免疫学技术

主要组织相容性复合体-遗传学及其在移植中的作用

主要组织相容性复合体-遗传学及其在移植中的作用

ELISA 是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其诸多优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。ELISA 的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。

组织在制作过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述的问题，利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。

一、免疫标记法及其分类 1.荧光免疫法 原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。 以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体。除去未结合抗体，然后加受检标本，使其中的蛋白抗原与固相抗体形成 ...

有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径以及采取合适的免疫方法，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体

Discovery推出：认识细菌。介绍地球最古老的独立生存生物-细菌。细菌有好有坏，且亦好亦坏，在波湾战争期间，海珊利用肉毒杆菌制造出威力惊人的生物武器，然而经过多年的研究，由于适量的毒菌能痲痹肌肉，故被使用于治疗痉挛性斜颈与整形除皱上。自古以来，病菌危害人类已久，包括著名的鼠疫、肺结核等，皆让当时的医师束手无策，于是一些对抗细菌的药物相继研发出，如盘尼西林与抗生素，并成功地拯救无数的生命。但细菌内存的基因信息，却能传送新DNA予其它细菌，演化成为抗药性细菌，抗菌药物因而失效，于是人类与细菌又将展开一场生死决斗。

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创建重链改组噬菌体文库：配制50ul PCR反应混合液，包含：Vent聚合酶缓冲液，VentDNA聚合酶。

人VL基因文库的构建：器材和试剂：PCR试剂和设备，cFv基因文库单链模板DNA,制备自pHENl中的天然scFv文库（10ng/u1），Gelleclean试剂盒。

创建轻链改组噬菌体文库：PCR试剂和设备，含有起始scFV基因的载体pHENl单链模板DNA。

平衡法选择高亲和力噬菌体抗体：器材和试剂:链霉亲和素磁珠,磁性1.5ml试管架。

筛选解离速率优化的scFv：选择3~5轮后，随机挑取克隆加入96孔微量滴定板中 并诱导表达可溶性scFv.然后，在包被有相关抗原的96孔微量滴定板中，用ELISA分析含有可溶性scFv的细菌上清。

原位免疫PCR的IHC增敏方法：Sano等（1992）率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功，建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统，利用细胞工程和基因工程技术，巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合，通过构建单克隆抗体与重组核酸的嵌合体分子，使得利用PCR技术检测蛋白成为可能。

滚动式循环放大法IHC增敏方法：滚动式循环放大（RCA）法是一种能够在恒温条件下，使标记有寡核苷酸探针（与组织细胞内的核苷酸无相关性）的抗体（特异性一抗或第二抗）与组织细胞内的抗原结合后，在DNA聚合酶的作用下，加入的寡核苷酸进行循环扩增，产生一条扩增的DNA序列拷贝产物。

白磷还原法制备胶体金分散颗粒：胶体金可用多种方法制备，其中应用较为广泛的是化学还原法。这一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原为金原子，可用于制备胶体金的还原剂有50余种，但在生物医学领域内最为常用的还原剂是白磷、柠檬酸三钠以及鞣酸等。

制备胶体金分散颗粒的其他方法：乙醇-超声波还原法（Baigent和Muller,1980），硼氢化钠还原法（Tschopp等，1982），放射性胶体金制备法（Kent等，1981）