微生物学技术

痛、痒觉均为负面躯体感觉，有利于机体规避利器、高温、过敏原等刺激引起的进一步伤害。不同的是，痛觉刺激会引起即时的疼痛感以及反射性躲避行为，而痒觉刺激会引起诸如月之盈虚的消长感觉以及无时间精确性的抓挠行为。神经生物学相关研究表明，外周神经系统中痛、痒觉感受器的激活可将痛、痒觉信息传递至脊髓背角。其中急性痛刺激的反应主要依赖于脊髓谷氨酸能神经元的快速兴奋，而痒觉信号传递主要依赖于神经肽释放，如：痒觉感受器表达的B型 ...

“脑卒中”（cerebral stroke）又称“中风”、“脑血管意外”（cerebralvascular accident，CVA）。是一种急性脑血管疾病，是由于脑部血管突然破裂或因血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起脑组织损伤的一组疾病。脑卒中具有发病率高、死亡率高和致残率高的特点，其症状表现为视觉障碍、语言障碍、运动障碍、感觉运动障碍、记忆障碍、意识障碍等。脑卒中包括缺血性和出血性卒中。缺血性卒中的发病率高于出血性卒中，占脑 ...

CRlSPR/Cas9是细菌和古生物菌用来抵抗外来质粒或噬菌体等遗传物质入侵的一种获得性免疫系统。利用CRlSPR/Cas9技术建立哺乳动物全基因组突变库或者与某类功能相关的基因突变体库，通过功能性筛选和富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析，发掘与筛选表型相关的基因，称为CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选。gRNA文库是药物筛选或靶向筛选特定通路的理想工具，gRNA文库的建立将在功能基因筛选、疾病机制研 ...

1.常用载体分类：2,常用载体元件介绍：(1) 启动子：启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。启动子主要分为广谱启动子和特异性启动子。广谱启动子为在各种组织、细胞上广泛表达的启动子；特异性启动子为在特异性组织或者细胞类型上表达的启动子。常用广谱启动子有CAG，CMV，EF1a，PGK等，还包含启动RNA的III型启动子U6和H1启动子；常用特异性 ...

2020 年 10 月 21 日，武汉大学章晓联、殷雷老师作为共同通讯作者在 Science Advances 在线发表研究成果 “Mycobacterial EST12 activates a RACK1–NLRP3–gasdermin D pyroptosis–IL-1β immune pathway”，该研究鉴定了一种从M. tbH37Rv 分泌的细胞焦亡诱导蛋白 EST12（Rv1579c）。导读：细胞焦亡是一种程序性细胞死亡的炎性形式，与消除病原体感染有关。该文章介绍了一种诱导巨 ...

1.病毒载体可以进行哪些方面的基因操作？基因功能研究主要涉及功能获得和功能缺失，功能获得主要包括外源的过表达，内源性激活，功能缺失主要包括基因干扰和敲除等。借助病毒载体可以进行基因过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作，其中基因包括编码基因和非编码基因。2 .不同基因调控方式的原理外源过表达：基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程，其基本原理是将目的基因 ...

1. 病毒载体可以进行哪些方面的基因操作？基因功能研究主要涉及功能获得和功能缺失，功能获得主要包括外源的过表达，内源性激活，功能缺失主要包括基因干扰和敲除等。借助病毒载体可以进行基因过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作，其中基因包括编码基因和非编码基因。2 不同基因调控方式的原理外源过表达：基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程，其基本原理是将目的基因构建 ...

支原体基本知识和检测方法：支原体培养技术！

鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames 试验，Salmonella Typhimurium / Reverse Mutation Assay）于 1975 年建立并不断发展完善，目前已被世界各国广为采用，已经成为毒理学实验室必需开展的重要实验项目。Ames 实验用于检测待分析物质的致突变作用，该验灵敏、高效、检测范围广。 Ames 试验原理Ames 试验利用鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株，该缺陷型菌株不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅少数自发回复 ...

管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。其中，芽孢悬液的制备就有很多需要注意的地方。在用管碟法检定抗生素时，需要将菌悬液与培养基混合均匀、覆盖在底层培养基上，以形成抑菌圈。其中，对于菌悬液的制备要求为：将所用菌的斜面培养物用 1～2 ml 灭菌水洗下，形 ...

一、试验原理：石蕊既是 pH 指示剂，又是氧化还原指示剂，在酸性溶液（pH 4.5）呈红色，在碱性（pH 8.3）呈蓝色，培养基本色应为紫蓝色（pH 6.8）。石蕊又可被某些细菌还原成无色母体。牛奶含有乳糖和三种主要蛋白质，即酪蛋白、乳蛋白和乳球蛋白。引起牛奶凝固主要是细菌含有凝乳酶，它可使酪蛋白转化成副酪蛋白，或因乳糖发酵产生大量酸使酪蛋白沉淀所致。有些细菌产生脂酶，可分解牛奶中的脂肪，形成黄色透明液体。有些细菌具有酪蛋白水解酶，可催化酪蛋 ...

