疾的致病原理，但这种疾病仍然威胁着世界上大部分的人口。要直接观察到疟原虫是如何工作的，仍然有大量的问题需要仔细地回答。数十年来，活体显像一直是一项有用的研究工具。但直到最近，美国纽约大学的Ute Frevert才将这种技术用于疟原虫的研究。 荧光疟原虫――伯氏疟原虫(P. ...

　　单染色法可用于观察细菌的一般形态，其步骤为：涂片→固定→染色→冲洗→干燥→观察。　　涂片 在干净的载玻片的中央部位，滴一滴无菌水，然后以无菌操作方法，从斜面培养基上取出少量菌种，在载片上与水混合后，涂成均匀的菌掖，涂布面积不宜过大。　　固定 将载玻片在酒精灯火焰上迅速通过2～3次，使菌液干燥，将菌体固定在载玻片上，使其不易脱落。　　染色 取结晶紫染色液（或番红染色液、美蓝染色液），滴加在干燥的 ...

染色的基本原理　　微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化学因素的作用而进行的。物理因素如细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。化学因素则是根据细胞物质和染料的不同性质而发生地各种化学反应。酸性物质对于碱性染料较易吸附，且吸附作用稳固；同样，碱性物质对酸性染料较易于吸附。如酸性物质细胞核对于碱性染料就有化学亲和力，易于吸附。但是，要使酸性物质染上酸性材料，必须把它们的物理形式加以改变（ ...

　　一种由斜面菌种接种到液体培养基中的方法。接种方法与斜面接种法相同，但手持试管时，应使试管略向上斜，以免培养基流出。　　将带有菌种的接种针送入液体培养基时，可使针头部分在液体表面与管壁接触的部位轻轻摩擦。接种后，塞上棉塞，烧灼接种针。最后将试管在手掌上轻轻打动，使菌体在培养基中均匀散开。 ...

　　(1)菌落观察。观察不同细菌生成菌落的形态特点。观察内容主要有大小、形状、表面、质地和颜色等方面。其中，菌落的大小可量取其直径；形状指圆形或不规则形等；表面指凸起或平展、有无光泽以及是否光滑等；质地指粘、脆而言，可用接种针挑取菌落，试验是否容易挑取。　　(2)个体形态观察。将菌种进行革兰氏染色，然后在显微镜油镜头下观察。观察内容主要有以下3个方面：　　①区别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌；　　②观 ...

　　①取1克土样，在火焰旁放入装有99毫克无菌水的锥形瓶内，充分摇匀，将菌分散。　　②用移液管吸取上述菌悬液1毫升，放入盛有9毫升无菌水的试管中，并进一步稀释成1000倍，即10-3的菌悬液。按10倍稀释法连续稀释到10-8（每1次稀释，都须更换移液管）。　　③取3支1毫升移液管分别从10-8、10-7、10-6菌悬液中吸取1毫升菌悬液，分别注入编号10-8、10-7和10-6的培养皿内，同一稀释 ...

　　①取1克土样，在火焰旁加进装有99毫升无菌水的锥形瓶中，堵塞棉塞，制成菌悬液待用。　　②取一培养皿置于实验台上，左手将培养皿打开稍许，向培养皿内注入熔化的营养固体培养基10～12毫升，轻轻转动培养皿，使其中的培养基分布均匀，平放桌上，使其凝成平板。然后在皿底用蜡笔划分A、B、C、D几个区。应连续制作几份平板培养基。　　③将培养皿底部用姆指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养皿稍微打开。在此同 ...

　　①制作高氏一号培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。　　②称取土壤10克，放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制细菌生长。振荡10分钟，制成10-1菌悬液。按照连续稀释分离法，进一步制成10-3菌悬液。　　③用移液管吸取0.1毫升10-3菌悬液，注入平板培养基上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。然后将培养皿倒置于25～30℃温箱中，培养7～10天，培 ...

　　①制作豆芽汗葡萄糖培养基，并添加80%乳酸数滴，以抑制细菌生长。将培养皿中，凝成平板，待用。　　②称取10克土壤，按上述分离放线菌的方法制成10-4或10-5的菌悬液。　　③取0.1毫升菌悬液注入培养皿内培养基上，用玻璃刮刀涂抹均匀。然后将培养皿倒置于25～30℃温箱内培养3～4天。培养基上会出现微生物菌落。霉菌菌落常长成绒状、棉絮状或蜘蛛网状，可根据这一特征寻找霉菌菌落。　　④挑取培养皿内的 ...

　　1.营养肉汤培养基　　牛肉膏 0.3克　　蛋白胨 1.0克　　NaCl 0.5克　　水 100毫升　　pH 7.0～7.2　　在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。　　2.营养琼脂培养基　　在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。　　3.肉汁蛋白胨液体培养基　　牛肉 500克　　蛋白胨 ...

　　将微生物从一个斜面培养基接种至另一个斜面培养基上的方法，称为斜面接种法。其方法步骤如下：　　首先，点燃酒精灯。将菌种和斜面培养基的两只试管平行放在左手上，用拇指与其它四指夹住，并使中指位于两试管之间，两试管的管口齐平。　　其次，用右手先将棉塞拧转松动，并稍拉出一些，以利接种时拔出。　　第三，右手持接种针，在酒精灯将针凡糠稚蘸烀鹁。针头以上凡是接种时可能进入试管的部分，均应用火灼烧。　　以下操作 ...