微生物学技术

一、技术背景： Adeasy 系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1，使之成为较为安全、高效的病毒载体。利用带有E1 基因的293 细胞作为包装细胞，通过倍比扩增，富集病毒颗粒，并通过CsCl 梯度离心，透析进行分离纯化。对绝大多数的细胞株可以达到近乎100％的感染效率。但需要指出的是Adeasy 同样具有所有病毒载体或转染试剂都不可避免的细胞毒 ...

1. 应该在细胞状态最好的时候，进行病毒接种或复苏； 2. 接种前头天，进行细胞传代，细胞数量应以能让细胞在第二天内达到覆盖满90%的培养瓶为准，并且一定要在细胞传代后48h内接种病毒； 3. 第二天细胞长为单层且状态较好时，开始接种病毒； 4. 先移弃培养瓶中的生长液，用undefinedPBS轻轻洗细胞面3次，最后用移液管吸干净培养瓶中残留的undefinedPBS。为保持培养瓶中pH环境的稳定，及减少undefinedPBS对细胞 ...

试剂： RNA提取缓冲液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100 mM Tris-HCl（pH8.0DEPC处理的水配置），25mM EDTA 0.5g/L 亚精胺Spermidine，2.0M NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC 处理的水配制 ...

Introduction: The phage lysate from the plate contains bacterial DNA and RNA as well as phage DNA encased in the phage coat. The following procedure digests bacterial RNA and DNA precipitates the pha ...

1. suspend a single plaque in 1 ml PSB2. adsorb 10 min at 37°C: 0.1 ml eluted phagundefined/0.1 ml MgCa/0.1 ml saturated K802 culture grown in NZY broth/0.2% maltoseuse 10 ml of this to inoculate 2.5 ml ...

Inoculate 5 ml of lambda-broth in a glass culture tube with a single colony of an appropriate host strain of E. coli. Incubate the culture on a roller at 37°C overnight. Transfer the culture to ...

1. Grow a fresh overnight culture of lambda host cells (we use K803 for EMBL3) in LB or T-broth fortified with 10mM Mg++ .2. Mix a small amount (1 to 20μl aim for an M.O.I. of +0.01) of high titer ...

Purpose: Mini-prep method for lambda phage DNA purification from lysates. Time required: 4 hours once the lysate is in hand Special supplies required: BioRad Econo Columns (Cat.# 731-1550) Whatman ...

一. 液体培养法 1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养16~24小时 2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合，静置15分钟使其感染。 3. 将混合液接至含10 ml新鲜液体培养基的试管中，于适当温度下振荡培养约8~24小时，培养时间依噬菌体之不同而异。 4. 将培养液移入离心管中，以10000 rpm (5000 g)离心10分钟 ...

材料： 1. 缓冲液和溶液：氯仿；NaCl（固体）；聚乙二醇（PEG 8000）；SM 2. 酶和缓冲液：胰Dnase I (1mg/ml)；胰Dnase I (1mg/ml)于TE中（ph7.6） 3. 离心机和转子：Sorvall GSA 转子或相当型号 4. 专用设备：量筒（2L） 5. 载体和菌株：大肠杆菌培养物，经λ噬菌体感染和裂解 方法： 用PEG沉淀噬菌体 ...

一、目的： 1. 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。 2. 学会检查噬菌体的方法。 3. 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。 二、原理： 噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清，或在含有 ...

材料： LB或NZCYM顶层琼脂或琼脂糖，含有X-gal。对于3ml顶层琼脂，加40ul 2%X-gal。X-gal要在临用前才加入已冷却的顶层琼脂（47℃）中。 大肠杆菌铺平板细菌。只有不是β-半乳糖苷酶的过量表达株，可采用任何支持特异性λ噬菌体裂解生长的大肠杆菌。细菌染色体上单拷贝lacZ基因的存在不影响噬菌斑的检测。 方法： 1. 将λ噬菌 ...

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种，它需要相对较长的孵育时间，所以称之为“慢”病毒，Lenti在拉丁文中就是慢的意思。它包括HIV（人免疫缺陷病毒）、FIV（猫免疫缺陷病毒）、猿免疫缺陷病毒（SIV）、牛免疫缺陷病毒等。其中研究最多的是HIV-1慢病毒。 慢病毒载体（Lentivirus vector）是以慢病毒基因组为基础，由所需的目的基因取代部分基因构建 ...

本文由丁香园站友 nndmx转载，点此查看详情 美国研究人员新发现一种能从猴子传染给人的腺病毒，并且在跨物种传染后还能在人与人之间传播。这是首次发现能由动物传染给人的腺病毒，研究人员认为目前它在人群中的传播能力不强，不必担心会引发大规模传染病疫情。 腺病毒是一类常见的DNA病毒的总称，这些病毒有的会感染人体，导致呼吸道感染、眼部感染等疾病；有的会导致牛、狗、猪等动物发病。人们此前认为 ...

常用的细菌培养基培养的方法 配方一 牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏0.3克 ，蛋白胨1.0克，氯化钠 0.5克，琼脂 1.5克， 水 100毫升 在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6分装在各个试管里，加棉花塞，用高压 ...

据美国物理学家组织网6月13日报道，美国普林斯顿大学和法国艾克斯―马赛大学科研人员合作，在原核生物体内发现了之前只在高等生物细胞中存在的一种分子机器，细菌不仅可用它在细胞内运输蛋白质，还能靠它在物体表面滑行。研究人员表示，该发现将从根本上转变人们对原核生物细胞内组织系统的理解。相关论文发表在《美国国家科学院院刊》上。 原核生物是一种单细胞有机物，其细胞核没有膜层包裹，是最原始的生命形式。研究人员 ...

本文由丁香园站友 PRESS转载，点此查看详情 这一研究具有重大政策含义，凸显早期治疗重要意义 抗逆转录病毒药可大幅降低艾滋病病毒传染率。 一项由多国科学家参与的研究发现，艾滋病病毒（HIV）感染者如果在患病初期就接受抗逆转录病毒（ARV）治疗，则可以将病毒传染给性伴侣的几率减少96%。美国国家过敏与传染病研究所（NIAID）所长Anthony Fauci表示，这一研究结果有着重大的政策含义，同 ...

科学家表示，细菌将人类分为三种 在20世纪初，科学家发现人类的血液类型可分为四种，每个人必属其中之一。如今科学家又发现了一种给人分类的方法：细菌。每个人体内都有成千上万种不同的细菌，然而最近一个科学家小组宣布，在他们研究的人群里，有三种截然不同的生态环境存在于消化道中。 “这是一个重要的进步。这是我们首 ...

细菌生物膜会引起尿道炎、前列腺炎、肾结石、中耳炎、龋齿、牙周炎、口臭等多种疾病，它们往往会反复发作，极难彻底治愈。 “只要条件适宜，任何细菌均可形成生物膜，而至今尚无药物能有效防治此类感染。”近日，由华西口腔医学院口腔疾病研究国家重点实验室举办的“2011年国际微生物生物膜学术研讨会”召开，大会执行主席、微生物学家施文元接受了《科学时报》采访。 在 ...

本文由丁香园站友 迎进 转载并编译，点此查看详情 我们每个人的都携带着大量独特的肠道微生物，他们可以帮助我们来分解我们自身不能消化的食物。 人类和他们自身携带的微生物在一般情况下都会保持一个良好的关系，但是消化道里面微生物构成的变化与肥胖、营养不良、Crohn病等其他疾病有关。 位于路易斯的华盛顿大学医学院的研究人员通过实验显示他们可以培养出针对个人的肠道并挑选出感兴趣的那部分微生物。这项研究为 ...