传染性皮下及造血组织坏死病毒（Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus，IHHNV）属细小病毒科，病毒粒子直径约20纳米，单链DNA，该病毒感染外胚层组织，如鳃、表皮、前后肠上皮细胞、神经索和神经节，以及中胚层器官，如造血组织、触角腺、性腺、淋巴器官、结缔组织和横纹肌，在宿主细胞核内形成包涵体。对虾传染性皮下及造血组织坏死病，又名慢性矮小残缺综合征（runt-defor ...

孟加拉红培养基是食品中用来检测霉菌和酵母菌总数的一种培养基，因其中含有氯霉素，可抑制绝大部分细菌的繁殖，但不会对真菌产生抑制，因此用来计数霉菌和酵母菌是很合适的。那么经过培养后怎么来区分培养基上的霉菌和酵母菌呢？如果检测时用的是涂布法来计数，那么酵母菌培养 48 小时会形成粉红色、圆形凸起的菌落，许多菌株打开培养皿盖还会有淡淡的香气，有的酵母菌培养超过 5 天后会在其边缘长出「丝状物」，这时不要误认为是霉菌，可以染色镜检观察一 ...

一、微生物分类：专性需氧菌：必须在有氧气的条件下才能生长，包括大多数细菌、放线菌和真菌。微需氧菌：只能在较低的氧含量下正常生长（大气中氧含量通常为 20~21%，而微需氧菌生存环境的氧含量一般为 2~10%），如发酵单胞菌属和弯曲杆菌属等。兼性厌氧菌：在有氧或无氧条件下均能生长，分别进行有氧呼吸和无氧呼吸，但有氧的条件下生长得更好。许多肠道细菌如大肠杆菌及真菌中的酵母菌等均属此类。耐氧厌氧菌：能在有氧气的条件下进行厌氧生长的厌 ...

一、作用：硫乙醇酸盐流体培养基主要用于培养需氧、厌氧和微需氧微生物，是培养厌氧菌的首选培养基。该培养基在药典中一直被用作无菌检查培养基，具有重要的作用。二、原理：硫乙醇酸盐流体培养基的主要成分：胰酪蛋白胨、酵母浸出粉、葡萄糖、氯化钠、 L-胱氨酸（半胱氨酸盐酸盐）、硫乙醇酸钠（硫乙醇酸 0.6 mL）、琼脂、刃天青等。其中胰酪蛋白胨、酵母浸出粉提供氮源以及供合成蛋白质必须的各种氨基酸和生长因子，葡萄糖提供碳源及能源；氯化钠维持均衡的渗 ...

支原体问题一、简介：支原体的大小为 0.1～0.3um，可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小（直径 0.1-1.0 mm），在固体培养基表面呈特有的"油煎蛋"状。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。革兰氏染色不易着色，故常用 Giemsa 染色法将其染成淡紫色。细胞膜中胆固醇含量较多，约占 36%，对保持细胞膜的完整性具有一定作用。细胞膜含甾醇，比其他原核生物的膜更坚韧。凡能作用于 ...

实验简介自然水体中病毒、细菌的含量通常可作为水质的评判指标。近年来，借助流式细胞仪对自然水样进行病毒、细菌的鉴别与计数已经成为很多科研工作者研究的热点。本实验用核酸染料 SYBR green I 对自然水样进行染色，借助 CytoFLEX 流式细胞仪检测，区分水体中所含的病毒与细菌，与传统的显微镜计数及平板菌落计数法等相比，具有速度快，操作简便，结果准确的优点。材料与方法▶ 试剂▶ 样品制备Sample Type自然水体SpeciesAge of spe ...

概述肠球菌属（Enterococcus）细菌域，厚壁门，芽孢杆菌纲，乳杆菌目，肠球菌科；在环境中广泛存在（土壤、水、植物、动物）；人类胃肠道和女性的生殖道；不同种类的肠球菌的流行取决于宿主的不同，也受年龄、饮食和其他生理条件有关的因素影响。流行病学肠球菌是内源性和外源性医院感染的第三大病原菌（检出率仅次于金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌）肠球菌所致院内感染绝大多数为尿路感染（有资料统计，在引起尿路感染的致病菌中，肠球菌感染 ...

「菌落总数」是评价食品卫生质量的重要指标，其检测工作在某种程度上具有相当的不可比性，这就要求检测人员要严格执行科学的操作程序。国家标准GB/T4789.2 中只是简要提到了检测程序，对实际操作过程中容易出现的问题未作详细说明。本人通过实践及多次对比试验，现就检测中容易出现的问题，作一阐述。样品的制备和稀释倍数的选择对于冰冻的样品，在接种前要放到0~4℃的冰箱中解冻。固体样品要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料并混合 ...

1 设备与材料1.1 低温冰箱：-70℃1.2 高压灭菌器。1.3 多孔玻璃珠（或素烧瓷珠）：直径2~3 mm。1.4 商业化细胞冻存管（可选）。2 操作步骤2.1 将直径为2-3 mm 的瓷珠分装到小螺旋帽瓶中（每瓶最多装30 粒）制成冷冻管，高压灭菌。2.2 标记冷冻管。2.3 在无菌状态下打开冷冻管。2.4 在所保藏菌种的最适营养条件下将细胞培养至稳定期或成熟期，进行纯度检查后，将菌株新鲜培养物加入到培养基中制成混悬液，无菌操作将混悬液转入到冷冻管中。2.5 封好冷冻管并颠倒四至五 ...