免疫学技术

相关专题 多姿多彩的琼脂 可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂凝胶内扩散，二者相遇，在比例合适处形成白色沉淀。基本类型有单向扩散和双向扩散两种。 (一)双向琼脂扩散试验(Double immunodiffusion test) 抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如两者相对应，浓度比例合适，则经一定时间后，在抗原、抗体孔之间出 ...

相关专题 多姿多彩的琼脂 原理 一种定量试验，将一定量的抗体混合于琼脂内，倾注于玻片上，凝固后，在琼脂层上打孔，再将抗原加入孔中，使其向四周扩散。抗原抗体复合物形成的沉淀环直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则未知标本中的抗原含量即可从标准曲线中求出。本试验主要用于检查标本中各种免疫球蛋白和血清IgG含量。 材料 ...

相关专题 多姿多彩的琼脂 又称圆筒平板法(cylinder plate method)。用于测定抗生素效价的生物学定量方法之一。标准的方法是以20毫升的琼胶培养基放入陪替氏培养皿内做成平面，上面加上预先培养的试验标准菌种，例如掺入了葡萄球菌的琼胶4毫升，而使之凝固，上面再放上一个外径8毫米的不锈钢圆筒，筒内倒满青霉素稀释液之后，在35—37℃ ...

相关专题 多姿多彩的琼脂 可溶性抗原与相应抗体持异性结合，两者比例适当并有电解质存在及一定的温度条件下，经一定的时间，可形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应 (precipitation ) 。沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等。与相应的抗体相比，抗原分子小 ( 琼脂扩散( agar diffusion )为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中 ...

相关专题 ELISA免疫实验技术 以已知抗体(抗HBs)包被载体，然后将含有抗原的待检标本加入，共同孵育后，抗原结合于包被抗体上，再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs)，酶标抗体连接到抗原上，最后加入底物溶液，根据颜色反应来判定抗原含量。 【材料】HBSAg试剂盒，本试剂盒含: 1、包被抗-HBs反应条 1瓶 2、酶结合物 1瓶 3、HBSA ...

相关专题 ELISA免疫实验技术 1.　ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液 ...

相关专题 ELISA免疫实验技术免疫试剂实验方法小结 ELISA实验原理 酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)原理 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)用于IgG定量测定 ...

相关专题 ELISA免疫实验技术 Elisa实验方法操作标准，用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清(浆)，有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注意收集 ...

相关专题 ELISA免疫实验技术 ELISA 试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。 下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应 ...

相关专题 酶标记物是免疫酶技术中的关键试剂。由于具备易于提取、价格实惠、性质稳定等优点，HRP已成为ELISA实验中应用最广泛的标记酶。由于HRP在辣根中含量很高，因为又称为辣根过氧化物酶。 HRP是一种分子量达44 000的糖蛋白，由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成，中性糖和氨基糖约占18%，主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每 ...

相关专题 IL-4可作为B细胞增殖的促进因子，1982年在T细胞培养上清中首次被发现，1986年被成功克隆，并统一命名为白细胞介素4。IL-4除了可作为肿瘤免疫调节剂外，近来还发现可能其可能为败血症休克的治疗提供一个新的靶点。 1982年Howard在T细胞培养上清中发现一种促进B细胞增殖的因子， 起初命名为B细胞生长因子-1 (B cel ...

相关专题 ELISA实验操作中常见问题分析 由于 ELISA(酶联免疫试验)具有灵敏度较高、特异性好的特点，已广泛应用于各种传染性疾病的筛查如肝炎、爱滋、优生优育等。虽然洗板只是ELISA实验重要环节中的一个，但作为专业的洗板机生产厂家，我们必须对影响ELISA实验结果各因素有一定的认识。优质的 试剂 ，良好的仪器和正确的操作是保证ELIS ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 一、为达到免疫组织化学技术的要求，组织固定越新鲜越好。 在免疫组化最后结果的判断时，常可见到均匀一片的似非特异性染色的现象，经多方研究认为，它是一种假性非特异性的染色。因为肿瘤组织中含有的抗原较易发生扩散弥散，肿瘤细胞无限制的生长和生长过速，导致肿瘤中间部分组织血液供给困难，造成缺血坏死，坏死细胞中的抗原 ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 （一）、仪器设备 1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉； 2）水浴锅 （二）、试剂 1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。 2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（C ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 二步法：EnVision System EnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即&NBSp;EnVision）直接放大信号40-50倍，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点：敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生物素干扰）。 EnVision工作程序： 1） ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 材料二甲苯，酒精（100％，95％），EDTA抗原修复工作液（pH8.0，稀释50倍使用），0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀释10倍使用） DAB显色液（临用前配制：试剂盒A、B、C各50ul，于1ml水中混匀）。方法1. 石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜2. 二甲苯中脱蜡，梯度酒精入 ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 1．固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。Bouin S固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完 ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 一、非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处，坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性，均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。二、非特异性染色的原因1. Ig与Fc受体结合多见于冰冻切片（特别是淋巴造血组织，淋巴细胞，单核细胞，组织细胞表面多），主要是和二抗反应， ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 一、脱蜡和水化 方法同SP法。 二、第一抗体的染色 1、将切片浸在3%H2O2甲醇溶液(新鲜配制)中10min，PBS冲洗3min×3次; 2、加100ul(2滴)血清封闭溶液(试剂1)到切片上，室温孵育10min，倒掉(不能冲洗); 3、加入一抗(按照说明书推荐浓度和孵育条件); 4、使用含有0.05% ...

相关专题 如何实现完美的免疫组化实验 一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点： （1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。 （2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。 （3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Fors ...