免疫学技术

一、找到一个“CT Gene Datebases”：http://www.cancerimmunity.org/CTdatabase/CTinfo.php?CTid=NY-ESO-1，在“Protein Information”中选择“SwissProt”进入：http://www.expasy.org/cgi-bin/niceprot.pl?P78358，找到NY-ESO-1全长氨基酸序列为：M ...

促进抗体产生的抗原辅助剂。 又称非特异性免疫增生剂。本身不具抗原性但同抗原一起或预先注射到机体内能增强免疫原性（见抗原）或改变免疫反应类型。 种类很多，目前尚无统一的分类方法，常用的佐剂可分为4类：无机佐剂，如氢氧化铝，明矾等；有机佐剂，微生物及其产物如分枝杆菌（结核杆菌、卡介苗）、短小杆菌、百日咳杆菌、内毒素、细菌提取物（胞壁酰二肽）等；合成佐剂，如人工合成的双链多聚核苷酸（双链多聚腺苷酸、尿苷 ...

ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。现将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。 ...

间接法（测抗体） 双抗体夹心法（测抗原） 竞争法（测抗原） 抑制性测定法 1 包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度（5～20μg/ml ...

基本原理　　经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞，而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色，且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根据细胞膜完整性将细胞分为“活细胞”和“死细胞”，因此正常细胞和凋亡细胞归为活细胞。活细胞染料如Hoec ...

流式细胞仪血小板分析应用范围通过分析信号传递、细胞骨架结构、颗粒释放、糖蛋白构形、膜磷脂、与抗凝因子的结合和微粒形成，分析血小板活化，血小板对刺激物的反应性 通过分析受激后表面结合蛋白触发凝血链式反应和表面糖蛋白缺陷检测，分析血小板止血功能的获得性和遗传性缺陷 结合血小板大小，检测血小板RNA含量，分析血小板成熟度，计数网织血小板 发现血小板抗体，做定性和定量分析 血小板分析的临床应用血小板活化 ...

流式细胞计的基本结构流式细胞计主要由四部分组成。它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。　　（1）流动室和液流系统：流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是 ...

一、如何搭配流式抗体荧光标记流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道需要同时检测检测多少个指标厂家的抗体有多少种荧光标记如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多A、 如何根据流式细胞仪搭配流式抗体1） BD流式细胞仪（06版目录第614页）BD流式试剂选择及应用的相关问答与简介流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的 ...

Blotting总结（Western、Southern、Northern、Eastern、Southwestern blotting、Far-Western blotting ）印迹（blotting）是生物学实验中常用的检测和分析方法。印迹（blotting）实验的过程可以简单描述为将待检测的生物大分子经电泳等方法分离后转移并固定在膜（如：硝酸纤维素膜、PVDF膜、尼龙膜）上，然后用特异性识别物 ...

应用Western Blotting的方法检测血清中某种蛋白的含量是最关键的问题是要将血清做怎样的电泳前处理.一般的处理方式:1. 常规分离血清即取血后常温放置使其凝固然后3000 rpm 15 min离心取上清即可。2. 测血清蛋白浓度。3. 用Laemmli buffer（蛋白裂解液）稀释至所需浓度，我一般为5ug/ul.4. 加入适量loading buff ...

一．配胶注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。分离胶及浓缩胶均可事先配好（除AP及TEMED外），过滤后作为储存液避光存放于4℃，可至少存放1个月，临用前取出室温平衡（否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡，有条件者可真空抽吸3分钟），加入10%AP（0.7~0.8:100 分离胶浓度越高AP浓度越低，15%的分离胶可 ...

站长注：磷酸化蛋白的Western Blotting检测是信号通路研究中的经典方法。细节决定成败，在科研中更是如此，本文详细讲述了实际操作过程中应该注意的事项，主创为园子里的llllcjchina站友，站长在此进一步整理总结，并对局部进行了修改，以更方便大家学习。1. 一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂（配方见后页），还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使ban ...

（一）母液 1. 1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g 蒸馏水 200ml 溶解后，用浓盐酸调pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。 PH HCl 7.4 约17ml 7.5

磁珠分选主要是利用与特异性抗体结合的磁珠结合具有特定表面标记(如cd分子)的细胞，达到获取或去除细胞的目的。具体步骤可以到厂家的网站下载主要采用的磁珠有三大厂家生产：1、Miltenyi Biotec唯一的微球50nm，很有实力，产品线很长，很多文献采用。公司网站: www.miltenyibiotec.com中文网站: http://www.ebiotrade.com/custom/ma ...

外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC)主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验最常用的细胞，也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。　　1．原理　　PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密度较大，为1.092左右；淋巴细胞和单核细胞的密度为1.076～1.090；血小板为1.030～1.035。因此，利用一种密度介于1.07 ...

本人没有做过组织的ELISA，我想问一下你是检测组织内的成分，还是研磨组织后包被反应板。就我的经验来看：如果是检测组织内的成分，建议采用pH在7左右离子强度不高的缓冲液研磨就可以，这样对结果不会产生太大影响。如果是采用研磨组织后包被，这要看你提取得成分在何种条件下能保持生物活性，建议用其保持生物活性最好的液体研磨，然后用pH9.6的碳酸盐缓冲液透析，如果可以对话，可直接用pH9.6的碳酸盐缓冲液。 ...

我用两个注射器进行等量抗原与弗氏不完全佐剂的乳化可是乳化了四个多小时后滴在冰水里还是很快扩散麻烦各位帮忙分析一下乳化失败的原因多谢!弗氏佐剂是目前动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂。上述佐剂经高 ...

　免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法，其基本原理是抗原抗体的特异性识别。酶联免疫吸附试验 （enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是实验室比较常用的免疫检测

免疫分子的命名根据不同的角度往往有不同的归类和命名，图3-3归纳了人白细胞分化抗原（CD）、粘附分子（AM）、免疫球蛋白超家族（IGSF）、细胞因子受体（CKR）、补体受体（CR）以及主要组织相容性复合体抗原（MHC）等免疫分子命名的相互关系。　　（1）A表示CD命名范围中的粘附分子，如CD49a/CD29、CD49b/CD29、CD49c/CD29、CD49d/CD29、CD49e/CD29、C ...

蛋白提取：１． 总蛋白提取（胞膜，胞浆，胞核）： 组织匀浆后15000g 4度 20分钟后取上清.Buffer:NP40 750ul 脱氧胆酸钠0.5克 SDS 0.1克 加undefinedPBS 至100ml. 再加入PMSF(7.4mg/ml) 0.1ml. (现用现加)7.4mg/ml PMSP异丙醇溶液: 取A mg PMSF 加 A/7.4 ml 异丙醇.工厂-20度储存２．组织膜蛋白提取：所在操作 ...